Immunologinen tutkimus urologiassa

Immunogrammin osoittaminen urooppiseen potilaaseen tarkoittaa sitä, että osallistuva lääkäri ottaa immuunijärjestelmän häiriöitä. Monistaa bakteeri-, virus-, sieni-infektiot, allergiset reaktiot, systeemiset sairaudet voivat olla näiden häiriöiden oireita, joille on tunnusomaista useita oireyhtymiä (infektio, syöpä, allerginen, autoimmuunisairauksien, lymfoproliferatiiviset). Yksi potilas voi olla useita oireyhtymiä. Esimerkiksi krooniset infektiotaudit (tarttuva oireyhtymä) voi aiheuttaa immuunikato ja immuunijärjestelmän puutos voi ilmetä alttius tartuntataudeille ja syövän (Cancer oireyhtymä). Infektioiden alttius saattaa esiintyä sekundäärisen immuunipuutoksen taustalla, joka on kehittynyt lymfoproliferatiivisen taudin, esimerkiksi leukemian, seurauksena. Immuunijärjestelmän patologisia muutoksia on kolme pääryhmää:

• yhden tai toisen immuniteettiyhteyden kvantitatiivinen tai toiminnallinen riittämättömyys, joka johtaa immunodeficenssitilan kehittymiseen;
• rikkoo immuunijärjestelmän antigeenin tunnistamista, mikä johtaa autoimmuuniprosessien kehittymiseen;
• hyperreagoiva tai "perverssi" immuunivaste, joka ilmenee allergisten sairauksien kehittymisen myötä.

On olemassa seulonta (testit tason 1) ja täyttävät (testit 2 taso) menetelmiä immunodiagnostics. Ensin on määritelty immuunijärjestelmän loukkauksia, jälkimmäiset - määrittämään mekanismeja, jotka liittyvät niiden toteuttamiseen edelleen immuunijärjestelmän korjaamiseksi.

B-soluyhteyden liikkumiskyky

Seulontamenetelmät

• Määritys suhteellisen ja absoluuttisen määrän B-lymfosyyttien kautta immunofluoresenssi- tai virtaussytometriaa käyttämällä monoklonaalisia vasta-aineita B-solujen antigeeneille (CD19, CD20, jossa CD - klusterin erilaistuminen). B-lymfosyyttisisältö on aikuisilla normaali: 8-19% leukosyyttien kokonaismäärästä tai 190-380 solua / μl. Lisäämällä sisältö B-lymfosyyttien esiintyy akuuttien ja kroonisten bakteeri- ja sieni-infektiot, krooninen maksasairaus, systeeminen sidekudoksen sairaudet, krooninen lymfosyyttinen leukemia, multippeli myelooma.
• Pitoisuuden määrittämiseen immunoglobuliinien nespespetsificheskih (F, M, G, E) yksittäisellä radiaalisella immunodiffuusiolla, tai turbometrii nefelometria, radioimmunomääritys tai entsyymi-immunomääritys (EIA). Normaalit aikuisille: immunoglobuliini (Ig) 0,9-4,5 g / l. IgM 03-3,7 g / l. IgG 8,0 - 17 g / l. Immunoglobuliinien pitoisuuden lisääntyminen tapahtuu samoilla patologisilla olosuhteilla, joissa esiintyy B-lymfosyyttien pitoisuuden kasvua. Vähentäen konsentraatio immunoglobuliinien on synnynnäinen hypogammaglobulinemia, kasvaimet immuunijärjestelmän, poistamalla perna, proteiini menetys, sairauksien munuaisten tai suolet, käsittelemällä sytostaattien ja immunodepreesantami.

