Epstein-Barr-viruksen verikoe vasta-aineita ja PCR: miten läpäistä, normit

Herpeksellä olemme tottuneet ymmärtämään rumia, kivuliaita rakkuloita kasvoilla huulien alueella, jotka myöhemmin muodostavat ruskeita rupia. Valitettavasti tämä on vain yksi herpesviruksen ilmentymistä, jota voi esiintyä ihmisillä kahdeksassa muodossa. Yleensä herpekseksi kutsumme tyypin 1 virusta eli herpes simplex -virusta. Tyypin 2 virus aiheuttaa sukupuolielinten herpestä, tyyppi 3 - vesirokkoa ja vyöruusua, tyyppi 4 - tarttuvaa mononukleoosia ja useita muita melko vaarallisia sairauksia jne. Tätä listaa voidaan jatkaa, mutta keskitymme nyt tyypin 4 herpesvirukseen, jota kutsutaan myös Epstein-Barr-virukseksi. Yritetään selvittää, mikä tyypin 4 herpesvirus on, miksi se on vaarallinen, milloin ja miksi Epstein-Barr-virustesti tehdään ja mitä laboratoriokokeiden tulokset osoittavat.

Mikä on herpesvirus tyyppi 4?

Herpesvirus tyyppi 4, yksi herpesvirusinfektion muunnoksista, kuvattiin 53 vuotta sitten englantilaisen virologin Michael Epsteinin toimesta. Professoria avusti projektissa hänen jatko-opiskelijansa Yvonne Barr. Virus on saanut nimensä juuri näiltä ihmisiltä. 15 vuotta viruksen löytämisen jälkeen sen tieteellinen nimi muutettiin kuitenkin ihmisen herpesvirus 4:ksi, ja vuosi sitten virusta kutsuttiin ihmisen gammavirus tyypiksi 4.

Mutta mikä on Epstein-Barrin virus? Kuten minkä tahansa muun viruksen, herpesvirus tyypin 4 virioni (viruspartikkeli) koostuu geneettisestä materiaalista (tässä tapauksessa kaksijuosteisesta DNA:sta) ja sitä ympäröivästä proteiinikuoresta (kapsidista). Lisäksi virusta ympäröi kalvo, jonka avulla se pääsee helposti isännän soluihin.

Mikä tahansa virus on soluton muoto, joka on tarttuva tekijä, eikä se voi kehittyä ja lisääntyä elävän organismin solujen ulkopuolella. Herpesvirus tyyppiä 4 pidetään nenänielun epiteelisoluina. Ne eivät myöskään halveksi leukosyyttejä, vaan suosivat yhtä niiden lajikkeista, joita kutsutaan B-lymfosyyteiksi. Juuri B-solut osallistuvat aktiivisesti kehon immuunipuolustuksen tarjoamiseen. Joutuessaan kosketuksiin antigeenin kanssa, joka meidän tapauksessamme on herpesvirus tyyppi 4 (tai pikemminkin sen antigeenit), B-lymfosyytit tuottavat vasta-aineita (immunoglobuliiniproteiineja). Ne voidaan havaita potilaan verestä Epstein-Barr-viruksen (EBV) analyysillä.

Herpesvirus-tyypin 4 antigeenit esiintyvät tiukasti määritellyssä järjestyksessä:

• EA on varhainen antigeeni, joka ilmenee taudin alkuvaiheessa, kun viruspartikkelit ovat synteesivaiheessa (primaarinen akuutti infektio tai piilevän viruksen uudelleenaktivoituminen, kun immuniteetti on heikentynyt),
• VCA on kapsidiantigeeni, joka sisältyy proteiinikuoreen ja kuuluu myös varhaisiin, koska kliinisesti tauti ei välttämättä edes ilmene tänä aikana,
• MA – kalvoantigeeni, ilmestyy, kun virioni on jo muodostunut,
• EBNA – ydin- (polypeptidi- tai ydin-) antigeeni on yksi myöhäisistä antigeeneistä, joiden vasta-aineita voidaan havaita jopa useita kuukausia taudin jälkeen ja ne pysyvät veressä koko elämän ajan.

Herpesvirus tyyppi 4 on hyvin salakavala. Koska virus on passiivinen elävän organismin ulkopuolella, se voi tarttua vain tartunnan lähteenä olevalta henkilöltä. Eikä ole lainkaan välttämätöntä, että hän osoittaa kaikkia taudin oireita; infektio voi olla piilevä, naamioitunut tavalliseksi väsymykseksi. Esimerkiksi krooninen väsymysoireyhtymä liittyy useimmissa tapauksissa Epstein-Barr-virukseen.

Yksittäisiä virioneja voi löytyä verestä, syljestä, siittiöistä, emättimen eritteistä ja eri elinten kudoksista. Virushiukkaset voivat syljen ja veren mukana päästä ympärillämme oleviin esineisiin, joissa ne pysyvät inaktiivisina, kunnes ne jotenkin pääsevät ihmiskehoon. Valtaosassa tapauksista tartunta tapahtuu ilmassa olevien pisaroiden tai kosketuksen (suutelun kautta) välityksellä. Mutta viruksen siirtyminen kohdunsisäisesti äidistä sikiöön, tartunta verensiirron aikana (jos luovuttajan veri sisälsi virusvirioneja) ja seksuaalinen kontakti ovat myös mahdollisia.

