Koirapussin hematopoieettiset kantasolut

On selvää, lisääntyvien eri ja erilaistumista hematopoieettisten kantasolujen teho johtuu erityispiirteitä niiden ontogenetic kehitystä, koska parhaillaan ontogenesis ihmisen muutokseen jopa lokalisoinnin pääalueeseen hematopoieesin. Hematopoieettisten esisolujen ovat sikiön ruskuaispussiin sitoutuneet yksinomaan muodostumisen erytropoieettisten solulinjoissa. Kun primaarisen GSK: n migraatio maksaan ja pernaan näissä elimissä on mikroympäristössä, komitioiden rivit laajenevat. Erityisesti hematopoieettiset kantasolut saavat kyvyn tuottaa imusolmukkeita. Ennenaikaisessa vaiheessa hematopoieettiset prekursorisolut saavuttavat lopullisen lokalisoinnin alueen ja kolonisoivat luuytimen. Sikiön veren sikiön kehittymisprosessissa on huomattava määrä kantojen hemopoieettisiä soluja. Esimerkiksi raskauden 13. Viikolla HSC-taso saavuttaa 18% mononukleaaristen verisolujen kokonaismäärästä. Tulevaisuudessa niiden sisällön asteittainen lasku on vähentynyt, mutta jopa ennen syntymää, köysien veren HSC: n määrä poikkeaa vähän luuytimen määrästä.

Mukaan klassisen ideoita, luonnollinen muutos lokalisoinnin hematopoieesin alkion kehityksen aikana nisäkkäiden suoritetaan migraation ja otettiin käyttöön uudet mikroympäristön pluripotentteja hematopoieettisia kantasoluja - ruskuaispussista maksaan, pernaan ja luuytimeen. Koska alkuvaiheessa alkion kehityksen hematopoieettisten kudosten sisältää suuren määrän kantasolujen, joka pienenee raskauden, lupaavin saamiseksi hematopoieettisten kantasolujen pidetään hematopoieettisten fetaalimaksakudoksen eristettiin abortnogo materiaaliin 5-8 viikon raskausajan.

[1], [2], [3], [4], [5], [6]

Hematopoieettisten kantasolujen alkuperä

Se, että erytrosyyttien alkionmuodostus on peräisin keltuaisen paksun verisarjoista, on kiistaton. Kuitenkin, in vitro erilaistuminen mahdollisia hematopoieettisten x ruskuaispussin soluja on hyvin rajoitettu (ne erottavat pääasiassa punasolut). On huomattava, että elinsiirron hematopoieettisten kantasolujen ruskuaispussista ei pysty palauttamaan hematopoieesia pitkään. Osoitettiin, että nämä solut eivät ole aikuisen organismin GSK: n esiasteita. Totta GSK näkyvät aikaisemmin, on 3-5 viikkoa sikiön kehityksen, vyöhykkeellä mahalaukun kudoksen ja verisuonten endoteelissä (paraaortic splanchnopleura, P-SP), ja tilalle kirjanmerkkejä aortan sukurauhasten ja primaarisissa munuaissoluissa - alalla tai niin mesonefros nimeltään AGM-alue. On osoitettu, että solut, AGM-alueella eivät ole vain lähde HSC, mutta endoteelisolujen verisuonten, ja osteoklastien, prosessien luun muodostumista. On 6. Raskausviikkoa varhaisen hematopoieettisten esisolujen AGM-alueella matkustaa maksaan, joka on tärkein verta muodostavien elinten sikiö ennen syntymää.

Koska tämä hetki on äärimmäisen tärkeä solujensiirron näkökulmasta, HSC: n alkuperän ongelma ihmisen alkion muodostumisprosessissa ansaitsee tarkemman esityksen. Klassisen Ajatus siitä, että hematopoieettiset kantasolut nisäkkäiden ja lintujen johdettu adnexal lähteestä, joka perustuu tutkimukseen Metcalf ja Moore, joka ensimmäisenä käytetty kloonaustekniikoihin GSK ja heidän jälkeläistensä eristetty ruskuaispussista. Tulokset työnsä muodosti perustan siirtymisen teoria, jonka mukaan GSK, ensimmäinen syntyi ruskuaispussissa, johdonmukaisesti miehittää ohimenevä ja lopullinen hematopoieettisten elinten menetelmässä muodostumisen niiden mikroympäristön. Näin katsottiin, että GSK: n syntyminen, joka alun perin paikallistettiin keltuaikaan, toimii lopullisen hematopoieesin solukohtaisena perustana.

