Hepatiitti A -virus

Viruslääke A on ihmisen tarttuva tauti, jolle on tyypillistä maksavaurio ja ilmenee kliinisesti myrkytys ja keltaisuus. Hepatiitti A -virus havaittiin vuonna 1973 S. Feinstone (ja muut) käyttäen immuunelektronimikroskopian menetelmää ja infektoimalla apinoita - simpansseja ja marmosetteja. Immuunimikroskopian menetelmän ydin on, että hepatiitti A: n potilaan ulosteet suodatetaan spesifisiä vasta-aineita (kumulatiivisen seerumin seos) ja sakka altistetaan elektronimikroskopialle. Koska virukset ovat vuorovaikutuksessa spesifisten vasta-aineiden kanssa, niille suoritetaan spesifinen aggregaatio. Tässä tapauksessa ne on helpompi havaita ja aggregaatio vasta-aineiden vaikutuksen alaisena vahvistaa patogeenin spesifisyyden. S. Feinstone -haavan löytäminen vahvistettiin vapaaehtoisten kokeissa.

Hepatiitti A -viruksella on pallomainen muoto, virion halkaisija on 27 nm. Genomia edustaa yksijuosteinen positiivinen RNA, jonka massa on 2,6 MD. Supercapsid puuttuu. Symmetrinen tyyppi on kuutiosikaantahedri. Kapsidissa on 32 kapsomeeria, muodostuu neljästä polypeptidistä (VP1-VP4). Ominaisuuksiltaan hepatiitti A -virus kuuluu Hevarnoviruksen suvulle, Picornaviridae-perheelle. Antigeenisesti hepatiitti A -virus (HAV - hepatiitti A -virus) on homogeeninen. HAV kertoo hyvin simpanssien, paviaaneiden, hamadriilien ja rahapelien apinoiden (marmoset) rungossa. Pitkäaikaisesti virus ei voinut viljellä. Vain 1980-luvulla. Oli mahdollista saada soluviljelmät, joissa HAV etenee. Aluksi näitä käyttötarkoituksia varten käytettiin rhesus-apinan munuaisen (viljely FRhK-4) siirretyt munuaislinjat ja nyt - vihreiden apinoiden munuaissolujen siirretty rivi (viljelmä 4647).

WHO: n asiantuntijoiden suositusten mukaan hyväksyttiin hepatiitti A -viruksen merkkiaineeksi hepatiitti A -viruksen NAU-vasta-aine hepatiitti A -virukselle: anti-NAV IgM ja anti-NAV IgG.

HAV on pieniä hiukkasia, joiden läpimitta on 27-30 nm, joilla on icosaedrinen symmetria ja joilla on homogeenisuus. Immuunikomponoitumismenetelmän avulla saadulla elektronin difraktiokuvioinnilla havaitaan elektronipitoiset hiukkaset, joilla on pintapuolisesti sijaitsevat symmetrisesti järjestetyt kapsomeerit. Negatiivisella kontrastilla havaitaan sekä täydellisiä että tyhjiä partikkeleita valmisteissa. Nukleokapsidin NAV, toisin kuin influenssan, ei ole pintaulokkeita ja kalvoja. On myös tärkeää, että virion HAV: lla ei ole sydämen muotoista rakennetta.

Mukaan sen fysikaalis-kemiallisten ominaisuuksien hepatiitti A-virus on sukua perheen Picornaviridae, suku enterovirus atomi numero 72. Tämän luokittelun oli liian epätavallinen, ja WHO havaittu mahdolliseksi jättää termi "hepatiitti A-virus".

Kuten kaikki Picornaviridae-perheen virukset, hepatiitti A -virus sisältää ribonukleiinihappoa. Jotkut laboratoriot ovat osoittaneet mahdollisuuden kloonaamaan hepatiitti A -viruksen genomin, mikä avaa mahdollisuuden saada rokotevalmisteita.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7],

Hepatiitti A -viruksen resistenssi

Virus on suhteellisen vastustuskykyisiä korkeisiin lämpötiloihin, happoihin, rasvaliuottimiin (ei ole lipidejä), desinfiointiaineita, se sietää alhaisen lämpötilan hyvin. Kaikki tämä edistää sen pitkäaikaista säilyttämistä ulkoisessa ympäristössä. Huoneenlämmössä se elää useita viikkoja, 60 ° C: ssa osittain menettää tarttuvuutta 4-12 tunnin kuluttua täysin - muutaman minuutin kuluttua 85 ° C: ssa. Erittäin kestävä kloori, jonka ansiosta se pystyy tunkeutumaan vesijohtovesiin vedenpuhdistuslaitosten esteiden kautta.