Kun tauti on joutunut elimistöön ja tunkeutunut solurakenteisiin, voi kestää 5–50 päivää ennen kuin se ilmenee. Se ei kuitenkaan välttämättä ilmene, vaan etenee piilevässä muodossa, kuten useimmissa tapauksissa.

Kyllä, tutkimusten mukaan noin 90 % aikuisväestöstä on sairastanut EBV:hen liittyvän herpesinfektion ainakin kerran elämässään. Useimmat ihmiset eivät edes tiedä sitä, koska heidän kehonsa pystyy torjumaan virushyökkäyksen. Mutta näin ei ole aina.

Miten Epstein-Barr-virus ilmenee?

Useimmiten lääkäreiden on käsiteltävä käytännössä seuraavia herpesvirusinfektion tyypin 4 tyyppejä:

• Krooninen muoto (esiintyy taudin akuutin vaiheen jälkeen, sillä on joitakin yleisiä sairauden oireita),
• Latentti tai piilotettu muoto (oireita ei ole, mutta virus pysyy aktiivisena ja vapautuu ympäristöön),
• Hidas muoto (harvinaisempi, oireet ilmenevät yksi kerrallaan pitkän ajan kuluessa ja päättyvät potilaan kuolemaan).

Ihmiset saavat ensimmäisen Epstein-Barr-viruksen tartunnan pääasiassa lapsuudessa ja nuoruudessa. Tartunnan ilmaantuvuus on huipussaan 14–18-vuotiailla.

Primaarisella virusinfektiolla on kolme eri muotoa:

• oireeton (ei kliinisiä oireita),
• hengitystie (hengitystieinfektion oireet: kuume, nenän vuotaminen, yleinen heikkous jne.),
• Tarttuva mononukleoosi, jolla on kolme pääoiretta: korkea kuume, kurkkukivun merkit ja kellertävät ruvet nielurisoissa, elinten, kuten maksan ja pernan, suureneminen; leukosyyttien määrä kasvaa ja imusolmukkeet suurenevat.

Taudin akuutista vaiheesta on useita vaihtoehtoja päästä eroon:

• täydellinen toipuminen,
• taudin oireet häviävät, mutta virus jää elimistöön ja kehittyy, vaikka se ei enää johdakaan havaittaviin muutoksiin soluissa (kantajatila),
• taudilla ei ole oireita, virus ei poistu kehosta, mutta osoittaa myös vähän aktiivisuutta (latentti muoto),
• viruksen uudelleenaktivoituminen piilevästä muodosta
• krooninen infektion kulku (taudin relapsien kanssa, krooninen aktiivinen muoto, yleistynyt elinten ja kehon järjestelmien vaurioihin).

Viruksen pitkäaikaisen pysymisen seurauksena kehossa voi olla:

• Tarttuvan mononukleoosin krooninen muoto.
• Hematofagosyyttinen oireyhtymä: vakaa kuume, veren hyytymiskyky laskenut (lisääntynyt veren hyytyminen), suurentunut maksa ja perna, limakalvojen verenvuoto, keltaisuus (maksan toimintahäiriön vuoksi), suurentuneet imusolmukkeet, neurologiset oireet.
• Latentti muoto, jossa kehittyy sekundaarinen immuunipuutos: pitkäaikainen hypertermia, yleinen heikkous, imusolmukkeiden suureneminen ja arkuus, lihas- ja nivelkipu, usein tartuntataudit.
• Autoimmuunisairauksien kehittyminen lupus erythematosuksen, nivelreuman jne. muodossa.
• Kroonisen väsymysoireyhtymän ilmentymät yleisen hyvinvoinnin ja suorituskyvyn heikkenemisen myötä.
• Yleistynyt krooninen infektio, johon liittyy keskushermoston, sydänlihaksen, munuaisten, maksan ja keuhkojen vaurioita.
• Onkologisten sairauksien (lymfosyyttinen leukemia ja lymfoomat) kehittyminen, joissa havaitaan imusuoniston solujen määrän patologista kasvua. Herpesvirus tyyppi 4 ei tuhoa kantajasoluja, vaan pakottaa ne lisääntymään aktiivisesti, minkä seurauksena havaitaan imukudoksen kasvaimia.

Kuten voimme nähdä, Epstein-Barr-virus ei ole niin vaaraton kuin ensi silmäyksellä näyttää, mikä tarkoittaa, että sitä ei pidä käsitellä huolimattomasti. Lisäksi herpesvirus 4:lle on ominaista usein esiintyvät viruskantajat ja piilevä muoto, puhumattakaan erilaisista kroonisista infektiomuodoista, kun henkilö pysyy tartunnan lähteenä edes epäilemättä sitä.

Tässä tapauksessa tartuntataudinaiheuttajan läsnäolo elimistössä voidaan määrittää vain käyttämällä erityistä Epstein-Barr-viruksen analyysiä, jonka biomateriaali on yleensä veri.