Hematopoieettiset kantasolut ruskuaispussista ovat kaikkein aikaisin hematopoieettisten esisolujen. Niiden fenotyyppi on kuvattu kaavalla AA4.1 + CD34 + c-kit +. Toisin kuin kypsä luuytimen GCS, ne eivät ilmentä Sca-1-antigeenejä eikä MHC-molekyylejä. Näyttäisi siltä, että ulkonäkö merkki pinta-antigeenin kalvot GSK keltuaispussin viljelemällä vastaa niiden erilaistumisen alkion kehityksen aikana, jolloin muodostuu sitoutunut riviä hemopoieesia: vähentää ekspressiotaso on CD34-antigeenin ja Thy-1 lisääntyy ilmentymisen CD38 ja CD45RA, näyttävät HLA-DR-molekyylejä. Seuraavassa indusoi sytokiinien ja kasvutekijöiden, in vitro ilmentyminen erikoistuminen alkaa spesifisten antigeenien hematopoieettisten esisolujen tietyn solulinjan. Kuitenkin tutkimuksen tulokset alkion hematopoieesin edustajia kolmesta luokasta selkärankaisten (sammakkoeläimiä, lintuja ja nisäkkäitä), ja erityisesti analyysi alkuperästä HS-solujen vastaavat lopullisia hematopoieesia postnataalista ontogenesis vastoin klassista ideoita. On todettu, että kaikissa alkiongelmassa tutkittujen luokkien edustajissa muodostuu kaksi itsenäistä aluetta, joissa GSK: t syntyvät. Extraembryonic "klassinen" alue edustaa ruskuaispussin tai sen analogeja, kun taas viime aikoina tunnistettu intraembrionalnaya HSC lokalisointi vyöhyke käsittää para-aortan mesenkyymin ja AGM-alueella. Nykyään voidaan väittää, että sammakkoeläimet ja lintuja lopullinen HSC: iden peräisin intraembrionalnyh lähteistä, kun taas nisäkkäillä ja ihmisellä GSK osa ruskuaispussista lopulliset hematopoiesis on edelleen mahdotonta kokonaan poistaa.

Alkion hematopoieesia ruskuaispussissa on olennaisesti ensisijainen erytropoieesia, joka on tunnettu siitä, että säilyttäminen ytimen kaikissa vaiheissa punasolujen kypsymisen ja tyyppi sikiön hemoglobiinin synteesin. Uusimpien tietojen, ensisijainen aalto erytropoieesin päättyy ruskuaispussissa 8. Päivänä alkionkehityksen. Sitä seuraa ajan kertyminen lopullisen erytroidiedeltäjäsolujen - BFU-E, joka on muodostettu yksinomaan ruskuaispussin ja ilmestyi 9 päivänä tiineyden. Seuraavassa vaiheessa alkionkehityksen jo muodostunut lopullinen erytroidiedeltäjäsolujen - CFU-E, samoin kuin mastsolujenja CFU-GM (!). Se perustuu siihen, että tämän näkökulmasta, että lopulliset esisolujen syntyä Ruskuaispussissa kulkeutua verenkiertoon, kertyy maksaan ja nopeasti aloittaa ensimmäisen vaiheen intraembrionalnogo hematopoieesia. Mukaan tällaisia esityksiä, keltuaispussiin voidaan pitää, toisaalta, koska paikka ensisijaisen erytropoieesin, ja muut - ensimmäisenä lähteenä lopullisen hematopoieettisten esiastesolujen alkion kehitykseen.

On osoitettu, että pesäkkeitä muodostavien solujen, joilla on korkea proliferatiivinen potentiaali voidaan eristää ruskuaispussista on jo 8. Päivänä tiineyden, eli kauan ennen sulkemista verisuoniston alkion ja ruskuaispussin. Lisäksi johdettu ruskuaispussista korkea proliferatiivinen potentiaali in vitro pesäkkeitä muodostavia soluja, koko ja solun koostumus, joka ei poikkea vastaavat parametrit viljelmän kasvun luuytimen kantasoluja. Samaan aikaan, jossa pesäke uudelleensiirto ruskuaispussin solut, joilla on korkea proliferatiivinen potentiaali on muodostettu merkittävästi enemmän pesäkkeitä muodostavia soluja ja tytär multipo- esisolujen kuin luuytimen hematopoieettisten esisolujen.

Loppupäätelmä roolista hematopoieettisten kantasolujen ruskuaispussissa lopullinen hematopoieesia voi antaa tuloksia, jossa kirjoittajat saatu linja endoteelisolujen ruskuaispussin (G166), joka tehokkaasti tukee hänen soluproliferaation fenotyyppiset ja funktionaaliset ominaisuudet HSC (AA4.1 WGA +, matala tiheys ja heikko liima-ominaisuus). Sisällön viimeistään silloin, kun on viljelty feeder kerros soluja S166 varten 8päivä kasvoi yli 100 kertaa. Sekoitettu pesäkkeet kasvatettiin alakerroksen ja S166 solulinjan, tunnistettiin granulosyyttien, megakaryosyyttien, monosyytit, ja räjähdys solut, ja solujen esiasteiden B- ja T-lymfosyytit. Ruskuaispussin solut, kasvaa alikerroksen endoteelisolujen on kyky lisääntymään ja pidettiin kokeissa kirjoittajat kolme kanavaa. Talteenotto niiden kautta hematopoieesia aikuisissa hiirissä, joilla on vakava yhdistetty immuunipuutos (SCID) mukana muodostumista kaikkien leukosyyttien tyyppejä, sekä T- ja B-lymfosyytit. Tekijät kuitenkin näiden tutkimukseen käytetään soluja ruskuaispussista 10 päivän alkio, josta ulkopuolisen ja intraembrionalnye verisuonistoon on jo suljettu, se ei sulje pois kesken solujen ruskuaispussista GSK intraembrionalnogo alkuperää.