Menetelmien määrittäminen

• Kiertävien immuunikompleksien määrittäminen veressä selektiivisellä saostuksella polysyleeniglykolissa, jota seuraa spektrofotometrinen tiheyskoe (normaali 80-20 UE). Kiertävien immuunikompleksien lisääntyminen on ominaista akuuteille bakteereille, sienille, virusinfektioille, autoimmuuneille, immunokompleksille, seerumin sairauksille, tyypin 3 allergisille reaktioille;
• Määrittämiseksi spesifisten immunoglobuliinien veressä suhteessa bakteerien ja virusten antigeenit, deoksiribonukleiinihappo (DNA) autoimmuunisairauksissa, tunnistaminen siittiöiden (autoimmuuni hedelmättömyys) ja protivopochechnyh vasta-aineita (pyelonefriitti ja glomerulonefriitti) radiaalisella immunodiffuusiolla tai ELISA: lla.
• Antisperman vasta-aineiden määrittäminen spermassa [MAR-testi (sekoitettu antiglobuliinireaktio)], normaali on negatiivinen.
• Immunoglobuliinien pitoisuuden määrittäminen virtsaan pyelonefriitin ja glomerulonefriitin välisen eripituuden diagnoosin tekemiseksi (proteinuriinin selektiivisyys).
• IgE: n määrittäminen eturauhasmehussa allergisen prostatitin diagnosoimiseksi säteittäisellä immunodiffuusiolla tai ELISA: lla. 
• Tutkimus vasteena blasttransformation Lymfosyyttien B on B-solujen mitogeeni (kermesmarjamitogeenin stimulaatio blasttransformation reaktio B-lymfosyyttien, kun läsnä on T-lymfosyytit), jossa standardin arvon 95-100%.

Immuniteetin T-soluyhteys

Seulontamenetelmät

• Määritys suhteellisen ja absoluuttisen määrän kypsien CD3 T-lymfosyytin reaktio immunofluoresenssilla tai virtaussytometrian käyttäen anti-SDZ monoklonaalisia vasta-aineita. Aikuisten normaali on 58-76% tai 1100-1700 solua / μl. T-lymfosyyttien määrän väheneminen on indikaattori immuniteetin solukytkennän riittämättömyydestä. Tämä on ominaisuus useita primääristä ja sekundääristä immuunivajavuustila (krooninen bakteeri- ja virusinfektioiden: tuberkuloosi, immuunikato, syöpä, krooninen munuaisten vajaatoiminta, trauma, stressi, ikääntyminen, vajaaravitsemus, hoito sytotoksisten lääkkeiden, ionisoiva säteily). T-lymfosyyttien lukumäärän lisääntymistä esiintyy immuniteetin yli-aktiivisuuden taustalla tai lymfoproliferatiivisissa sairauksissa. Tulehduksen myötä T-lymfosyyttien lukumäärä kasvaa ensin ja laskee sitten. T-lymfosyyttien vähenemisen puuttuminen viittaa inflammatorisen prosessin kroonisoitumiseen.
• Lymfosyyttien subpopulaatioiden arviointi.
  • T-apuaineiden määrän (anti-CD4-vasta-aine) määrittäminen. Tavallisesti 36-55% tai 400-1100 solua / μl. Näiden solujen määrän lisääntyminen tapahtuu autoimmuunisairauksissa, Waldenstromin taudissa, antigraftin implantaation aktivaatiolla; määrän väheneminen T-auttajasolujen esiintyy krooninen bakteeri-, virus-, alkueläininfektiot, tuberkuloosi, immuunikato, maligniteetit, palovammat, vammat, aliravitsemus, ikääntyminen, sytostaatit hoito, ionisoivalla säteilyllä.
  • T-suppressorien (anti-CD4-vasta-aineiden) määrän määrittäminen. Tavallisesti 17-37% tai 300-700 solua / μl. T-suppressorien määrän lisääntyminen tapahtuu samoilla olosuhteilla, joissa T-apulaisten määrä vähenee ja niiden väheneminen samassa olosuhteessa, kun T-avustajien sisältö nousee.
  • Immunoregulatorinen indeksi CD4 / CD8, standardissa 1,5-2,5. Yliaktiivisuus yli 2,5 kertaa (allergiset ja autoimmuunisairaudet); hypoaktiivisuus - alle 1,0 (kroonisten infektioiden alttius). Tulehdusprosessin alkamisen myötä immunoregulatorinen indeksi nousee ja kun se hajoaa, se normalisoi.

