Konfokaalinen elinikäinen sarveiskalvomikroskopia

Sarveiskalvon konfokaalimikroskopia on yksi nykyaikaisista tutkimusmenetelmistä; se mahdollistaa sarveiskalvon intravitaalisen seurannan kudosten visualisoinnilla solu- ja mikrorakenteellisella tasolla.

Tämä menetelmä mahdollistaa mikroskoopin alkuperäisen rakenteen ja sen korkean erotuskyvyn ansiosta elävän sarveiskalvokudoksen visualisoinnin , kunkin kerroksen paksuuden mittaamisen ja morfologisten häiriöiden asteen arvioinnin.

Sarveiskalvon konfokaalimikroskopian tarkoitus

Sarveiskalvon morfologisten muutosten karakterisointi erilaisissa tulehduksellisissa ja dystrofisissa sairauksissa sekä kirurgisten toimenpiteiden ja CL:lle altistumisen seurauksena.

Morfologisen tutkimuksen tiedot ovat välttämättömiä patologisen prosessin vakavuuden, hoidon tehokkuuden arvioimiseksi ja potilaan hoidon taktiikan määrittämiseksi.

Menettelyn tiedot

• Sarveiskalvon tulehdussairaudet ( keratiitti ).
• Sarveiskalvon dystrofiset sairaudet ( keratokonus, Fuchsin dystrofia jne.).
• Kuivan silmän oireyhtymä.
• Sarveiskalvon kirurgisten toimenpiteiden jälkeiset tilat ( sarveiskalvon läpäisevä siirto, keratorefraktiiviset leikkaukset).
• Piilolinssien käyttöön liittyvät sairaudet.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]

Valmistautuminen

Tämä tutkimus voidaan suorittaa ilman nukutusaineita. Konfokaalimikroskoopin objektiiville tiputetaan pisara immersionestettä. Tämä estää linssin suoran kosketuksen sarveiskalvoon ja minimoi epiteelin vaurioitumisriskin.

[ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]

Tekniikka sarveiskalvon konfokaalimikroskopia

Tutkimus tehdään ConfoScan 4 (Nider) -konfokaalimikroskoopilla, jonka suurennus on 500 kertaa. Laitteella sarveiskalvoa voidaan tutkia koko sen paksuudelta.

Tutkittavan alueen koko on 440 × 330 μm, skannauskerroksen paksuus on 5 μm. Geelipisaralla varustettu linssi tuodaan sarveiskalvolle, kunnes se koskettaa sitä, ja asennetaan siten, että immersionestekerroksen paksuus on 2 mm. Laitteen rakenne mahdollistaa sarveiskalvon tutkimisen keskialueella ja sen parasentraalisilla alueilla.

Vastaukset menettelyyn

Suhteellinen vasta-aihe on vakava silmä-ärsytys akuutin tulehdusprosessin vuoksi.

[ 10 ], [ 11 ]

Normaali suorituskyky

Sarveiskalvon normaali morfologinen kuva

Etuepiteeli koostuu 5–6 solukerroksesta. Koko epiteelin keskimääräinen paksuus on noin 50 µm. Morfologisen rakenteen mukaan erotetaan seuraavat kerrokset (sisältä ulospäin): tyvisoluiset, naskalimaiset solut ja pinnalliset solukerrokset.

• Sisimmän (tyvikerroksen) muodostavat pienet, tiheät, sylinterimäiset solut, joilla ei ole näkyvää tumaa. Tyvisolujen rajat ovat selkeät ja kirkkaat.
• Keskimmäinen kerros koostuu 2–3 kerroksesta piikikkäitä (siivekkäitä) soluja, joissa on syviä invaginaatioita, joihin naapurisolujen ulokkeet ovat uponneet. Mikroskooppisesti solurajat ovat melko selvästi erotettavissa, ja tumat eivät välttämättä ole määriteltyjä tai ne voivat olla epäselviä.
• Epiteelin pinnallinen kerros koostuu yhdestä tai kahdesta kerroksesta monikulmaisia soluja, joilla on selkeät rajat ja homogeeninen tiheys. Tumat ovat yleensä kirkkaampia kuin sytoplasma, jossa voidaan erottaa myös perinukleaarinen tumma rengas.