Samaan aikaan, analyysi erilaistumisen potentiaalin hematopoieettisten solujen varhaisessa kehitysvaiheessa, ennen yhdistämistä valittu verisuonistoon alkion ja ruskuaispussin (8-8,5 päivää hedelmöityksestä) paljasti, että läsnä prekursorien T- ja B-solujen ruskuaispussissa, mutta ei kehossa alkion . In vitro -menetelmä kaksivaiheisen viljelyn järjestelmä on yksikerroksinen epiteelisolujen ja epiteelinalaisella solut kateenkorvan mononukleaarisolut erilaistuneet keltuaispussiin pre-T ja kypsiä T-lymfosyytit. Alle samoissa viljelyolosuhteissa, mutta yksisolukerroksilla stroomasolujen maksan ja luuytimen mononukleaarisia soluja ruskuaispussin olivat erilaistuneet esi-B-solujen ja kypsien IglVT-B-lymfosyytit.

Tulokset näistä tutkimuksista viittaavat siihen, mahdollisuus solujen kehitystä immuunijärjestelmän välillä extraembryonic keltuaispussin kudoksen muodostuminen primaaristen T ja B-solulinjat riippuu tekijöistä hematopoieettisten strooman mikroympäristön alkion elimiä.

Muut kirjoittajat osoittivat, että ruskuaispussin soluja potencies käsittää imukudos- erilaistumista, ja muodostettu lymfosyytit eivät eroavat antigeenisiä ominaisuuksia kypsä eläimillä. On havaittu, että solut ruskuaispussiin 8-9 päivän alkio voidaan palauttaa kateenkorvan lymfopoieesin on atimotsitarnom syntymistä kypsä CD3 + CD4 + - ja CD8 + SDZ + -lymfosyyttien, jolla on koristeltu ohjelmistoon T-solujen reseptoreihin. Siten, kateenkorva voidaan täyttää solut adnexal alkuperää, mutta se on mahdotonta sulkea pois sitä mahdollisuutta siirtymisen aikana kateenkorvan esisolujen T-lymfosyyttejä intraembrionalnyh lymfopoieesin lähteistä.

Kuitenkin, transplantaatio ruskuaispussin hematopoieettiset solut säteilytettyihin aikuinen vastaanottajille ei aina valmis uudelleenpopulointivaiheen pitkä tuhoutunut alueilla hematopoieettisten kudoslokalisaation, joka on in vitro soluissa ruskuaispussin muodostavat pernan pesäkkeitä paljon pienempi kuin solujen AGM-alueella. Joissakin tapauksissa, kautta ruskuaispussin solut 9 päivän alkio on edelleen mahdollista saavuttaa pitkän aikavälin (enintään 6 kuukausi) uusimispäivää hematopoieettisen kudoksen säteilytettyä vastaanottajille. Kirjoittajat uskovat, että solut ruskuaispussista fenotyyppi CD34 + c-kit + niiden kyky kiinnittyä uudelleen tuhoutunut verta muodostavien elinten, ei vain eivät poikkea Yhtiökokouksen-alueella, mutta myös tehokkaammin palauttaa hematopoieesia, kuten ruskuaispussissa ne sisälsivät lähes 37 kertaa enemmän .

On huomattava, että kokeissa, hematopoieettiset solut ruskuaispussin kanssa merkki antigeenien GSK (c-kit + ja / tai CD34 + ja CD38 +), joka otettiin käyttöön suoraan maksaan tai vatsan laskimoon jälkeläiset Hiirillä injektiot busulfaani ja 18 päivänä raskauden. Näiden vastasyntyneiden eläinten oma myelopoieesin ollut voimakkaasti masentunut johtuen poistamisesta hematopoieettisten kantasolujen aiheuttama busulfaani. Elinsiirron jälkeen, HS-solujen ruskuaispussin kuukausia ja perifeerisen veren vastaanottajien tunnistettu verisoluja, jotka sisältävät luovuttaja markkerin - glitserofasfatdegidrogenazu. On havaittu, että ruskuaispussin GSK vähentää sisällön lymfoidisolujen, myeloidinen ja erytroidien suvusta veren, kateenkorvassa, pernassa ja luuytimessä, jossa taso kimerismin oli korkeampi tapauksessa intrahepaattinen, ei suonensisäisen ruskuaispussin soluja. Kirjoittajat ehdottavat, että HS-solujen on ruskuaispussista alkioiden kehityksensä alkuvaiheessa (jopa 10 päivää) onnistuneen ratkaisun hematopoieettisen elinten aikuisten saajat tarvitsevat alustavasti yhteistyössä hematopoieettisten mikroympäristön maksan. On mahdollista, että alkionkehityksen on ainutlaatuinen kehitysvaiheessa, kun solut ruskuaispussin, siirtyvät pääasiassa maksassa, ja sitten hankkia kyky kolonisoida peruskudos muodostavien elinten aikuisten vastaanottajille.