Menetelmien määrittäminen

• Luonnollisten tappajien (NK-solujen) määrän määrittäminen - anti-CD16- ja anti-CD56-vasta-aineet. CD 16-lymfosyyttien normaaliarvo on 6-26%, CD56-9-19%. Määrän lisääminen NK-solujen esiintyy siirteen hylkimisen, vähentää - virusinfektioissa, syöpä, primaarinen ja sekundaarinen immuunivajavuustila, palovammoja, trauma ja stressi, käsittely sytostaattien ja ionisoivaa säteilyä. 
• T-lymfosyyttien määrän määritys interleukiini-2: n (aktivaatiomarkkerin) reseptorin kanssa - anti-CD25-vasta-aineet. Normi on 10-15%. Niiden määrän lisääntyminen havaitaan allergisissa sairauksissa, elinsiirron hyljinnässä, vasteessa keuhkoihin riippuvien antigeenien hoidossa primaarisen infektion akuutissa jaksossa ja vastaavien sairauksien vähenemisenä, jossa NK-solujen määrä vähenee.
• Aktivointimerkinnän ilmentymisen tarkastelu - II luokan HLA-DR: n histokompatibiliteettimolekyyli. Lisääntynyt ilmentyminen tapahtuu tulehduksellisissa prosesseissa potilailla, joilla on hepatiitti C, keliakia, kuppa, akuutteja hengitystieinfektioita.
• Lymfosyyttien apoptoosin arviointi. Osoitus valmiudesta lymfosyyttien apoptoosia, voidaan tunnistaa niiden ekspression pinnan Fas-reseptorin (CD95) mitokondrioissa ja bd-2-proto-onkogeenin. Apoptoosi arvioitiin lymfosyyttien käsittely kaksi fluoresoivaa väriä: propidiumjodidilla, joka sitoutuu DNA-fragmentit ja anneksiini Y, fosfatidyyliseriiniin sitoutuva solukalvolla esiintyy alussa apoptoosin. Tulosten arviointi suoritetaan virtaussytometrillä. Tulosten laskeminen perustuu erilaisten väriaineiden värjäämien solujen suhteeseen. Värjäytymättömät solut ovat eläviä soluja, joka liittyy ainoastaan anneksiini Y, - varhaisen apoptoosin merkkejä, propidiumjodidilla, ja anneksiini I - myöhässä ilmentymiä apoptoosin, värjäämällä vain propidiumjodidilla osoittaa kuolion.
• T-lymfosyyttien lisääntymisen arviointi in vitro.
  • Solun blastogeneesin muutos on lymfosyyttien räjähdysmuunnoksen reaktio. Leukosyyttejä inkuboidaan minkä tahansa kasvigeenin mitogeenin (lektiinit) kanssa. Yleisempiä fytohemagglutiniinia 72 tunnin ajan, tee sitten masto, tahra se ja laske räjähdysten määrä! Stimulointi-indeksi on kokeessa (viljelmä fytohemagglutiniinin) transformoitujen solujen prosenttiosuuden suhde kontrollin transformoitujen solujen prosenttiosuuteen (viljelmä ilman fytohemagglutiniinia). Lymfosyyttien räjähdysmuunnoksen reaktio voidaan arvioida sisällyttämällä radioaktiivinen leima (ZN-tymidiini) viljeltyihin soluihin, koska DNA-synteesi lisääntyy solujen jakautumisessa. Proliferatiivisen vasteen häiriöt esiintyvät sekä infektioihin, onkologisiin sairauksiin, munuaisten vajaatoimintaan ja kirurgisiin toimenpiteisiin liittyvien primaaristen ja sekundaaristen immunodeficientien yhteydessä.
  • Arviointi näistä tutkimuksista, ilmentymisen aktivaatiomarkkereiden (CD25, transferriinireseptorin - CD71) -molekyylien ja MHC-luokan II HLA-DR, jotka ovat oleellisesti poissa lepäävien T-lymfosyyttejä. T-lymfosyytit fytohemagglutiniinilla jälkeen 3 päivä ilmaisu aktivaatiomarkkereiden analysoitiin suoralla tai epäsuoralla immunofluoresenssilla, virtaussytometriaa käyttämällä monoklonaalisia vasta-aineita erittyy reseptoreihin.
  • Määrän mittaamiseksi välittäjien syntetisoida aktivoidut T-lymfosyytit [interleukiini (IL) 2, IL-4, IL-5, IL-6, gamma-interferoni, jne.], Radioimmunomäärityksellä tai ELISA: lla. Erityisen tärkeä on y-interferonin ja IL-4: n pitoisuuden arviointi TH: n ja Th2: n markkereina aktivoitujen viljelmien supernatantissa ja solussa. Jos mahdollista, on tarkoituksenmukaista määrittää vastaavan sytokiinin geenin ilmentyminen matriisin ribonukleiinihapon tasolla tuotettavalle solulle ja reseptoreiden ilmentymisen voimakkuus vastaaville sytokiineille.
    