Menettelyn tiedot Epstein-Barr-virustesti.

Koska herpesvirusinfektio tyyppiä 4 ei ole aina niin helppo havaita, sitä ei aina epäillä. Mutta on olemassa tiettyjä merkkejä, joiden perusteella lääkäri voi epäillä viruksen esiintymistä kehossa:

• vakavasti heikentynyt immuunijärjestelmä (HIV-infektion ja AIDSin potilaat, elinsiirron tai kemoterapian jälkeiset potilaat ovat vaarassa),
• alueellisten imusolmukkeiden suureneminen pään leuassa ja takaraivossa ja niiden arkuus, erityisesti jos tämä havaitaan luovuttajalta tehdyn verensiirron tai elinsiirron jälkeen.
• akuutti hengitystievirusinfektio (ARVI), joka esiintyy erittäin korkeiden lämpötilojen (38–40 astetta) taustalla,
• tarttuvan mononukleoosin oireiden ilmaantuminen, joka esiintyy useimmiten Epstein-Barr-viruksen vaikutuksen alaisena.

Vaikka henkilöllä ei olisikaan edellä mainittuja oireita, asiantuntija voi epäillä joitakin rutiinikokeiden (yleinen verikoe ja biokemia) sekä immuunijärjestelmän tilan tutkimusten tuloksia.

Epstein-Barr-viruksen täydellinen verenkuva voi osoittaa:

• lymfosyyttien määrän lisääntyminen,
• alhainen hemoglobiini, joka osoittaa punasolujen määrän laskua,
• lisääntynyt veren hyytyminen suuren verihiutalemäärän vuoksi,
• virosyyttien (epätyypillisten lymfosyyttien, jotka ovat rakenteeltaan samanlaisia kuin monosyytit) ulkonäkö.

Biokemiallinen verikoe, joka antaa tietoa sisäelinten tilasta, näyttää muutoksia maksan ja pernan toiminnassa.

EBV-immunomääritys voi osoittaa spesifisten lymfosyyttien määrän muutoksen, eri luokkien immunoglobuliinien määrän eron (dysimmunoglobulinemia) ja immunoglobuliini G:n puutoksen, mikä viittaa heikkoon immuunijärjestelmään ja sen kyvyttömyyteen hillitä viruksen hyökkäystä.

Tällaiset epäspesifisten analyysien tulokset saattavat varoittaa lääkäreitä, mutta on silti mahdotonta sanoa tarkalleen, mistä on kyse. Kaikki pysyy oletusten ja alustavan diagnoosin vaiheessa. Useimmissa tapauksissa lääkärit epäilevät tarttuvan mononukleoosin piilevää muotoa, vaikka muut virusperäiset sairaudet (influenssa, hepatiitti jne.) voivat ilmetä samalla tavalla.

Hepatiitti tyypin 4 korkean esiintyvyyden ja sen mahdollisen siirtymisen äidiltä lapselle vuoksi Epstein-Barr-virustesti on hyödyllinen myös raskautta suunniteltaessa. Jos äiti on aiemmin kärsinyt infektiosta, hänen elimistönsä on kehittänyt vasta-aineita sitä vastaan. Uudelleeninfektio on yleensä poissuljettu vahvan immuniteetin muodostumisen vuoksi, ja jos se tapahtuu, sillä ei enää ole samoja seurauksia kuin ensimmäisellä kohtaamisella viruksen kanssa. Immuniteetti hillitsee viruksen toimintaa koko elämän ajan, vaikka itse virus pysyy elimistön sisällä, kuten mikä tahansa herpesvirus.

Jos odottava äiti saa herpesviruksen raskauden aikana, se voi johtaa keskenmenoihin ja ennenaikaisiin synnytyksiin, tai virus vaikuttaa negatiivisesti vauvan kohdunsisäiseen kehitykseen.

Onkologi voi määrätä EBV-testin, jos epäillään Burkettin lymfoomaa tai diagnosoidakseen kasvainprosesseja HIV-positiivisilla. Terapeutti voi käyttää tätä testiä herpesinfektioiden diagnosointiin (erotusdiagnostiikka virustyypin määrittämiseksi). Joskus testiä käytetään myös hoidon tehokkuuden arviointiin.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]

Valmistautuminen

Tutkimuksen tyypistä riippuen biomateriaalina voidaan käyttää verta, sylkeä, virtsaa, ysköstä, lapsivesinäytettä, kohdunkaulan kanavan tai virtsaputken kaavintaa, aivo-selkäydinnestettä (CSF). Useimmiten lääkärit turvautuvat verikokeihin, joita pidetään informatiivisimpina.