Tässä suhteessa on huomattava, että kimerismi solujen immuunijärjestelmän havaitaan usein transplantaation jälkeen luuytimen solujen säteilytetty vastaanottajien sukukypsiin - verisolujen luovuttajan viimeksi fenotyyppien riittävän suuri määriä joukossa B- ja T-lymfosyytit ja granulosyytit vastaanottaja, joka kestää vähintään 6 kuukautta.

Morfologiset menetelmiä hematopoieettiset solut nisäkkäillä ensin tunnistetaan 7. Päivänä alkionkehityksen ja esittelee hematopoieettisten saarilla aluksia ruskuaispussista. Kuitenkin, luonnollinen hematopoieettisten erilaistumista ruskuaispussissa rajoittuu ensisijaisesti punasolujen säilyttämisessä ydin ja syntetisoimalla sikiön hemoglobiinin. Toisaalta perinteisiä ajateltiin, että ruskuaispussista on ainoa lähde HSC siirryttäessä verta muodostavien elinten kehittyvälle sikiölle ja antaa lopullisia hematopoieesia eläintä, koska HSC: n ilmaantuminen kehossa alkion on sulkeminen verisuoniston alkion ja ruskuaispussi. Tämän tueksi näkökulmasta, mukaan tiedot, jotka in vitro kloonaus solujen ruskuaispussin aiheuttaa granulosyyttien ja makrofagien, joka on in vivo - perna pesäkkeitä. Sitten aikana transplantaatiokokeissa todettiin, että hematopoieettiset solut ruskuaispussista, mikä ruskuaispussissa kykenevät erottamaan ainoastaan ensisijaiseen punasoluja mikroympäristön maksan vastasyntyneen ja aikuisen SCID-hiirten tuhoutunut kateenkorva tai strooman syöttölaite hankkia kyky kiinnittyä uudelleen hematopoieettisen elinten kaikki jälleen hemopoieesin riveistä myös aikuisille vastaanottavissa eläimissä. Periaatteessa tämä mahdollistaa niiden luokittelemisen todelliseksi GSK: ksi - soluina, jotka toimivat jälkikäteen. Oletetaan, että ruskuaispussista yhdessä AGM alueen lähde HS-solujen lopullisten hematopoieesin nisäkkäillä on kuitenkin vielä epäselvä niiden panosta hematopoieettisen järjestelmän. Kahden hemopoieettisen elimen samankaltaisten toimintojen nisäkkäiden olemassaolon biologinen tunne ei myöskään ole ymmärrettävää.

Vastausten etsiminen näihin kysymyksiin jatkuu. In vivo pystynyt osoittamaan läsnäolon ruskuaispussista alkioiden 8-8,5-päivä solujen lymfopoieesin vähentää subletaalisti säteilytettyjen SCID-hiirissä, joilla on vakava puute T- ja B-lymfosyytteihin. Vatsakupin hematopoieettiset solut pistettiin sekä intraperitoneaalisesti että suoraan pernan ja maksan kudokseen. Jälkeen 16 viikko, vastaanottajat tunnistaa TCR / CD34 \ CD4 + ja CD8 + T-lymfosyytit ja B-220 + lgM + -B-solujen leimattu antrhgenami luovuttaja MHC. Elimistössä kirjoittajat eivät löytäneet kantasolujen alkuperää 8-8,5 päivän alkioita, jotka kykenivät tällaiseen immuunijärjestelmän palauttamiseen.

Ruskuaispussin hematopoieettiset solut omaavat korkean proliferaatiopotentiaali ja pystyvät pitkän aikavälin itse lisääntymisen in vitro. Jotkut kirjoittajat ovat tunnistaneet näiden solujen perusteella pitkän aikavälin HSC (noin 7 kuukausi) sukupolven erytroidiedeltäjäsolujen erillisiä luuydinprogenitorit punasolujen linjan viemällä pidempi, suuri koko pesäkkeitä, lisääntynyt herkkyys kasvutekijöiden ja pitempi proliferaatiota. Lisäksi, sopivissa olosuhteissa keltuaikaman solujen viljelyä varten in vitro, muodostetaan myös imusolun esiastesoluja.

Nämä tiedot viittaavat siihen, että yleinen lähde ruskuaispussista GSK, jossa vähemmän, ja näin ollen on suuri proliferaatiopotentiaali kuin luuytimen kantasoluja. Kuitenkin, huolimatta siitä, että ruskuaispussin sisältää pluripotentteja hematopoieettisten esisolujen, pitkän aikavälin tukee useita rivejä hematopoieettisten erilaistumista in vitro, joka on ainoa kriteeri hyödyllisyyttä kokonaismassa on niiden kyky kiinnittyä uudelleen pitkittynyt hematopoieettisten elinten vastaanottajan, hematopoieettiset solut, jotka ovat geneettisesti puutteellinen tai vahingoittunut. Siten, keskeinen kysymys on se, onko pluripotentteja hematopoieettisia soluja ja ruskuaispussin vaeltavat ja asuttaa hematopoieettisten elinten ja tselesoorbrazno tarkistetaan teos, joka osoitti niiden kykyä kiinnittyä uudelleen verta muodostavien elinten sukukypsien eläinten muodostumista suurten hematopoieettisten linjojen. Alkioiden Lintujen 70-luvulla todettiin intraembrionalnye lähteistä lopullisen HSC, joka oli jo asetettu kyseenalaiseksi vakiintunutta käsitykset alkuperästä adnexal GSK edustajat mukaan lukien muiden luokkien selkärankaisten. Viime vuosina on ollut julkaisuja läsnäolo nisäkkäissä kaltaiset intraembrionalnyh sisältäviin sivustoihin GSK.