• Lymfosyyttien migraation estämisen reaktio. Herkistetyt T-lymfosyytit reaktiossa antigeenin vapautumisen lymfokiinien kanssa, mukaan lukien tekijät. Estää lymfosyyttien migraatiota. Inhibition ilmiö havaitaan, kun mitogeenit tuodaan soluviljelmään. Inhibitioasteen arviointi mahdollistaa lymfosyyttien kyvyn vapauttaa sytokiinejä. Normaalisti migraation taajuus riippuen spesifisestä mitogeenista on 20-80%.
• NK-solujen sytotoksisuuden arviointi. Määritä luonnollisten tappajasolujen kyky tappaa erytromyalosidisen linjan K-562 kohdesolut. Jos arvioidaan vasta-aineesta riippuvainen sytotoksisuus, käytetään IgG-vasta-aineilla päällystettyjä kohdesoluja. Kohdesoluja leimataan 3H-uridiinilla ja inkuboidaan efektorisolujen kanssa. Kohdesolujen kuolema arvioidaan radioaktiivisen leiman vapautumisesta liuokseen. Sytotoksisuuden väheneminen tapahtuu pahanlaatuisten kasvainten hoidossa. Joissakin tapauksissa, kun tarvitaan ennuste interleukiini-hoidon tehokkuudesta, NK-solujen sytotoksisuus arvioidaan, kun niitä inkuboidaan tiettyjen sytokiinien kanssa.

Fagosyyttien toiminnan tutkiminen

Seulontamenetelmät

Tutkimus mikrobisolujen imeytymisestä fagosyytteillä (lateksihiukkasten fagosytoosi, stafylokokin, Escherichia colin tai mikrobien eristetyt potilaat). Sentrifugoimalla heparinisoitua verta, eristetään leukosyyttien suspensio, IV-veriryhmän seerumi lisätään opsonisaatioon (opsoniinit ovat proteiineja, jotka parantavat fagosytoosia). Mikrobiisuspensio laimennetaan, sekoitetaan leukosyyttien kanssa ja inkuboidaan 120 min, näytteenotto analyysiä varten 30.90.120 minuutin kuluttua inkuboinnin aloittamisesta. Valitut leukosyyttisuspensiot tekevät tahroja. Määritä seuraavat fagosytoosi-indikaattorit:

• fagosyyttinen indeksi - solujen prosenttiosuus, joka tuli fagosytoosiin 30 minuutin ja 120 minuutin inkubaation aikana; fagosyyttisen indeksin normatiivinen arvo (30) 94% fagosyyttisestä indeksistä (120) - 92%;
• fagosyyttinen luku - solunsisäisten bakteerien keskimääräinen lukumäärä; fagosyyttisen luvun (30) normatiivinen arvo 11%, fagosyyttinen luku (120) - 9,8%;  
• fagosyyttisen lukumäärän kerroin - fagosyyttisen luvun (30) ja fagosyyttisen luvun (120) suhde; normaali 1,16;
• neutrofiilien bakterisidinen indeksi on fagosyyttien sisällä tapettujen mikrobien lukumäärän suhteessa käytettyjen mikrobien kokonaismäärään; normissa 66%.

Menetelmien määrittäminen

• Nutsitutkimuksen fagosyyttien bakterisidisen aktiivisuuden tutkiminen nitrosyylitetratsoliumilla (NST) on NST-testi. Leukosyytteihin lisätään typpihapollisen tetratsoli-keltaisen väriainetta. Kun neutrofiili imeytyy väriaineeseen, pelkistys tapahtuu hapen vapaiden radikaalien vaikutuksesta, mikä johtaa siniseen värjäykseen. Reaktio suoritetaan 96-kuoppaisella tasapohjaisella levyllä. Ensimmäisissä kolmessa kuopassa HCT: n ja leukosyyttien seoksella lisätään Hanks-liuosta (spontaani HCT) jälkimmäisissä lateksipartikkeleissa; inkuboidaan 37 ° C: ssa 25 minuutin ajan. Tulokset luetaan lukemalla 540 nm: ssä ja ekspressoidaan tavanomaisissa yksiköissä. Laske stimulointikerroin (K _st ), joka on yhtä suuri kuin optisen tiheyden suhde stimuloiduissa kuopissa keskimääräiseen optiseen tiheyteen kuopissa ilman stimulaatiota. Terveillä ihmisillä _{HCT spont} = 90 ± 45 UE, NST _Stim = 140 ± 60 UE. K _st = 1,78 ± 0,36.
• Tarttumamolekyylien tutkiminen. Virtausyttofluorimetrian avulla määritetään pinta-antigeenien CD11a / CD18, CD11b / CD18, CD11c / CD18 ekspressio. Immuunipuutteet, joilla on adheesiota, ilmenevät relapsoivilla infektioilla, haavan hiljalevyllä ja pussien puuttumisella infektiokohtaan.

