Hepatiitti A -virus

Viraalinen hepatiitti A on ihmisten tartuntatauti, jolle on ominaista ensisijaisesti maksavaurio ja joka ilmenee kliinisesti myrkytysoireina ja keltaisuutena. S. Feinstone (ym.) löysi hepatiitti A -viruksen vuonna 1973 immuunielektronimikroskopian menetelmällä tartuttamalla apinoita - simpansseja ja marmosetteja. Immuunielektronimikroskopian menetelmän ydin on, että hepatiitti A -potilaan ulosteen suodokseen lisätään spesifisiä vasta-aineita (toipilasseerumia) ja sedimentti altistetaan elektronimikroskopialle. Virusten ja spesifisten vasta-aineiden vuorovaikutuksen vuoksi ne aggregoituvat spesifisesti. Tässä tapauksessa ne on helpompi havaita, ja aggregaatio vasta-aineiden vaikutuksesta vahvistaa taudinaiheuttajan spesifisyyden. S. Feinstonen löytö vahvistettiin vapaaehtoisilla tehdyissä kokeissa.

Hepatiitti A -virus on pallomainen, virionin halkaisija on 27 nm. Genomi koostuu yksijuosteisesta positiivisesta RNA:sta, jonka MD on 2,6 mm. Superkapsidia ei ole. Symmetriatyyppi on kuutiollinen - ikosaedri. Kapsidissa on 32 kapsomeeriä, se muodostuu neljästä polypeptidistä (VP1-VP4). Ominaisuuksiensa mukaan hepatiitti A -virus kuuluu Heparnovirus-sukuun, Picornaviridae-heimoon. Antigeenien suhteen hepatiitti A -virus (HAV - hepatiitti A -virus) on homogeeninen. HAV lisääntyy hyvin simpanssien, paviaanien, hamadryapaviaanien ja marmosettiapinoiden elimistössä. Pitkään virusta ei voitu viljellä. Vasta 1980-luvulla oli mahdollista saada soluviljelmiä, joissa HAV lisääntyy. Aluksi näihin tarkoituksiin käytettiin reesusmakakin alkion munuaissolujen jatkuvia solulinjoja (viljelmä FRhK-4), ja nyt käytetään vihreän apinan munuaissolujen jatkuvaa solulinjaa (viljelmä 4647).

WHO:n asiantuntijoiden suositusten mukaisesti on otettu käyttöön seuraava hepatiitti A -virusmarkkereiden nimikkeistö: hepatiitti A -virus - HAV-vasta-aineet hepatiitti A -virusta vastaan: anti-HAV IgM ja anti-HAV IgG.

HAV on pieni, halkaisijaltaan 27–30 nm oleva hiukkanen, jolla on ikosaedrinen symmetria ja homogeenisuus. Immuuniaggregaatiomenetelmällä saatu elektronogrammi paljastaa elektronitiheitä hiukkasia, joiden pinnalla on symmetrisesti järjestyneitä kapsomeerejä. Negatiivisella kontrastilla valmisteissa näkyy sekä täysiä että tyhjiä hiukkasia. HAV:n nukleokapsidilla, toisin kuin influenssaviruksella, ei ole pinnallisia kohoumia eikä kalvoa. On myös tärkeää, että HAV-virionilla ei ole sydämenmuotoista rakennetta.

Fysikaalis-kemiallisten ominaisuuksiensa perusteella hepatiitti A -virus luokitellaan pikornavirusten heimoon, enterovirusten sukuun sarjanumerolla 72. Tämä taksonomia osoittautui kuitenkin liian epätavalliseksi, ja WHO piti mahdollisena säilyttää terminologia ”hepatiitti A -virus”.

Kuten kaikki Picornaviridae-heimon virukset, hepatiitti A -virus sisältää ribonukleiinihappoa. Jotkut laboratoriot ovat osoittaneet, että hepatiitti A -viruksen genomi voidaan kloonata, mikä avaa mahdollisuuksia rokotteiden hankkimiseen.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

Hepatiitti A -viruksen vastustuskyky

Virus on suhteellisen vastustuskykyinen korkeille lämpötiloille, hapoille, rasvaliuottimille (ei lipideille) ja desinfiointiaineille, ja se sietää hyvin alhaisia lämpötiloja. Kaikki tämä edistää sen pitkäaikaista säilymistä ulkoympäristössä. Huoneenlämmössä se selviytyy useita viikkoja, 60 °C:ssa se menettää tarttuvuuskykynsä osittain 4–12 tunnissa ja kokonaan muutaman minuutin kuluttua 85 °C:ssa. Se on erittäin vastustuskykyinen kloorille, minkä ansiosta se pystyy tunkeutumaan vesijohtoveteen vedenkäsittelylaitosten esteiden läpi.