Pinnallisen kerroksen soluista erotetaan tummia ja vaaleita soluja. Epiteelisolujen lisääntynyt heijastavuus osoittaa niiden aineenvaihdunnan hidastumista ja alkavaa hilseilyä.

Bowmanin kalvo on läpinäkyvä rakenne, joka ei heijasta valoa, joten sitä on yleensä mahdotonta visualisoida konfokaalimikroskopialla.

Subbasaalinen hermopunos sijaitsee Bowmanin kalvon alla. Normaalisti hermokuidut näkyvät kirkkaina, yhdensuuntaisina raidoina tummalla taustalla, jotka koskettavat toisiaan. Heijastavuus (heijastavuus) voi olla epätasaista kuidun pitkin.

Sarveiskalvon strooman pinta-ala on 80–90 % sarveiskalvon paksuudesta ja se koostuu solu- ja solunulkoisista osista. Strooman tärkeimmät soluelementit ovat keratosyytit, jotka muodostavat noin 5 % tilavuudesta.

Tyypillinen strooman mikroskooppinen kuva sisältää useita kirkkaita, epäsäännöllisiä, soikeita kappaleita (keratosyyttitumakkeita), jotka sijaitsevat läpinäkyvän tummanharmaan tai mustan matriisin paksuudessa. Normaalisti solunulkoisten rakenteiden visualisointi on mahdotonta niiden läpinäkyvyyden vuoksi. Strooma voidaan ehdollisesti jakaa alikerroksiin: etukerroksiin (jotka sijaitsevat suoraan Bowmanin kalvon alla ja muodostavat 10 % strooman paksuudesta), etu-keskikerroksiin, keskikerroksiin ja takakerroksiin.

Keratosyyttien keskimääräinen tiheys on suurempi etummaisessa stroomassa ja pienenee vähitellen kohti takakerroksia. Etummaisten strooman solujen tiheys on lähes kaksi kertaa suurempi kuin takimmaisten strooman solujen tiheys (jos etummaisten strooman solujen tiheys on 100 %, takimmaisten strooman solujen tiheys on noin 53,7 %). Etummaisessa stroomassa keratosyyttien tumat ovat pyöreän, pavun muotoisia, kun taas takimmaisessa stroomassa ne ovat soikeita ja pitkänomaisempia.

Keratosyyttien tumat voivat vaihdella kirkkaudeltaan. Erilainen kyky heijastaa valoa riippuu niiden aineenvaihduntatilasta. Kirkkaampia soluja pidetään aktivoituneina keratosyytteinä ("stressisoluina"), joiden toiminnan tarkoituksena on ylläpitää sarveiskalvon sisäistä homeostaasia. Normaalissa ja näkökentässä on yksittäisiä aktivoituneita soluja.

Sarveiskalvon etuosan strooman hermokuidut näkyvät kirkkaina homogeenisina juovina, jotka usein muodostavat haarautumisia.

Descemetin kalvo on normaalisti läpinäkyvä, eikä sitä voida visualisoida konfokaalimikroskopialla.

Takaepiteeli on kuusikulmaisten tai monikulmaisten litteiden solujen yksikerroksinen kerros, jonka pinta on tasaisen vaalea ja taustalla on selkeät, tummat solujen väliset rajat.

Laitteella on kyky laskea solutiheys, niiden pinta-ala ja vaihtelukerroin manuaalisesti tai automaattisesti.

Patologiset muutokset sarveiskalvon rakenteessa

Keratokonukselle on ominaista merkittävät muutokset sarveiskalvon etummaisessa epiteelissä ja stroomassa.

[ 12 ], [ 13 ], [ 14 ], [ 15 ], [ 16 ], [ 17 ], [ 18 ], [ 19 ], [ 20 ]