Yhteenvetona kaikkiin tietoihin voimme kuvailla hepatiitti A -virusta seuraavasti:

• luonnollinen päällikkö on ihminen;
• koe-eläimet - marmozet, simpanssit;
• tartunnan lähde - uloste;
• tauti - epidemia ja endemio;
• lähetysreitti on fecal-oral;
• inkubaatioaika - 14-40 päivää;
• siirtyminen krooniseen hepatiittiin - ei huomioitu.

NAV: n immunologiset ominaisuudet ovat seuraavat:

• Prototyyppikannat - MS-1, CR-326, GVG. Kaikki ovat immunologisesti samanlaisia tai identtisiä;
• Vasta-aineita - IgM ja IgG, tuotetaan vasteena viruksen rakenneproteiinien käyttöön ja ovat suojaavia;
• I Ihmisen seerumin y-globuliinin trofinen vaikutus - suojaa tai heikentää sairautta annon aikana ennen infektiota tai inkubointijakson aikana.

NAU: n fysikaalis-kemialliset ominaisuudet ovat seuraavat:

• Morfologia on epäsäännöllinen pallomainen hiukkanen, jossa on kuutiosymmetria, kapsidi koostuu 32 kapsomeerista;
• Halkaisija on 27 - 30 nm;
• Tiheys CsCl: ssa (g / cm3) on 1,38-1,46 (avoimet hiukkaset), 1,33-1,34 (kypsä virioni), 1,29-1,31 (epäpuhtaat virionit, tyhjät hiukkaset);
• Sedimentaatiokerroin on 156 - 160 kypsää virionia;
• Nukleiinihappo - yksijuosteinen, lineaarinen RNA;
• Suhteellinen molekyylipaino - 2,25 106-2,8 106KD;
• Nukleotidien määrä on 6 500 - 8 100.

NAV: n stabiilisuus fysikaalis-kemiallisissa vaikutuksissa on seuraava:

• Kloroformi, eetteri - on stabiili;
• Kloori, 0,5-1,5 mg / l, 5 ° C, 15 min - osittainen inaktivointi;
• Klooriamiini, 1 g / l, 20 ° C, 15 min - täydellinen inaktivointi;
• Formaliini, 1: 4000, 35-37 ° C, 72 tuntia - täydellinen inaktivointi, 1: 350, 20 ° C, 60 min - osittainen inaktivointi.

Lämpötila:

• 20-70 ° C - stabiili;
• 56 ° С, 30 minuuttia - se on vakaa;
• 60 ° С, 12 tuntia - osittainen inaktivointi;
• 85 ° C, 1 min - täydellinen inaktivointi;
• Autoklaavennus, 120 ° C. 20 minuuttia - täydellinen inaktivointi;
• Kuiva kuumuus, 180 ° C, 1 h - täydellinen inaktivointi;
• UV, 1,1 W, 1 min - täydellinen inaktivointi.

Esitetyt tiedot osoittavat, että hepatiitti A -viruksen fysikaalis-kemialliset ominaisuudet ovat lähinnä enteroviruksia. Kuten muut enterovirukset, HAV on resistenttejä monille desinfiointiaineille, jotka on täysin inaktivoitu useita minuutteja 85 ° C: ssa ja autoklavoitu.

Se osoitti, että hepatiitti A-virus voi lisääntyä ensisijainen ja jatkuva yksikerroksisiin ihmisen solulinjojen, ja apina. Erityisen aktiivisia lisääntymiselle hepatiitti A-viruksen in vitro viljelmissä havaitaan käytettäessä lähtöaineena erottaa maksan potilaiden apinoita. On kuitenkin syytä huomata, että kaikissa kokeissa mukaan lisääntymiselle hepatiitti A-viruksen in vitro viljelmissä huomionarvoista pitkä itämisaika primaarisessa kanavien (-10-4viikko), sen jälkeen kertyminen viruksen geneettisen materiaalin kasvaa, mutta absoluuttisia arvoja ovat erittäin vähäisiä, joka synnyttää monet tutkijat puhua epätäydellisen replikaation hepatiitti A -viruksen kudosviljelmissä.