Jälleen kerran toteamme, että perusteellista asiantuntemusta tällä alalla on erittäin tärkeä käytännön solutransplantaatiossa, sillä paitsi auttaa määrittelemään ensisijainen lähde HSC, mutta myös perustaa erityispiirteisiin vuorovaikutuksen ensisijainen hematopoieettisten solujen geneettisesti ulkomaisen organismeja. On tunnettua, että antaminen ihmisen hematopoieettisten kantasolujen lampaan sikiön maksassa organogeneesin alkio vaiheessa johtaa kimeeristen eläinten veren ja luuytimen stabiilisti määritetään 3-5% ihmisen hematopoieettisten solujen. Tällöin ihmisen HSC: illa eivät muuta karyotyyppi, säilyttäen korkea leviämisen ja kyky erilaistua. Lisäksi siirrettyjen ksenogeeniset HSC: llä ei ole ristiriidassa immuunijärjestelmää ja fagosyyttisten solujen isäntäorganismin ja ei muuttunut kasvainsoluja, jotka muodostivat perustan intensiivinen kehittää menetelmiä kohdunsisäinen korjaamiseksi perinnöllisiä geneettisiä tautia sosiaalineuvostojen tai HSC: t transfektoitiin puutteellinen geenejä.

Mutta missä vaiheessa alkionkehityksen tarkoituksenmukaista toteuttaa tällaisen korjauksen? Solut ensimmäistä kertaa, määritettiin hematopoieesin nisäkkäillä näyttää välittömästi istuttamisen jälkeen (päivä 6 hedelmöityksestä), kun morfologiset ominaisuudet hematopoieettisten erilaistumista ja oletettujen hematopoieettisten elimiä ei ole vielä saatavilla. Tässä vaiheessa, dispergoitu hiiren alkion solut voidaan uudelleenkan- hematopoieettisten elimet säteilytetty vastaanottajat muodostamiseksi erytrosyyttien ja lymfosyyttien, eri isäntäsoluista tai hemoglobiini tyypinmukaisuus vastaavasti glitserofosfatizomerazy ja lisäksi kromosomaalisen markkerin (Tb) luovuttajan soluja. Nisäkkäillä, kuten linnut, yhdessä ruskuaispussista sulkemisen koko verisuoniston suoraan kehoon alkion para-aortan splanhnoplevre näkyvät hematopoieettiset solut. Kohteesta AGM-varatulle hematopoieettiset solut AA4.1 + fenotyyppiä, joka on yksilöity multipotentteja hematopoieettisten solujen, jotka muodostavat T- ja B-lymfosyytit, granulosyytit, megakaryosyyttien, ja makrofageissa. Fenotyyppisesti, nämä multipotentteja esisolut ovat hyvin lähellä luuytimen HSC: iden aikuisilla eläimillä (CD34 + c-kit +). Määrä multipotenttien AA4.1 solujen kaikkien AGM-solun alueella on pieni - ne ovat enintään 1/12 osa sitä.

Ihmisalkioissa havaittiin myös eläinten homologinen AGM-alue, joka sisälsi HSC: tä sisältävän intraembryonisen alueen. Lisäksi ihmisillä yli 80% monipotentiaalisista soluista, joilla on korkea proliferatiivinen potentiaali, sisältyvät alkion runkoon, vaikka tällaisia soluja on läsnä keltuainen pussissa. Yksityiskohtainen analyysi niiden lokalisoinnista osoitti, että satoja tällaisia soluja kootaan kompakteiksi ryhmiksi, jotka sijaitsevat lähellä selkäsauman aortan vent- raalisen seinämän endoteelia. Fenotyyppisesti ne ovat CD34CD45 + Lin-soluja. Päinvastoin, käärmekauhassa, samoin kuin muissa alkion (maksassa, luuytimessä) verenkiertoelimissä, tällaiset solut ovat yksittäisiä.