Yhteenvetona kaikista tiedoista voimme karakterisoida hepatiitti A -virusta seuraavasti:

• luonnollinen isäntä on ihminen;
• koe-eläimet - marmosetit, simpanssit;
• tartuntalähde on uloste;
• tauti on epidemian ja endeeminen;
• tartuntareitti: feko-oraalinen;
• inkubointiaika - 14-40 päivää;
• siirtyminen krooniseen hepatiittiin - ei havaittu.

HAV:n immunologiset ominaisuudet ovat seuraavat:

• Prototyyppiset kannat - Ms-1, CR-326, GВG. Kaikki ovat immunologisesti samankaltaisia tai identtisiä;
• Vasta-aineet - IgM ja IgG - tuotetaan vasteena viruksen rakenneproteiinien käyttöönotolle ja ovat suojaavia;
• I. Ihmisen seerumin gammaglobuliinin suojaava vaikutus – estää tai lieventää tautia, jos sitä annetaan ennen infektiota tai itämisaikana.

NAU:n fysikaalis-kemialliset ominaisuudet ovat seuraavat:

• Morfologia: kuoreton pallomainen kuutiollinen symmetria, kapsidi koostuu 32 kapsomeerista;
• Halkaisija - 27-30 nm;
• Tiheys CsCl:ssa (g/cm3) - 1,38–1,46 (avoimet hiukkaset), 1,33–1,34 (kypsä virioni), 1,29–1,31 (epäkypsyneet virionit, tyhjät hiukkaset);
• Sedimentaatiokerroin - 156-160 kypsää virionia;
• Nukleiinihappo on yksijuosteinen, lineaarinen RNA;
• Suhteellinen molekyylipaino - 2,25 106-2,8 106KD;
• Nukleotidien lukumäärä on 6 500–8 100.

HAV:n stabiilius fysikaalisissa ja kemiallisissa vaikutuksissa on seuraava:

• Kloroformi, eetteri - stabiili;
• Kloori, 0,5–1,5 mg/l, 5 °C, 15 min – osittainen inaktivointi;
• Kloramiini, 1 g/l, 20 °C, 15 min - täydellinen inaktivointi;
• Formaliini, 1:4000, 35–37 °C, 72 h - täydellinen inaktivointi, 1:350, 20 °C, 60 min - osittainen inaktivointi.

Lämpötila:

• 20–70 °C – vakaa;
• 56 °C, 30 min - vakaa;
• 60 °C, 12 h - osittainen inaktivointi;
• 85 °C, 1 min - täydellinen inaktivointi;
• Autoklavointi, 120 °C. 20 min - täydellinen inaktivointi;
• Kuiva lämpö, 180 °C, 1 tunti - täydellinen inaktivointi;
• UFO, 1,1 W, 1 min - täydellinen inaktivointi.

Esitetyt tiedot osoittavat, että fysikaalis-kemiallisilta ominaisuuksiltaan hepatiitti A -virus on lähimpänä enteroviruksia. Kuten muutkin enterovirukset, HAV on vastustuskykyinen monille desinfiointiliuoksille ja inaktivoituu kokonaan muutamassa minuutissa 85 °C:ssa ja autoklaavissa.

On osoitettu, että hepatiitti A -virus voi lisääntyä ihmisen ja apinan soluviljelmien primaarisissa ja jatkuvissa yksisolukerroksisissa linjoissa. Hepatiitti A -viruksen lisääntyminen in vitro -viljelmissä on erityisen aktiivista, kun lähtöaineena käytetään sairaiden apinoiden maksauutteita. On kuitenkin huomattava, että kaikissa hepatiitti A -viruksen lisääntymistä in vitro -viljelmissä koskevissa kokeissa kiinnitetään huomiota pitkään itämisaikaan primaaristen siirrostusten aikana (jopa 4–10 viikkoa), minkä jälkeen viruksen geneettisen materiaalin kertyminen lisääntyy, mutta absoluuttiset arvot pysyvät hyvin merkityksettöminä, mikä antaa monille tutkijoille aiheen puhua hepatiitti A -viruksen epätäydellisestä replikaatiosta kudosviljelmissä.