Yhteenvetona kirjallisuustiedoista hepatiitti A -viruksen lisääntymisestä ei-juuriviljelmistä, voidaan sanoa, että pitkään HAV-in vitro -kokemus on kiistaton. Optimaalisia olosuhteita stabiilin viruksen replikaation korkealle tasolle ei ole lopultakin tunnistettu, mikä rajoittaa sen biologisten ominaisuuksien tutkimista, reagenssien lähdön tuottamista diagnostiikan tuottamiseksi ja rokotteiden suunnittelulle.

Samaan aikaan kirjallisuudessa löytyy enemmän optimistisia tuomioita tästä ongelmasta. Kaikkien hepatiitti A -viruksen viljelyyn liittyvien kysymysten ratkaisu on lähitulevaisuudessa. Tutkittaessa optimaaliset olosuhteet HAV-etenemisen soluviljelmässä alkion munuaisen rhesus-apinoilla havaittiin kaksi vaihetta: vaihe infektiivisen viruksen tuotanto (jopa 6-8 päivää on 5. Passage) ja vaiheen intensiivisen kertymistä viruksen antigeeni. Näytetään myös, että viruksen antigeenin merkittävin kertyminen tapahtuu ns. Rullanviljelyn olosuhteissa (pyörivät pullot). Tällä tavoin avautuu laajoja mahdollisuuksia saada kulttuuriantigeeni suurina määrinä, ja näin ollen ilmenee diagnostisten järjestelmien valmistamiseen ja rokotevalmisteiden valmistukseen käytettävä lähtöaine.

Epidemiologia hepatiitti A: sta

Hepatiitti A -viruksella on suuri patogeenisuus ihmisille. WHO: n (1987) tekemän päätelmän mukaan taudin puhkeaminen riittää infektoimaan vain yhden virion. Käytännön tarttuva annos on kuitenkin todennäköisesti paljon suurempi. Tartuntalähde on vain tartunnan saanut henkilö. Virusta vapautuu suuria määriä ulostetta 12-14 päivää ennen keltaisuutta ja 3 viikon kuluessa. Pitoisuusjaksolla. Merkittäviä eroja taudinaiheuttajan eristämisessä potilailla, joilla on hepatiitti A: n sikiö, keltaisuus ja oireeton muoto, ei ole tunnistettu. Infektiomenetelmä on fekal-oraalinen, pääasiassa vesipitoinen, sekä kotitalous- ja elintarvikereitit. Infektiomenetelmä on fekal-oraalinen, pääasiassa vesipitoinen, sekä kotitalous- ja elintarvikereitit. Viruksen lähetyksen tärkein (ensisijainen) reitti on vesi. On myös mahdollista saada infektio ilmassa. Väestön alttius on yleismaailmallista. Useimmiten alle 14-vuotiaat lapset ovat sairaita. Taudilla on voimakas syksy-talvi kausiluonteisuus.

[8], [9], [10], [11], [12], [13], [14], [15]

Hepatiitti A: n oireet

Itämisaika vaihtelee 15-50 päivää, riippuen annoksen koko tartunnan aiheuttavan viruksen, mutta keskimäärin 28-30 päivää. Kun elin, hepatiitti A-virus replikoituu alueellisiin imusolmukkeisiin, vereen ja sitten maksasoluihin ja aiheuttaa hajanainen akuutti hepatiitti, johon liittyy leesioita maksasoluihin ja retikulo solujen ja lasku sen vieroitus ja este toimintoja. Hepatosyyttien vaurio ei ilmene viruksen välittömän vaikutuksen vuoksi, vaan immunopatologisten mekanismien seurauksena. Tyypillisin kuva hepatiitti A on akuutti ikteerisessä syklinen muoto: itämisaika, prodromaalisten (preicteric), keltaisuus ja toipilasaika. Kuitenkin infektiopesäkkeitä paljastaa suuri määrä potilaita, joilla on oireeton ja anicteric muotoja infektio, joiden määrä on vallitseva yli ikteerisessä ( "jäävuori ilmiö").