Näin ollen ihmisalkion AGM-alueella on klustereita hematopoieettisten solujen, jotka liittyvät läheisesti vatsanpuoleisesta selkäpuolen aortan endoteelin. Tämä kosketus voidaan jäljittää ja immunokemiallinen tasolla - ja klustereita hematopoieettisten solujen ja endoteelisolujen, jotka ilmentävät verisuonten endoteelin kasvutekijä, Flt-3-ligandi ja niiden reseptorien FLK-1 ja STK-1, samoin kuin transkriptiotekijän leukemia kantasoluja. Yhtiökokouksen-alue mesenkymaalisten johdannaisten edustaa tiheä tyazhem pyöristetty solut sijaitsevat pitkin selän aortta ja ilmentävät tenaskiini C - glykoproteiinin emäksinen aine osallistuu aktiivisesti prosessien solu-solu-vuorovaikutuksia ja siirtoa.

Multipotentteja kantasoluja AGM-alueella transplantaation jälkeen palauttaa nopeasti hematopoieesia aikuisen hiiren ja altistuvat pitkän aikaa (jopa 8 kuukausi) tarjoavat tehokkaan hematopoieesia. Ruskuaispussissa solut nämä ominaisuudet kirjoittajat ei ole havaittu. Tulokset tästä tutkimuksesta vahvistavat muihin teoksiin, jotka osoittivat, että kehityksensä alkuvaiheessa alkioiden (10,5 päivää) AGM alue on ainoa lähde solujen määritelmän mukaisia GCW, myelooinen ja lymfaattisen palauttaa hematopoieesin aikuisten säteilytetty vastaanottajia.

Kohteesta AGM-varatulle strooman linjan AGM-S3, jotka tukevat sukupolven solujen viljelmässä CFU-GM-esisolujen BFU-E, CFU-E ja CFU sekamuotoinen. Sisällön viimeistään silloin, kun niitä viljeltiin syöttölaite alakerroksen AGM-S3 solulinja kasvaa 10-80 kertaa. Siksi mikroympäristön AGM-alueella läsnä stroomasoluja tehokkaasti tukevat verta, joten hän AGM-alueella voi hyvinkin toimia alkion verta muodostavien elinten - lopullinen lähde HSC, joka GSK muodostaen hematopoieettiset kudosta aikuisen eläimen.

Kehittynyt immunofenotipirovanie solukoostumus AGM-alueella osoittivat, että se sijaita ei ainoastaan multipotentteja hematopoeettisia soluja, mutta myös solut sitoutunut myeloidi- ja imukudoksen (T- ja B-lymfosyytit) erilaistumista. Kuitenkin, kun molekyylitason analyysi yksittäisten CD34 + c-kit + -solut AGM-alueella käyttäen polymeraasiketjureaktiota paljasti aktivoimalla vain beeta-globiinin ja myeloperoksidaasi, mutta ei lymfaattisen koodaavia geenejä synteesi CD34, Thy-1 ja 15. Osittainen aktivointi linjan spesifisten geenien tyypillinen HSC- ja progenitorisolujen sukupolven varhaiset ontogeeniset vaiheet. Koska määrä kommiti- Rowan esiasteiden AGM-alueella 10-päivän alkion 2-3 kertaluokkia pienempi kuin maksassa, voidaan väittää, että päivänä 10 alkion hematopoieesin AGM on vasta alussa, kun taas pääasiassa hematopoieettiset linjat ovat jo käytössä tänä aikana.

Todellakin, toisin kuin aiemmin (9-11 päivää) hematopoieettisten kantasolujen ruskuaispussin ja pinta-ala AGM, joka uudelleensijoittamis hematopoieettiset mikroympäristön vastasyntyneen, mutta ei aikuinen, hematopoieettisten esisolujen 12-17 päivän sikiön maksassa ei edellytä varhaista syntymänjälkeistä mikroympäristön, verta elinten miehittää aikuinen eläin ei ole huonompi kuin vastasyntynyt. HS-solujen transplantaation jälkeen sikiön maksassa aikuisen hematopoieesia in säteilytettyjen vastaanottajan hiirillä oli luonteeltaan polyklonaalinen. Lisäksi, käyttäen leimattua pesäkkeet on esitetty, että toiminta vakiintuneiden klooneista oli täysin tottelee klonaalisen peräkkäin, havaittu aikuisen luuytimessä. Siksi GSK sikiön maksassa merkitty paljon lempeä olosuhteissa ilman prestimulyatsii eksogeenisia sytokiineja, jo perus ominaisuuksia aikuisen HSC: iden ei tarvita alussa jälkeisessä alkion mikroympäristön, osaksi valtion syvä levätä elinsiirron ja liikkeelle klonoobrazovanie peräkkäin mallin mukaisesti klonaalinen peräkkäin.