On selvää, että jotkut tekijät voivat vaikuttaa negatiivisesti biomateriaalin laatuun ja määrään, joten kannattaa noudattaa tiettyjä sääntöjä edellisenä päivänä:

• Kaikki testit (erityisesti verikokeet) suositellaan tehtäväksi aamulla tyhjään vatsaan. Viimeisen aterian tulisi olla viimeistään 12 tuntia ennen verinäytteenottoa, joten on parempi juoda vettä illalliseksi.
• Hyväksyttävin materiaali Epstein-Barr-viruksen analysoimiseksi pidetään laskimoverena, ja ennen veren luovuttamista laskimosta suositellaan aina 15 minuutin lepoa, jos henkilö on juuri saapunut laboratorioon.
• Jotta verinäytteenotto sujuisi seurauksetta ja testitulokset olisivat luotettavia, ei ole suositeltavaa tehdä aktiivista fyysistä työtä tai urheilla, juoda alkoholia tai tupakoida 12 tuntia ennen toimenpidettä.
• Myös käyttämäsi lääkkeet voivat vaikuttaa testituloksiin. Sinun tulee lopettaa lääkkeiden käyttö vähintään kaksi päivää ennen testiä. Jos tämä ei ole mahdollista, sinun on ilmoitettava laboratoriohoitajalle käyttämistäsi lääkkeistä.
• Raskauden aikana ennen EBV-testiä tehdään toksoplasmoositesti väärän positiivisen reaktion poissulkemiseksi.
• Jos alle 5-vuotiaalle lapselle tehdään verikoe Epstein-Barr-viruksen varalta, lapselle tulee antaa puoli tuntia ennen toimenpidettä juotavaksi paljon keitettyä vettä suhteellisen pieninä annoksina.

Jos analyysiin otetaan toinen biomateriaali, sinun on selvitettävä lääkärisi kanssa etukäteen kaikki analyysin valmistelun vivahteet käytetystä materiaalista riippuen.

[ 10 ], [ 11 ], [ 12 ]

Tekniikka Epstein-Barr-virustesti.

Lääkärit antavat tärkeän roolin herpes tyypin 4 ja tarttuvan mononukleoosin diagnosoinnissa erityisille testeille, jotka auttavat tunnistamaan viruksen DNA:n tai ainutlaatuiset vasta-aineet potilaan biomateriaalissa. Epstein-Barr-viruksen havaitsemiseksi ihmiskehossa käytettäviä laboratoriotestejä ovat entsyymi-immunosorbenttimääritys (ELISA) ja PCR-diagnostiikka. Tarkastellaanpa tarkemmin molempien menetelmien ydintä ja niiden toteutuksen ominaisuuksia.

EBV-entsyymi-immunomääritys

ELISA on potilaiden laskimoveren tutkimus (analyysi) Epstein-Barr-viruksen vasta-aineiden varalta. Diagnostiikan tuloksena EBV-potilaiden verestä havaitaan IgG- tai IgM-tyyppisiä immunoglobuliineja (joita on yhteensä 5 tyyppiä) yhdelle viruksen kolmesta antigeenistä (varhainen, kapsidi- tai ydinantigeeni).

Analyysi suoritetaan immunologisessa laboratoriossa, jossa potilaan laskimosta otetaan noin 10 ml verta. Biomateriaali jätetään sitten huoneenlämpöön varttitunniksi, jonka aikana veri hyytyy. Hyytymä erotetaan huolellisesti nestemäisestä osasta. Neste sentrifugoidaan ja saadaan puhdasta veriseerumia. Tätä tutkitaan tarkemmin.

Menetelmän idea syntyi tiedon pohjalta, jonka mukaan kehomme tuottaa spesifisiä vasta-aineita jokaista kehoon ulkopuolelta tunkeutuvaa virus- ja bakteerityyppiä vastaan. Keho tunnistaa ne vieraiksi ja tuhoaa ne ainutlaatuisten, antigeeniin tiukasti kiinnittyvien vasta-aineiden avulla.

ELISA-analyysin ydin perustuu tähän reaktioon. Vasta-aineet, joihin on kiinnitetty merkkiaineita, yhdistyvät antigeenien kanssa. Merkkeihin levitetään ainetta, joka muuttaa näytteen väriä reagoidessaan erityisen entsyymin kanssa. Mitä enemmän tällaisia "ketjuja", sitä intensiivisempi biomateriaalin väri on.

Entsyymi-immunomääritys voidaan suorittaa kolmella menetelmällä:

• Suora ELISA. Testineste kaadetaan kuoppiin ja annetaan seistä noin puoli tuntia, jotta antigeenit voivat kiinnittyä kuopan seinämiin. Sorboituneisiin antigeeneihin lisätään nestettä, jossa on merkittyjä vasta-aineita. Vaaditun ajan (puolesta tunnista viiteen tuntiin) kuluttua, kun vasta-aineet ovat havainneet ja sitoutuneet antigeeneihin, neste valutetaan, kuopat pestään huolellisesti ja niihin lisätään entsyymi. Viruksen pitoisuus veriyksikössä määritetään väritysmenetelmällä.
• Epäsuora ELISA. Tässä menetelmässä testattava veriseerumi ja leimatut vasta-aineet lisätään kuoppien pinnalle adsorboituneisiin antigeeneihin. Tuloksena saadaan kahdenlaisia ligamentteja, joista osa on merkittyjä. Tulos riippuu testattavan näytteen antigeenien pitoisuudesta. Mitä enemmän leimaamattomia vasta-aineita, sitä vähemmän entsyymin leimaamia yhdisteitä.

