13c ureaasitesti: valmistelu, tulokset, positiivinen, negatiivinen

Helicobacter pylori -bakteerin löytämisen jälkeen, joka liittyy krooniseen gastriittiin sekä maha- ja pohjukaissuolihaavaan, on kehitetty diagnostisia menetelmiä, mukaan lukien ureaasitesti, jonka avulla voidaan havaita nämä mikro-organismit tietyllä potilaalla, vahvistaa niiden osallistuminen ruoansulatuskanavan sairauksien kehittymiseen ja määrätä tehokasta hoitoa.

Ureaasientsyymi Helicobacter-infektion biomarkkerina

H. pylori -bakteerit suojautuvat mahalaukun happamalta ympäristöltä kahdella tavalla. Ensinnäkin mikro-organismit vahingoittavat limakalvoa flagellallaan ja pääsevät sen alempiin kerroksiin aina epiteelisoluihin asti, missä pH on korkeampi (eli happamuus on alhaisempi). Toiseksi bakteerit neutraloivat hapon syntetisoimalla suuria määriä katalyyttisesti aktiivista, suurimolekyylistä metalloentsyymi ureaasia eli ureamidohydrolaasia.

Ureaasin käyttö Helicobacterin diagnosoinnissa on mahdollista paitsi tämän entsyymin sytoplasmisen aktiivisuuden myös ulkoisen vuorovaikutuksen isäntäsolujen kanssa vuoksi.

Ureaasin vaikutuksesta mahan urea hajoaa vetynitridiksi (ammoniakiksi) ja hiilidioksidiksi (hiilidioksidiksi). Ne reagoivat mahanesteen suolahapon kanssa ja muodostavat neutraalin happamuuden vyöhykkeen H. pylorin ympärille sekä tukevat bakteerisolujen aineenvaihduntaa.

Tästä syystä ureaasi on tärkein tekijä H. pylorin kolonisaatiossa ihmisen mahalaukun limakalvolla, ja ureolyyttisen aktiivisuuden havaitsemista pidetään tämän bakteerin virulenssin biomarkkerina, jota gastroenterologit – ureaasitestin avulla – käyttävät Helicobacter-infektion diagnosointiin sekä lääkkeiden aiheuttaman bakteerien tuhoutumisen (hävittämisen) tulosten seurantaan.

H. pylori -diagnostiikkaan kuuluu invasiivisia ja ei-invasiivisia testejä – riippuen siitä, tarvitaanko mahalaukun endoskooppinen tutkimus (fibrogastroduodenoskopia) vai ei. Invasiivinen testi on ureaasipikatesti tai ekspressoitu ureaasitesti (RUT-testi), joka vaatii kudosnäytteiden ottamista (biopsia). 13C-ureahengitystesti (13C-UBT) on yleisin ei-invasiivinen testi.

On huomattava, että H.pylorin ei-invasiivinen diagnostiikka voidaan suorittaa verikokeella vasta-aineiden osoittamiseksi (spesifisyys 75 %, herkkyys 84 %), virtsan ELISA-testillä (herkkyys 96 % ja spesifisyys 79 %) ja bakteerien antigeenien koohjelmalla. Lisätietoja - Helicobacter pylori -infektio: Helicobacter pylori -vasta-aineet veressä

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

Menettelyn tiedot ureaasitesti

H. pylorin kolonisaatio mahalaukun limakalvolla ei sinänsä ole sairaus, vaan se on tekijä, joka lisää kehon bakteerikuormaa, mikä tietyissä olosuhteissa voi laukaista useiden mahalaukun ja ylemmän ruoansulatuskanavan patologioiden kehittymisen.

Helicobacter-infektion diagnostiikan, erityisesti ureaasitestin, indikaatioita ovat lisääntynyt happamuus gastriitti, antraali- ja atrofinen gastriitti, pohjukaissuolihaava, mahahaava ja pohjukaissuolihaava sekä mahalaukun MALT-lymfooma. Varhaisvaiheen mahasyövän endoskooppisen resektion jälkeen voidaan suorittaa histologinen tutkimus yhdessä nopean ureaasitestin - FGDS ureaasitestin kanssa.

Gastroenterologit voivat määrätä ureaasitestin, jos potilaat valittavat raskauden ja epämukavuuden tunnetta epigastrisella alueella, usein esiintyvää närästystä syömisen jälkeen, hapanta tai mätää röyhtäilyä, katkeruutta suussa, pahoinvointia, suolistohäiriöitä, särkevää tai kouristavaa kipua vatsassa.

[ 8 ], [ 9 ]

Valmistautuminen

Valmistautuminen 13C-ureahengitystestiin koostuu siitä, että potilas lopettaa: antibioottien käytön neljä viikkoa ennen testiä ja tulehduskipulääkkeiden, protonipumpun estäjien (mahan happamuutta vähentävät) ja antasidien tai närästykseen käytettävien absorbenttien käytön vähintään kaksi viikkoa ennen. Kaikkien lääkkeiden käyttö tulee lopettaa viidestä kuuteen päivään ja alkoholin juominen ja tupakointi kolme päivää ennen testiä.

On myös suositeltavaa välttää palkokasvien syömistä noin viikon ajan ennen testausta, koska pavut, herneet, linssit, soijapavut ja pavut sisältävät ureaasia (joka suojaa kasveja taudeilta ja tuholaisilta).

Testiä edeltävänä iltana myöhäinen ja runsas illallinen on vasta-aiheinen; testipäivänä on huolehdittava normaalista suuhygieniasta, ja puolitoista tuntia ennen testiä ei saa juoda mitään tai käyttää purukumia.

[ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ]

Tekniikka ureaasitesti

Toteutustekniikka:

• Ensin otetaan perushengitysnäyte - uloshengitys tehdään pehmeään muovisäiliöön (ja suljetaan ilmatiiviisti);
• neste, johon on lisätty 13C-ureaa, otetaan suun kautta;
• 25–30 minuutin kuluttua otetaan toinen näyte uloshengitysilmasta toiseen astiaan.

Tällä tavoin saadut näytteet analysoidaan massaspektrometrillä erottamalla toisen näytteen isotoopit ja määrittämällä niiden pitoisuus. Toisen ja ensimmäisen näytteen arvojen välinen ero ilmaistaan deltan (δ) arvona lähtötasoon verrattuna. Normaaliarvot eli leimatun 13C-atomin negatiiviset arvot infektoimattomilla potilailla vaihtelevat 0,15–0,46 %:n välillä, ja positiiviset arvot infektion läsnä ollessa ovat 1,2–9,5 %, urean hydrolyysinopeuden ollessa yli 12–14 μg/min.

Yksinkertaisesti sanottuna: 13C-merkityn hiilidioksidin havaitseminen uloshengitetyssä ilmassa osoittaa, että ureaasientsyymi H. pylori on hydrolysoinut ureaa, mikä itse asiassa vahvistaa sen läsnäolon mahalaukussa.

H. pylori -hengitystesti

Helicobacter pylorin 13C-UBT-testi eli 13C-ureahengitystesti on yksi tärkeimmistä ei-invasiivisista menetelmistä tämän infektion havaitsemiseksi: 100 %:n herkkyyden ja 98 %:n spesifisyyden ansiosta väärien positiivisten ja väärien negatiivisten tulosten riski on 2,3 % pienempi verrattuna histologiseen ja veren vasta-ainetestiin.

Analyysi perustuu H. pylori -ureaasin hydrolyysiin, joka suoritetaan suun kautta annetun nestemäisen urean hydrolyysissä. Urea on merkitty hiiliatomilla (stabiili ei-radioaktiivinen isotooppi) 13C:llä (50–75 mg 13C-ureaa laimennettuna 100 ml:aan nestettä).

Isotooppi-indikaattorilla merkitty urea hydrolysoituu mahassa, jolloin vapautuu ammoniakkia ja hiilidioksidia, jotka sisältävät merkittyjä atomeja. Nämä diffundoituvat vereen ja erittyvät keuhkoista hengityksen aikana. Merkitty hiilidioksidi rekisteröidään analyyttisellä laitteella - massaspektrometrillä, jonka toiminta perustuu ei-dispersiiviseen isotooppiselektiiviseen spektroskopiaan, tai infrapunaspektroskopialla.

Nopea ureaasitesti

Pikaureaasitesti (RUT) tehdään mahalaukun ja pohjukaissuolen endoskooppisen tutkimuksen aikana – käyttäen nykyaikaisia endofibroskooppeja – ja samanaikaisesti otetaan koepalanäytteitä. Biomateriaali on tarkoitus ottaa mahalaukun antraalisesta osasta. Siksi fibrogastroduodenoskopia eli FGDS ureaasitestillä on invasiivinen diagnostinen menetelmä.

Saatu koepala upotetaan kokonaan valmistettuun standardoituun väliaineeseen, joka sisältää agargeeliä, ureaa, happo-emäsindikaattoria fenolisulfoftaleiinia ja bakteriostaattista ainetta (lisätty estämään kontaminoivien mikro-organismien kasvua ja vääriä positiivisia tuloksia).

Jos mahalaukun kudosnäytteessä on H. pylori -bakteereja, niiden tuottama ureaasi hydrolysoi ureaa ja nostaa pH:ta, mikä näkyy selvästi indikaattorin muuttuessa keltaisesta oranssiksi (pH-arvossa 6,8) ja violetiksi (pH-arvossa > 8). 75 % positiivisista testeistä vaihtaa väriä 120–180 minuutin kuluessa, ja mitä nopeammin indikaattori vaihtaa väriä, sitä suurempi on bakteerien määrä. Negatiivisilta vaikuttavia testituloksia säilytetään kuitenkin 24 tuntia.

Pikaureaasitesti positiivinen, mitä se tarkoittaa? Positiivinen RUT-testi – indikaattori muuttuu punaiseksi – tarkoittaa, että agar-agariin asetettu koepalanäyte sisältää vähintään 105 H. pylori -bakteeria, vaikka niiden pitoisuus on yleensä korkeampi.

Eri testimuokkausten herkkyys vaihtelee 90–98 %:n välillä ja spesifisyys 97–99 %:n välillä.

Kuten gastroenterologit ovat todenneet, jos potilaan johtopäätös osoittaa jyrkästi positiivisen ureaasitestin (kolme ristiä), se tarkoittaa: pH on > 8, ja indikaattorin väri on muuttunut alle 60 minuutissa biopsian ottamisesta, mikä osoittaa suurta määrää H.pylori -bakteereja ja korkeaa ureaasin ilmentymistä. Bakteerien arvioitu lukumäärä voidaan laskea biopsian histologisessa tutkimuksessa mikroskoopilla, ja jos se ylittää 40-50 visualisoidulla alueella, infektiotasoa pidetään korkeana.

13C-ureahengitystesti antaa harvoin vääriä positiivisia tuloksia, ja potilailla, joilla epäillään maha- tai pohjukaissuolihaavaumaa, yhden positiivisen testituloksen katsotaan vahvistavan diagnoosin, kun taas negatiivinen tulos tulisi varmistaa EGD:llä ja ureatestillä.