Rajoitusfragmentin pituuden polymorfismin analysointi
Viimeksi tarkistettu: 23.04.2024
Kaikki iLive-sisältö tarkistetaan lääketieteellisesti tai se tarkistetaan tosiasiallisen tarkkuuden varmistamiseksi.
Meillä on tiukat hankintaohjeet ja vain linkki hyvämaineisiin mediasivustoihin, akateemisiin tutkimuslaitoksiin ja mahdollisuuksien mukaan lääketieteellisesti vertaisarvioituihin tutkimuksiin. Huomaa, että suluissa ([1], [2] jne.) Olevat numerot ovat napsautettavia linkkejä näihin tutkimuksiin.
Jos sinusta tuntuu, että jokin sisältö on virheellinen, vanhentunut tai muuten kyseenalainen, valitse se ja paina Ctrl + Enter.
Eri restriktioendonukleaasien laaja käyttö erilaisten kromosomaalisen DNA: n analyysiin paljasti ihmisen genomin valtavan vaihtelun. Myös pienet muutokset rakenteellisten geenien koodaus- ja säätelyalueilla voivat johtaa tietyn proteiinin synteesin lopettamiseen tai sen toiminnan heikkenemiseen ihmiskehossa, mikä yleensä vaikuttaa potilaan fenotyyppiin. Kuitenkin noin 90% ihmisen genomista koostuu ei-koodaavista sekvensseistä, jotka ovat muuttuvampia ja sisältävät monia niin sanottuja neutraaleja mutaatioita tai polymorfioita ja joilla ei ole fenotyyppistä ilmentymistä. Tällaisia polymorfisia kohtia (loci) käytetään perinnöllisten tautien diagnosoinnissa geneettisiksi markkereiksi. Polymorfiset lokit ovat läsnä kaikissa kromosomeissa ja ne ovat sidoksissa geenin spesifiseen alueeseen. Kun määritetään polymorfisen lokuksen lokalisointi, on mahdollista määrittää, mihin genomiin liittyy mutaatio, joka aiheutti sairauden potilaaseen.
DNA: n polymorfisten alueiden eristämiseksi käytetään bakteerientsyymejä - restriktioentsyymejä, joiden tuote on restriktiokohtia. Polymorfisissa kohdissa esiintyvät spontaanit mutaatiot tekevät niistä resistenttejä tai päinvastoin herkkiä tiettyä restriktioentsyymiä vastaan.
Rajoituskohtien mutationaalinen vaihtelu voidaan havaita muuttamalla rajoitettujen DNA-fragmenttien pituutta erottamalla ne käyttämällä elektroforeesia ja sen jälkeen hybridisoitumista spesifisten DNA-koettimien kanssa. Jos polymorfista kohtaa ei ole rajoitettu, yksi iso fragmentti havaitaan elektroforeereissa ja jos sitä on läsnä, pienempi fragmentti on läsnä. Rajoituskohdan läsnäolo tai puuttuminen homologisten kromosomien identtisissä lokuksissa mahdollistaa sen, että mutantti ja normaali geeni voidaan luotettavasti leimata ja jäljittää sen siirtäminen jälkeläisille. Niinpä potilaiden DNA: n tutkimuksessa sekä kromosomeissa, joissa restriktiokohta on läsnä polymorfisessa alueessa, DNA: n lyhyet fragmentit paljastetaan elektroforeesille. Potilailla, jotka ovat homotsygoottisia mutaatiota varten, joka modifioi polymorfisen restriktiokohdan, havaitaan suurempia pituisia fragmentteja ja heterotsygoottisissa fragmentissa havaitaan lyhyitä ja pitkiä fragmentteja.
[