Seuraavaksi pestyyn koostumukseen lisätään erityinen reagenssi, jota käytetään antigeeni-vasta-ainekompleksien entsymaattisen aktiivisuuden määrittämiseen.

• "Voileipä". Eroaa epäsuorasta menetelmästä siinä, että aluksi pinnalle ei sorboidu antigeenejä, vaan vasta-aineita. Niihin lisätään tutkittavia antigeenejä sisältävä liuos. Kantajan pesun jälkeen lisätään entsymaattisilla leimoilla varustettuja vasta-aineita. Ylimääräiset vasta-aineet poistetaan uudelleen ja vetyperoksidia käyttäen saadaan värillinen aine, jota tutkitaan spektrometrisellä menetelmällä.

Tämän tyyppinen analyysi mahdollistaa paitsi spesifisten vasta-aineiden tunnistamisen ja antigeenien pitoisuuden määrittämisen, myös taudin vaiheen selventämisen. Tosiasia on, että Epstein-Barr-viruksen eri antigeenit esiintyvät herpesinfektion eri vaiheissa, mikä tarkoittaa, että niitä vastaan tuotetaan vasta-aineita tietyssä taudin vaiheessa.

Näin ollen varhaisen antigeenin (IgG EA) IgG-vasta-aineita ilmaantuu vereen 1-2 viikkoa infektion jälkeen, kun tauti on akuutissa vaiheessa tai viruksen uudelleenaktivoitumisvaiheessa. Tämän tyyppiset immunoglobuliinit häviävät 3-6 kuukauden kuluttua. Kroonisessa virusinfektiossa tällaisia vasta-aineita on erityisen paljon, ja epätyypillisessä muodossa ne puuttuvat kokonaan.

Kapsidiantigeenin IgG-vasta-aineet (IgG VCA) ilmestyvät myös varhain, taudin ensimmäisten neljän viikon aikana, mutta niiden suurin määrä määräytyy infektion toisen kuukauden aikana. Akuutissa vaiheessa niitä esiintyy useimmilla potilailla, mutta niitä ei välttämättä esiinny lapsilla. Taudin kroonisessa kulussa, erityisesti viruksen uudelleenaktivoitumisen aikana, IgG VCA:n määrä on erityisen korkea. Nämä vasta-aineet pysyvät ihmisen veressä ikuisesti, kuten itse virus, mikä osoittaa muodostuneen immuniteetin tartuntatekijää vastaan.

Kapsidiantigeenin IgM-vasta-aineet (IgM VCA) voivat ilmetä jo ennen taudin ensimmäisiä merkkejä. Niiden pitoisuus (tiitterit) on erityisen korkea taudin ensimmäisten 6 viikon aikana. Tämän tyyppiset vasta-aineet ovat tyypillisiä akuutille infektiolle ja kroonisen infektion uudelleen aktivoitumiselle. IgM VCA häviää 1–6 kuukauden kuluessa.

Ydingeenin (IgG EBNA) IgG-vasta-aineet voivat viitata siihen, että henkilö on aiemmin kokenut herpesinfektion. Taudin akuutissa vaiheessa niitä havaitaan erittäin harvoin, yleensä toipumisvaiheessa (3.–10. kuukauden aikana). Niitä voidaan havaita verestä useita vuosia tartunnan jälkeen.

Yksittäisten antigeenien havaitseminen ei anna täydellistä kuvaa taudista, joten eri vasta-aineiden testit tulisi suorittaa yhdessä. Esimerkiksi jos läsnä on vain IgM VCA:ta eikä IgG EBNA:ta havaita, kyseessä on primaariinfektio.

Valitettavasti entsyymi-immunomääritys on usein riittämätön primaarisen herpesinfektion tai synnynnäisen sairauden havaitsemiseksi. Jälkimmäisessä tapauksessa vasta-aineita ei välttämättä havaita ollenkaan. Primaarisen sairauden vahvistamiseksi käytetään veren tai muun biologisen materiaalin molekyylitutkimusta Epstein-Barr-viruksen varalta.

PRC-analyysi Epstein-Barr-virukselle

Tämä analyysi suoritetaan akuutin primaarisen infektion vaiheessa, muuten sen tulos on virheellinen.

PCR-menetelmän (polydimensionaalinen ketjureaktio) ydin on se, että jokaisella tartuntatekijällä on oma geenijoukkonsa DNA-molekyylissä. Taudinaiheuttajan DNA:ta on tutkimukseen otetussa biomateriaalissa pieninä määrinä (virukset itse ovat mikroskooppisen pieniä), joten tilanteen arviointi on erittäin vaikeaa. Mutta jos suoritetaan tietty reaktio, geneettisen materiaalin määrä kasvaa merkittävästi, mikä mahdollistaa taudinaiheuttajan nimeämisen.