On selvää, että meidän on pidettävä hieman enemmän yksityiskohtia klonaalisen peräkkäin ilmiöstä. Erythropoiesis kantaa hemopoieettisia kantoja, joilla on korkea proliferatiivinen potentiaali ja kyky erottua kaikilla sitoutuneiden esiasteiden verisolujen linjoilla. Normaalin hematopoieesin intensiteetti suurin hematopoieettisten kantasolujen on lepotilassa ja liikekannalle proliferaatiota ja erilaistumista muodostamalla peräkkäisesti peräkkäisten klooneja. Tätä prosessia kutsutaan klonaaliseksi peräkkäin. Kokeellisia todisteita klonaalisesta perimästä hematopoieettisessa järjestelmässä saatiin tutkimuksissa, joissa GSK oli merkitty retrovirusgeeninsiirrolla. Aikuisille eläimille hematopoieesia ylläpitävät monet samanaikaisesti toimivat hemopoieettiset kloonit, jotka on johdettu GSK: sta. Klonaalisen perinnöllisen ilmiön perusteella kehitettiin GOP: n identifiointiin uudelleenasettama lähestymistapa. Tämän periaatteen mukaan, erottaa pitkäaikainen HSC: t (pitkäaikainen hematopoieettisten kantasolujen, LT-HSC), kykenevät palauttamaan hematopoieesijärjestelmän elinikäisen oppimisen ja lyhytaikaisia HSC, johon toiminto rajoitetun ajan.

Jos ajatellaan Veren kantasolut kannalta repopulyatsionnogo lähestymistavan ominainen hematopoieettisten fetaalimaksasoluilla on niiden kyky luoda siirtomaa, joka kooltaan on paljon suurempi kuin ne, joilla kasvu GSK napanuoraverestä tai luuytimestä, ja tämä koskee kaikkia pesäkkeiden. Tämä tosiasia osoittaa jo alkionmaksan hematopoieettisten solujen lisääntyvän proliferatiivisen potentiaalin. Ainutlaatuinen piirre hematopoieettisten esisolujen fetaalimaksasolut - lyhyempi verrattuna muista lähteistä solusyklin, mikä on tärkeää tehokkuuden kannalta uusimispäivää hematopoieesin elinsiirron. Sellulaarisen koostumuksen hematopoieettisten saadun suspension lähteistä kypsä organismista, osoittaa, että kaikissa vaiheissa yksilönkehityksen tumallisten solujen edustavat edullisesti terminaalisesti erilaistuneita soluja, lukumäärä ja fenotyypin, joka riippuu luovuttajan iän hematopoieettisen ontogenetic kudosta. Erityisesti, suspensio mononukleaaristen luuytimestä ja napanuoran verestä soluihin yli 50% koostuu kypsän lymfoidiperäiset soluja, kun taas vähemmän kuin 10% lymfosyyttien havaittu sikiön maksassa hematopoieettisten kudosten. Lisäksi myeloidinen rivi soluja sikiön maksan ja sikiön erytroidien esittää edullisesti seuraava, kun taas johto veressä ja luuytimessä granulosyytti-makrofagi voittaa elementtejä.

Tärkeää on se, että sikiön maksassa sisältää täydellisen sarjan aikaisintaan hematopoieettisten esisolujen. Jälkimmäisten joukossa, on huomattava, erytroidi-, granulopoeticheskie, megakariopoeticheskie ja usean muuttujan pesäkkeitä muodostavia soluja. Niiden lisää primitiivinen progenitoreja - LTC-IC - pystyvät lisääntymään ja erilaistumaan in vitro 5 tai useamman viikon, ja myös säilyttää funktionaalinen aktiivisuus sen jälkeen, kun juurtumista runkoon vastaanottajan allogeenisten, ja jopa ksenogeeniset siirrettäväksi immuunipuutteisilla eläimiin.

Biologinen toteutettavuus valta sikiön erytroidi- maksasolut (jopa 90% kokonaismäärästä hematopoieettisten solujen) johtuen tarpeesta saada aikaan punasolujen massa kasvaa nopeasti veren tilavuutta sikiön kehitykselle. Sikiön maksassa erytropoieesia ydin- erytroidiesiasteiden edustivat eri kypsyydeltään sisältää sikiön hemoglobiinin (a2u7), joka johtuu korkeampi affiniteetti hapen varmistaa tehokkaan absorption jälkimmäisen äidin verestä. Tehostaminen erytropoieesia sikiön maksassa liittyy paikallisen lisäyksen synteesin erytropoietiini (EPO). On huomionarvoista, että täytäntöönpano hematopoieettisten mahdollisten hematopoieettisten sikiön maksan solujen riittävän läsnäolo yksin erytropoietiini, kun taas linjan sitoutuminen erytropoieesin luuytimen HSC: iden ja napanuoraverestä edellyttää sekä sytokiinien ja kasvutekijöiden, jonka muodostavat EPO-, SCF, GM-CSF ja IL-3. Tässä varhaisessa hematopoieettisten esisolujen eristettiin sikiön maksasta ilman reseptorit EPO, eivät vastaa eksogeenisen erytropoietiinin. Induktioon erytropoieesin suspension sikiön maksan mononukleaaristen solujen edellyttää läsnäoloa kehittyneempiä eritropoetinchuvstvitelnyh solujen fenotyyppi CD34 + CD38 +, jotka ilmentävät EPO-reseptorin.

Kirjallisuudessa ei ole vielä muodostaneet konsensuksen perustamisesta hematopoieesin alkion kaudella. Ei näyttänyt toteen ja toiminnallinen merkitys ulkopuolisen ja intraembrionalnyh lähteitä hematopoieettisten esisolujen. Kuitenkaan ei ole epäilystäkään siitä, että alkionkehityksen ihmisen maksasta on keskeinen elin hematopoieesin ja 6-12 viikkoa hedelmöityksestä on ensisijainen lähde hematopoieettisten kantasolujen, jotka kansoittavat perna, kateenkorva ja luuydin, DDR saavuttaa liittyviä toimintoja pre- ja postnataalisella jaksolla kehittäminen.