Yhteenvetona kirjallisuustiedoista hepatiitti A -viruksen lisääntymisestä kudosviljelmissä voidaan todeta, että HAV:n pitkäaikainen selviytyminen in vitro on kiistaton. Optimaalisia olosuhteita viruksen vakaalle ja korkealle replikaatiotasolle ei ole lopullisesti tunnistettu, mikä vaikeuttaa sen biologisten ominaisuuksien tutkimista, reagenssien lähteen hankkimista diagnostisten aineiden tuotantoa ja rokotteiden suunnittelua varten.

Samaan aikaan kirjallisuudesta löytyy optimistisempia arvioita tästä ongelmasta. Kaikkien hepatiitti A -viruksen viljelyyn liittyvien kysymysten ratkaisu on lähitulevaisuuden asia. Tutkittaessa HAV:n lisääntymisen optimaalisia olosuhteita reesusmakakin alkion munuaissolujen viljelmässä, tunnistettiin kaksi vaihetta: tarttuvan viruksen tuotantovaihe (jopa 6-8 päivää 5. läpikulun tasolla) ja virusantigeenin intensiivisen kertymisen vaihe. Osoitettiin myös, että merkittävin virusantigeenin kertyminen tapahtuu niin sanotun valssiviljelyn (pyörivät pullot) olosuhteissa. Tämä menetelmä avaa laajat mahdollisuudet viljelyantigeenin hankkimiseen suurina määrinä, ja siten syntyy lähdemateriaali diagnostisten järjestelmien valmistukseen ja rokotteiden valmistukseen.

Hepatiitti A:n epidemiologia

Hepatiitti A -virus on ihmisille erittäin patogeeninen. WHO:n (1987) mukaan vain yhden virionin infektio riittää taudin aiheuttamiseen. Käytännössä tarttuva annos on kuitenkin todennäköisesti paljon suurempi. Ainoa tartunnan lähde on tartunnan saanut henkilö. Virusta erittyy suuria määriä ulosteeseen 12–14 päivää ennen keltataudin alkamista ja keltataudin kolmen viikon aikana. Taudinaiheuttajan erittymisessä ei ole havaittu merkittäviä eroja potilailla, joilla on keltatauti, anikteriikka ja oireeton hepatiitti A -muoto. Tartuntareitti on uloste-oraalinen, pääasiassa vesiteitse sekä kotitalouksien ja elintarvikkeiden välityksellä. Tartuntareitti on uloste-oraalinen, pääasiassa vesiteitse sekä kotitalouksien ja elintarvikkeiden välityksellä. Viruksen pääasiallinen (ensisijainen) tartuntareitti on vesiteitse. Myös ilmassa olevien pisaroiden välityksellä tapahtuva tartunta on mahdollinen. Väestön alttius on yleinen. Enimmäkseen alle 14-vuotiaat lapset sairastuvat. Taudilla on voimakas syksy-talvi-kausiluonteisuus.

[ 8 ], [ 9 ], [ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ], [ 15 ]

Hepatiitti A:n oireet

Itämisaika vaihtelee 15–50 päivästä viruksen infektoivasta annoksesta riippuen, mutta keskimäärin se on 28–30 päivää. Kehoon päästyään hepatiitti A -virus lisääntyy alueellisissa imusolmukkeissa, tunkeutuu vereen ja sitten maksasoluihin ja aiheuttaa akuutin diffuusin hepatiitin, johon liittyy maksasolujen ja retikuloendoteliaalisten elementtien vaurioituminen sekä sen vieroitus- ja suojatoimintojen heikkeneminen. Maksasolujen vaurioituminen ei johdu viruksen suorasta vaikutuksesta, vaan immunopatologisten mekanismien seurauksena. Tyypillisin hepatiitti A:n kuva on akuutti ikterinen syklinen muoto: itämisaika, prodromaalinen (preikterinen), ikterinen vaihe ja toipumisaika. Infektiopesäkkeissä havaitaan kuitenkin suuri määrä oireettomia ja anikterisiä infektiomuotoja sairastavia potilaita, joiden määrä on merkittävästi suurempi kuin ikteristen ("jäävuoriilmiö").