Komplementtijärjestelmän tutkiminen

Seulontamenetelmät

Komplementin hemolyyttisen aktiivisuuden määrittäminen - komplementtiaktivaation klassisen reitin tutkimus. Potilaiden seerumin ja terveiden henkilöiden erilaiset laimennokset lisätään vasta-aineiden peittämien ramien erytrosyytteihin. Hemolyyttisen aktiivisuuden yksikkö otetaan käänteiseksi seerumin laimennokseksi, jossa 50% erytrosyytteistä tuhoutuu. Hemolyysiaste arvioidaan fotometrisesti hemoglobiinin saannolla liuoksessa. Täydennyksen hemolyyttisen aktiivisuuden vähenemistä havaitaan systeemisessä lupus erythematosus -taudissa, johon liittyy munuaisten vajaatoiminta, akuutti glomerulonefriitti. Yhdistetyt immunodeficiencies, myasthenia gravis, virus hepatiitti, lymfoomat, lisääntyvät - obstruktiivisella keltaisuus, kilpirauhasen vajaatoiminta Hashimoto. Reuma, nivelreuma, nodulaarinen periarteriitti. Dermatomyosiitti, sydäninfarkti, haavainen paksusuolentulehdus, Reiterin oireyhtymä, kihti.

Menetelmien määrittäminen

• Lisäkomponenttien määrittäminen. Kvantitatiivinen määritys suoritetaan säteittäisen immunodiffuusiomenetelmän ja nefelometrian avulla.
  Tutkimus ei ole informatiivinen, ellei komplementtien komponenttien antigeeniset ominaisuudet muutu.
• Todettiin, että komplementin Clq-komponentti parantaa fagosytoosia ja välittää solun sytotoksisuutta. Sen väheneminen tapahtuu immuunikompleksien, systeemisen lupus erythematosuksen, märehtävien infektioiden ja kasvainten sairauksissa.
• C3-komponentti osallistuu klassisen ja vaihtoehtoisen komplementtireitin aktivoitumiseen. Sen pitoisuuden pienentäminen liittyy kroonisiin bakteeri- ja sieni-infektioihin, kierto- tai kudos-immuunikompleksien esiintymiseen.
• C4-komponentti osallistuu klassisen reitin aktivoitumiseen. Pitoisuuden pienentäminen liittyy komplementin pidentyneeseen aktivoitumiseen immuunikomplekseilla ja C1-inhibiittorin pitoisuuden pienenemisen, joka ohjaa klassisen komplementtireitin aktivaatiota. C4-puutos esiintyy systeemisen lupus erythematosuksen kanssa, C4: n lisääntyminen tapahtuu munuaissairaus, siirteen hyljintä, akuutti tulehdus ja ruoansulatuskanavan sairaudet.
• C5a on C5-molekyylin pieni fragmentti, joka on erotettu siitä komplementtijärjestelmän aktivaation tuloksena. Pitoisuuden lisääntyminen tapahtuu tulehduksen, sepsin, atopisten ja allergisten sairauksien varalta.
• Cl-inhibiittori on monimuotoinen tekijä. Se ohjaa komplementti C1-komponentin aktivaatiota, estää kallikreiinin, plasminin ja aktivoidun tekijän Hagemanin, proteaasien Cls ja Or. C1-inhibiittorin puute johtaa angioödeemiin.
• täydentäviä tutkimuksia. Standardiseerumiin, josta puuttuu täydentävä komponentti, lisätään testiseerumi ja komplementin hemolyyttinen aktiivisuus määritetään. Jos hemolyyttinen aktiivisuus ei palauteta normaaliksi, uskotaan, että tämän komplementtikomponentin aktiivisuus testiseerumissa pienenee.

[1], [2], [3], [4], [5], [6]