Kertakäyttöisillä instrumenteilla otetaan materiaalia molekyylitutkimusta varten, ja se asetetaan erityiseen analyysilaitteeseen. Laite on termostaatti, jossa on erityisohjelma - lämpösykleri tai vahvistin. Laite suorittaa täyden PRC-syklin useita kymmeniä kertoja (noin 2-3 minuuttia), jossa on kolme vaihetta:

• Denaturointi (95 asteen lämpötilassa DNA-säikeet erotetaan).
• Hehkutus (75 asteen lämpötilassa tutkittavaan materiaaliin lisätään erityisesti valmistettuja EBV:n "alukkeita", jotka kiinnittyvät viruksen DNA:han).
• Geneettisen materiaalin pidentäminen tai moninkertaistaminen (siemeneen lisätään erityinen entsyymi 72 asteen lämpötilassa, joka luo uuden DNA-ketjun ja kaksinkertaistaa siten geneettisen materiaalin määrän).

Jos polydimensionaalisen reaktion koko sykli suoritetaan 50 kertaa, materiaalin määrä kasvaa 100-kertaiseksi. Tämä tarkoittaa, että taudinaiheuttajan tunnistaminen on paljon helpompaa.

Epstein-Barr-virustesti lapselle

Kuten jo tiedämme, Epstein-Barr-virus voi aiheuttaa monien sairauksien kehittymistä. Kun se pääsee ihmiskehoon, se jää pysyväksi asukkaaksi, ja vain immuunijärjestelmän hyvin koordinoitu työ estää sitä loisumasta aktiivisesti solujen sisällä.

Lähes 95 % maailman aikuisväestöstä elää EBV:n kanssa, ja useimmat heistä tutustuivat virukseen varhaislapsuudessa. Jotkut perivät sen äidiltään, kun taas toiset saivat viruksen vanhemmilta ja sukulaisilta, jotka ryntäsivät lapsen luo suukkojen kanssa, tai ilmassa olevien pisaroiden välityksellä päiväkodissa tai koulussa (tartuntataudit saavat siellä yleensä "yleismaailmallisia" mittasuhteita).

Pienet lapset yleensä laittavat kaiken suuhunsa, ja eniten virioneja löytyy syljestä. Ja jos useat lapset nuolevat samaa lelua päiväkodissa, kun opettajat ovat kiireisiä omien asioidensa kanssa, ei ole yllättävää, että virus leviää niin aktiivisesti suurissa lapsiryhmissä.

EBV:tä voidaan helposti kutsua lasten ja nuorten taudiksi, sillä murrosikään mennessä puolella lapsista on jo virus elimistössään (ja 30-vuotiaana noin 90 % aikuisista). Eri-ikäiset lapset sairastuvat omalla tavallaan. Vuoden ikään asti, kun lapsi ei aktiivisesti kommunikoi ihmisten kanssa, hänen sairastumisensa todennäköisyys on pieni. Yli vuoden ikäinen lapsi, vaikka hän ei olisi käynyt päiväkodissa, tulee sosiaalisemmaksi, leikkii ikätovereidensa kanssa kadulla, käy aktiivisilla ostoksilla äitinsä kanssa jne., ja viruksen saamisen todennäköisyys kasvaa huomattavasti.

Mutta tämä ei ole syy sulkea lasta neljän seinän sisään. 1–3-vuotiaana tauti etenee useimmissa tapauksissa ilman oireita, paitsi ehkä lievän lämpötilan nousun ja lievän nuhan kera, joka muistuttaa vilustumista. Käy ilmi, että mitä aikaisemmin lapsi tutustuu virukseen, sitä helpommin tällainen tutustuminen sujuu.

Ei ole hyvä, jos lapsi sairastuu ilman IgG VCA -vasta-aineiden esiintymistä veressä, mikä voi viitata siihen, että virusta vastaan ei ole muodostunut immuniteettia, ja viruksen uudelleenaktivoituminen on mahdollista heti, kun immuunijärjestelmä heikkenee. Syynä on todennäköisesti pienten lasten immuunijärjestelmän epätäydellisyys, joka on muodostumassa useiden vuosien ajan.

Kouluelämä tarjoaa vielä enemmän edellytyksiä taudille, erityisesti murrosiässä, kun nuoret harjoittelevat aktiivisesti suutelemista. Mutta yli 3-vuotiailla lapsilla tauti on harvemmin oireeton. Useimmissa tapauksissa lääkärit kohtaavat tarttuvan mononukleoosin sen tyypillisillä oireilla.

Huolimatta siitä, että patologialla voi olla pitkä kulku (noin 2 kuukautta), se ei ole niin vaarallinen eikä vaadi vakavien lääkkeiden käyttöä. Lääkärit määräävät tulehduskipulääkkeitä ja antiviraalisia lääkkeitä, ja jos bakteeri-infektio liittyy, he hakevat apua antibiooteista. Muuten, penisilliinejä ei suositella tässä tapauksessa, koska ne voivat aiheuttaa ihottumaa.

Älä luule, että jos lapsi tai teini-ikäinen sairastuu tarttuvaan mononukleoosiin, se tarkoittaa, että Epstein-Barr-virus on asettunut heidän elimistöön. Taudilla on muita, harvinaisempia taudinaiheuttajia, kuten sytomegalovirus (herpesvirus tyyppi 5). Ymmärtääkseen, mistä on kyse, lääkärit määräävät Epstein-Barr-virustestin ja tarvittaessa muita laboratoriokokeita.