Tartunnan jälkeinen immuniteetti on vahva ja pitkäkestoinen, ja sen aiheuttavat virusta neutraloivat vasta-aineet ja immuunimuistisolut.

Hepatiitti A:n mikrobiologinen diagnostiikka

Hepatiitti A:n diagnostiikka (lukuun ottamatta eläinten - simpanssien, marmosettien ja paviaanien - tartuntaa, joita meillä ei ole) perustuu erilaisiin immunologisiin menetelmiin: RSC, immunofluoresenssimenetelmä, immuuniadheesion hemagglutinaatio (virusantigeenin ja vasta-aineen kompleksi komplementin läsnä ollessa adsorboituu punasoluihin ja aiheuttaa niiden tarttumisen). Näiden menetelmien käyttömahdollisuudet ovat kuitenkin rajalliset spesifisten virusantigeenien puutteen vuoksi, ja immunofluoresenssireaktio vaatii maksaanibiopsian, mikä on ei-toivottavaa. Immunologiaelektronimikroskopiamenetelmä on luotettava ja spesifinen, mutta se on erittäin työläs. Siksi toistaiseksi ainoa hyväksyttävä immunologinen reaktio on kiinteän faasin immunosorbenttianalyysi IFM:n tai RIM:n muodossa, erityisesti M-luokan immunoglobuliinien "sieppauksen" modifikaatiossa. Maassamme on ehdotettu tähän tarkoitukseen testijärjestelmää - "DIAGN-A-HEP". Tämän testijärjestelmän toimintaperiaate on seuraava. Ensin polystyreenikuoppiin kiinnitetään M-luokan immunoglobuliinien vasta-aineita (antiimmunoglobuliinit M), minkä jälkeen lisätään testattava potilaan seerumi. Jos se sisältää IgM-vasta-aineita, ne sitoutuvat M-luokan vasta-aineisiin, minkä jälkeen lisätään spesifinen virusantigeeni (hepatiitti A -virus), joka saadaan kasvattamalla soluviljelmässä. Järjestelmä pestään ja siihen lisätään piparjuuriperoksidaasilla leimattuja antiviraalisia vasta-aineita. Jos kaikki neljä järjestelmän komponenttia ovat vuorovaikutuksessa, muodostuu nelikerroksinen "voileipä":

• antiimmunoglobuliinit M,
• immunoglobuliinit M (hepatiitti A -virusta vastaan - tutkittavan potilaan seerumissa),
• virusantigeeni,
• entsyymileimattuja antiviraalisia vasta-aineita.

Tämän kompleksin havaitsemiseksi kuoppiin lisätään entsyymin substraatti. Entsyymin vaikutuksesta se tuhoutuu ja muodostuu värillinen tuote. Värin intensiteetti voidaan mitata kvantitatiivisesti spektrofotometrillä tai fotokolorimetrillä.

IgM-"sieppaus"-menetelmän etuna on, että tämän immunoglobuliiniluokan vasta-aineet ilmestyvät primaarisen immuunivasteen aikana ja osoittavat infektion aktiivisen vaiheen, ne häviävät taudin sairastamisen jälkeen. IgG-luokkaan kuuluvat antiviraaliset vasta-aineet sitä vastoin säilyvät pitkään taudin sairastamisen jälkeen ja tarjoavat hankitun immuniteetin. Hepatiitti A -viruksen havaitsemiseksi on ehdotettu DNA-koetinmenetelmää: koettimena käytetään komplementaarista vRNA-DNA:ta.

Hepatiitti A:n hoito

Koska interferonin tuotanto häiriintyy virushepatiitissa, hepatiitti A:n hoito perustuu interferonin ja sen endogeenisen synteesin indusoijan, amiksiinin, käyttöön.

Hepatiitti A:n spesifinen ehkäisy

Aiemmin laajalti käytetty hepatiitti A:n seroprofylaksia gammaglobuliinilla ei oikeuttanut itseään, joten pääpaino oli rokotusprofylaksin suorittamisessa, hepatiitti A:ta vastaan rokotetaan. Tätä varten kehitetään ja käytetään jo erilaisia rokotteita. Venäjällä tehokas hepatiitti A -rokote saatiin vuonna 1995, ja sitä käytetään nyt menestyksekkäästi.