On vielä huomattava, että alkionmaksa verrattuna muihin lähteisiin on ominaista korkein HSC-pitoisuus. Noin 30% alkion maksa-CD344-soluista on CD38: n fenotyyppi. Samanaikaisesti lymfoidisten progenitorisolujen (CD45 +) määrä hematopoieesin varhaisvaiheissa maksassa on enintään 4%. Todettiin, että sikiö 7-17 viikkoa tiineyden määrä B-lymfosyyttien kasvaa asteittain kuukausittain "vaihe" on 1,1%, kun taas taso GSK pysyvästi.

Hematopoieettisten kantasolujen funktionaalinen aktiivisuus riippuu myös niiden alkion alkion kehittymisestä. Tutkimus maksasolujen pesäkkeitä muodostava aktiivisuus ihmisalkioiden 6-8 minuuttia ja 9-12 minuuttia raskausviikolla, kun viljeltiin puolikiinteässä väliaineessa SCF, GM-CSF, IL-3, IL-6 ja EPO osoitti, että kokonaismäärä pesäkkeiden 1 , 5 kertaa suurempi HSV-alkionmaksan kylvämisen varhaisessa kehityksessä. Samaan aikaan, määrä maksan progenitorisolujen myelopoieesin CFU-GEMM, on 6-8 viikkoa alkionkehityksen on enemmän kuin kolme kertaa numeron 9-12 viikkoa raskausviikolla. Yleensä, maksan hematopoieettisten pesäkkeen muodostavaa aktiivisuutta ensimmäisen kolmanneksen raskausajan alkion soluissa oli merkittävästi korkeampi kuin sikiön maksan solujen raskauden toisella kolmanneksella.

Edellä esitetyt tiedot viittaavat siihen, että sikiön maksaan aikaisen alkionmuodostuksen on tunnusomaista ole vain korkea pitoisuus alussa hematopoieettisten esisolujen, mutta sen hematopoieettiset solut on tunnusomaista laaja erilaistumisen eri solulinjoja. Nämä ominaisuudet funktionaalisen aktiivisuuden varren hematopoieettisten sikiön maksan solut voivat olla jonkin verran kliinistä merkitystä, koska niiden laatuominaisuuksien mahdollistavat odotettavissa oleva terapeuttinen vaikutus, kun ilmaistaan transplantaation jopa pieni määrä niistä saatujen solujen alkuvaiheessa tiineyden.

Kuitenkin hepatiittien kantasolujen lukumäärän ongelma tehokkaan transplantaation kannalta on edelleen avointa ja merkityksellistä. Yritetään ratkaista se käyttäen alkionmaksan hematopoieettisten solujen itsensä lisääntymismahdollisuuksia in vitro niiden sytokiinien ja kasvutekijöiden stimulaation avulla. Kun jatkuva perfuusio alkion maksaan alkuvaiheen GSC: n bioreaktorissa on 2-3 päivän kuluttua tuotoksesta, on mahdollista saada kantohemopoietisolujen määrä 15 kertaa korkeammalla kuin lähtötasollaan. Vertailun vuoksi on syytä huomata, että HSC-johto-veren saannon 20-kertainen lisääntyminen samoissa olosuhteissa kestää vähintään kaksi viikkoa.

Näin ollen, sikiön maksassa eroaa muista lähteistä hematopoieettisten kantasolujen kuin suurempi pitoisuus sitoutunut ja varhaisen hematopoieettisten esisolujen. Viljelmän kanssa sikiön maksan solujen kasvutekijöiden kanssa fenotyypin CD34 + CD45Ra1 CD71l0W muodossa 30 kertaa enemmän pesäkkeitä kuin vastaavat napanuoraverestä soluja, ja 90 kertaa enemmän kuin luuydin HSC:. Selvin Näiden lähteiden ero sisällön alussa hematopoieettisten esisolujen, jotka muodostavat seka-pesäkkeitä - CFU-määrä-GEMM sikiön maksassa ylittää, että johto veressä ja luuytimessä, vastaavasti 60 ja 250 kertaa.

Tärkeää on se, että jopa 18 viikon alkionkehityksen (alkuvuodesta hematopoieesia luuytimessä) hematopoieettisella toiminnon toteutukseen liittyy yli 60% maksasta soluihin. Koska ennen 13 viikon sikiön kehittyminen ihmisellä ovat poissa kateenkorva ja tymosyyttien vastaavasti transplantaatiota hematopoieettisten sikiön maksan solujen 6-12 viikkoa hedelmöityksestä merkittävästi vähentää reaktion "graft versus host" ja ei edellytä valinta histologisesti luovuttajan, koska se mahdollistaa suhteellisen helppo saavuttaa hemopoieettinen kimerismi.