On myös totta, että tarttuva mononukleoosi ei ole ainoa EBV:n ilmentymä lapsuudessa. Tähän taudinaiheuttajaan liittyy muitakin sairauksia, mutta ne ovat alueellamme harvinaisia.

Näin ollen Burkittin lymfoomaa (jonka EBV on havainnut) esiintyy pääasiassa lapsilla Afrikan maissa, hyvin harvoin Amerikassa ja vielä harvemmin Euroopassa (ja silloinkin vain AIDSin taustalla). Leukakasvain, jolla on vaurioita imusolmukkeissa, munuaisissa ja muissa elimissä, esiintyy 3-8-vuotiailla lapsilla.

Nenänielun syöpä, merkittävä osa muista lymfoomista, suun karvainen leukoplakia - kaikki nämä ovat EBV:n ilmentymiä HIV-infektion ja sen myöhemmän AIDS-vaiheen yhteydessä esiintyvän huomattavasti heikentyneen immuniteetin taustalla.

Synnynnäinen immuunipuutos ja Epstein-Barr-viruksen lisääminen on vaarallinen seos, joka voi johtaa proliferatiivisen oireyhtymän kehittymiseen lapsella. Tässä tapauksessa B-lymfosyyttien määrän lisääntyminen johtaa rakeiden esiintymiseen monissa elimissä, mikä estää niitä toimimasta normaalisti. Tämä on sairaus, jolla on korkea kuolleisuus, mutta se ei kehity normaalin immuniteetin taustalla.

Voidaan sanoa, että lapsuudessa Epstein-Barr-virus on vaarallinen pääasiassa immuunipuutoksen yhteydessä erilaisten komplikaatioiden kehittymisen vuoksi. Useimmissa tapauksissa kaikki rajoittuu tarttuvaan mononukleoosiin. Ja vaikka se ei vaadi erityishoitoa, lääkärit mieluummin selvittävät taudinaiheuttajan luonteen, jota varten lapselle määrätään yleinen verikoe, entsyymi-immunomääritys ja PCR.

Koska lapsuudessa primaarinen infektio esiintyy pääasiassa, on täysin mahdollista rajoittaa itsensä vain täydelliseen verenkuvaan ja PCR:ään, mikä on varsin informatiivista taudin havaitsemisen yhteydessä.

[ 13 ], [ 14 ], [ 15 ], [ 16 ], [ 17 ], [ 18 ], [ 19 ], [ 20 ], [ 21 ], [ 22 ]

Normaali suorituskyky

PCR-analyysin tulokset käsitellään elektroforeesilla tai käyttämällä merkittyjä "alukkeita". Jälkimmäisessä tapauksessa riittää, että lisätään vain reagenssi (kromogeeni) ja värin perusteella määritetään, onko näytteessä virioneja. Elektroforeesin positiivinen tulos on osoitettu, kun tutkittavassa näytteessä havaitaan eri pituisia DNA-säikeitä.

Taudin itämisaikana ja oireettoman viruskantajuuden aikana PCR antaa negatiivisen tuloksen, samoin kuin viruksen täydellisen puuttumisen tapauksessa elimistössä. Primaarisen infektion kehittymisen alussa ja sen alkuvaiheessa PCR voi reaaliajassa antaa sekä positiivisia että negatiivisia tuloksia, mikä ei selvennä tilannetta millään tavalla.

Kuitenkin taudin keskivaiheilla (akuutti vaihe), sen kroonisessa vaiheessa tai viruksen uudelleen aktivoituessa (pahenemisvaihe) ja epätyypillisten muotojen tapauksessa analyysi on positiivinen. Jos henkilö on ollut sairas pitkään ja virus hänen kehossaan on inaktiivisessa tilassa, PCR-analyysi antaa negatiivisen tuloksen, eli tämän analyysin tekeminen tänä aikana on myös sopimatonta, samoin kuin taudin liian varhaisessa vaiheessa.

On sanottava, että tämän tyyppisen laboratoriotutkimuksen tarkat tulokset ovat mahdollisia vain primaarisen infektion ja muiden virusten virionien puuttuessa.

Nyt, Epstein-Barr-viruksen entsyymi-immunomäärityksestä. Sillä on samat vaatimukset. Herpesvirustyyppien 5 tai 6, toksoplasmoosin ja HIV-infektion esiintyminen elimistössä voi vääristää tulosta yhtä lailla kuin huolimaton suhtautuminen analyysiin tai käytettyjen reagenssien heikko laatu. Tässä tapauksessa saatetaan tarvita lisätutkimuksia, joissa otetaan huomioon mahdolliset taudinaiheuttajat.

Normaalit testitulokset, jotka osoittavat viruksen puuttumisen elimistöstä, katsotaan negatiiviseksi tulokseksi kaikissa neljässä testissä: IgG EA, IgM VCA, IgG VCA ja IgG EBNA. Kyllä, jokainen testi tehdään erikseen, koska antigeenit ilmenevät taudin eri vaiheissa. Joskus voidaan määrätä vain yksittäisiä testejä, mutta useimmissa tapauksissa kaikki neljä testiä on tehtävä, mutta taudin eri vaiheissa.