Tartunnan jälkeinen immuniteetti on vahva ja pitkäkestoinen, viruksen neutralisoivien vasta-aineiden ja immuunimuistisolujen aiheuttama.

Hepatiitti A: n mikrobiologinen diagnoosi

Diagnoosi hepatiitti A (lukuun ottamatta infektio eläimet - simpanssit marmozet, paviaanit, jotka olemme), joka perustuu eri immunologisia menetelmiä: DGC immunofluoresenssilla menetelmä, hemagglutinaation immuuni adheesio (kompleksi virusantigeenin + vasta-komplementin läsnä ollessa adsorboituna punasolujen ja aiheuttaa niiden adheesio) . Kuitenkin, sovellettavuus näistä menetelmistä ei ole rajoitettu, koska ei ole erityisiä viruksen antigeenejä ja immunofluoresenssilla reaktio vaatii maksabiopsiat, mikä ei ole toivottavaa. Luotettava ja spesifinen menetelmä on immuuni elektronimikroskoopilla, mutta se on hyvin aikaa vievää. Siksi, kunnes ainoa hyväksyttävä menetelmä immunologisen reaktion on immunosorbenttimääritys kiinteän faasin muodossa IPM, tai RIM, erityisesti muutettaessa "talteenotto" immunoglobuliini M. Maamme tähän tarkoitukseen ehdotetun testausjärjestelmän - "DIAG-A-GEO". Tämän testausjärjestelmän toimintaperiaate on seuraava. Seinille polystyreeni lunochek sorboitunut ensimmäinen vasta-aineita immunoglobuliinien luokan M (antiimmunoglobuliny M) lisätään sitten tutkittujen potilaiden seerumissa. Jos on vasta-aine IgM, ne sitoutuvat vasta-aine-Ti-M, sitten lisätään tietyn viruksen antigeeni (hepatiitti A-virus), joka on saatu kasvattamalla soluviljelmässä. Järjestelmä huuhdotaan, ja siihen lisätään antiviraalisia vasta-aineita, oli leimattu piparjuuriperoksidaasilla. Jos on ollut vuorovaikutusta kaikkien neljän järjestelmän osien, on nelikerroksinen "sandwich":

• antiimmunoglobuliinit M,
• immunoglobuliinit M (hepatiitti A -virusta vastaan - potilaan koesonderissa),
• viruksen antigeeni,
• antiviraaliset vasta-aineet, jotka on leimattu entsyymillä.

Tämän monimutkaisuuden tunnistamiseksi substraatti entsyymille lisätään lunetteihin. Entsyymin vaikutuksesta se tuhoutuu ja muodostuu värillinen tuote. Värin voimakkuus voidaan mitata kvantitatiivisesti spektrofotometrillä tai fotokolorimetrillä.

IgM: n "capture" -menetelmän etuna on, että tämän immunoglobuliiniluokan vasta-aineet esiintyvät primäärisessä immuunivasteessa ja ilmaisevat aktiivisen infektion vaiheen, ne katoavat siirretyn taudin jälkeen. IgG-luokkaan kuuluvat virusvastaiset vasta-aineet sitä vastoin pysyvät pitkään taudin jälkeen antaen aikaan hankitun immuniteetin. Hepatiitti A -viruksen havaitsemiseksi ehdotetaan DNA-koettimen menetelmää: koettimena käytetään komplementaarista vRNA-koetinta.

Hepatiitti A: n hoito

Koska interferonituotanto häiriintyy viruksen hepatiitissa, hepatiitti A: n hoito perustuu interferonin ja sen endogeenisen synteesi-amiinin indusoijan käyttöön.

Hepatiitti A: n erityinen ehkäisy

Aikaisemmin laajasti sovellettu seroprevention hepatiitti A, käyttäen gammaglobuliinia ei ollut perusteltua, kuitenkin painotettiin tilalla immunisaatiota suoritetaan rokottaminen hepatiitti A. Tätä varten kehitetään erilaisia rokotteiden vaihtoehtoja ja niitä käytetään jo. Venäjällä tehokas rokotus hepatiitti A: ta vastaan saatiin takaisin vuonna 1995, ja nyt sitä on käytetty onnistuneesti.