Esimerkiksi taudin itämisaikana sekä ilman infektiota verestä ei havaita yhtäkään neljästä vasta-ainetyypistä. Tällaista tulosta ei voida pitää riittävänä, koska se ei mahdollista erottaa ensimmäistä kertaa sairastunutta terveestä henkilöstä.

Primaarisen taudin kehittymisen alussa veressä esiintyy vain IgM VCA -vasta-aineita. Taudin alkuvaiheessa niihin liittyy IgG VCA -vasta-aineita.

Primaarisen infektion akuutissa vaiheessa muodostuu kolmenlaisia vasta-aineita: IgG VCA, IgM VCA ja IgG EA, ja kapsidiantigeenille havaitaan eniten IgG-vasta-aineita. Sama vasta-ainekoostumus säilyy kuusi kuukautta taudin akuutin vaiheen jälkeen, mutta IgM VCA:n määrä vähenee vähitellen nollaan.

Kuusi kuukautta sairauden jälkeen veressä näkyy IgG EBNA -vasta-aineita, kun taas IgG EA -immunoglobuliineja vähenee yhä vähemmän ja IgM VCA puuttuu kokonaan.

Kroonisissa tautitapauksissa tai viruksen uudelleen aktivoitumisessa voi olla erilaisia indikaattoreita. Useimmiten verestä löytyy kaikkia neljää vasta-ainetyyppiä. Mutta on hyvinkin mahdollista, että immunoglobuliineja IgM VCA ja IgG EBNA ei havaita.

Virusinfektion komplikaatio kasvainprosesseilla tapahtuu IgM VCA -vasta-aineiden puuttuessa, eikä IgG EBNA -immunoglobuliineja havaita kaikissa tapauksissa.

Mutta entsyymi-immunomääritys määrittää paitsi tiettyjen vasta-aineiden läsnäolon myös niiden pitoisuuden, minkä ansiosta voimme arvioida patologian vaiheen ja sen mahdolliset seuraukset tarkemmin. Tässä ei ole tarvetta puhua erityisistä luvuista. Loppujen lopuksi jokainen laboratorio suorittaa analyysin yhdellä mahdollisista tavoista käyttäen erilaisia reagensseja, joten eri laboratorioiden analyysitulokset voivat vaihdella digitaalisessa muodossa.

Potilaalle on annettava lomake, jossa ilmoitetaan kynnysarvot (viitearvot). Jos tulos on kynnysarvon alapuolella, sitä pidetään normaalina (negatiivisena) indikaattorina. Jos määritetty luku on viitearvon yläpuolella, kaikki viittaa positiiviseen tulokseen, mikä tarkoittaa, että virus elää kehossa. Määritetyn arvon arvo osoittaa taudin vaiheen ja elimistön kolonisaation EBV-virioneilla eli patologian vakavuuden.

Jos ELISA-testi on negatiivinen, se tarkoittaa vain sitä, ettei henkilö ole aiemmin ollut tekemisissä EBV:n kanssa. On kuitenkin mahdotonta sanoa varmasti, onko virus elimistössä tällä hetkellä. Negatiivisen tuloksen voi aiheuttaa taudinaiheuttajan itämisaika elimistössä ja oireeton viruksen kantajuus. Joskus on tarpeen tehdä toinen testisarja jonkin ajan kuluttua sen varmistamiseksi, ettei virus ole elimistössä.

Jos Epstein-Barr-viruksen ELISA-tulos ylittää vain hieman viitearvot, tulosta pidetään kyseenalaisena. Syynä on useimmiten taudin varhainen vaihe tai toisen viruksen virionien esiintyminen elimistössä. Tässä tapauksessa on suositeltavaa tehdä uusintatesti EBV:n ja mahdollisesti muiden taudinaiheuttajien varalta kahden viikon kuluttua.

[ 23 ], [ 24 ], [ 25 ], [ 26 ], [ 27 ], [ 28 ], [ 29 ], [ 30 ]

Kysymykseen siitä, kuinka kauan Epstein-Barr-virustestin tekeminen kestää ja milloin tuloksia voi odottaa, ei ole odotettavissa erityisiä vaikeuksia. Vakavasti otettavassa ja hyvin varustetussa laboratoriossa biomateriaalin toimittamisen jälkeen joudut odottamaan enintään kaksi päivää. Kiireellisiä analyysia vaativissa tilanteissa vastauksen voi saada jopa parin tunnin kuluttua.

Epstein-Barr-virustesti tulisi suorittaa luotettavassa laboratoriossa, jossa on sekä laadukkaita reagensseja että päteviä asiantuntijoita. Loppujen lopuksi testi maksaa (eikä se ole mikään pieni summa, yhden tyyppisen vasta-aineen testi maksaa noin 150–170 UAH), enkä haluaisi saada väärää tulosta ja mahdollisesti ottaa yhteyttä uudelleen, mutta eri laboratorioon, uusintatestiä varten.

[ 31 ], [ 32 ], [ 33 ], [ 34 ], [ 35 ]