A-vitamiini veressä

Veren seerumin A-vitamiinin (retinoli) pitoisuuden vertailuarvot (normi): lapsilla 1-6 vuotta - 0,7-1,5 μmol / l, 7-12 vuotta - 0,91-1,71 μmol / l, 13 -19 vuotta - 0,91-2,51 μmol / l; aikuisilla se on 1,05-2,09 μmol / l.

Vitamiini A koskee rasvaliukoisten ja esiintyy kahdessa muodossa - todellinen A-vitamiini tai retinolia (löytyy vain eläintuotteet) ja pro-A-vitamiini, joka tunnetaan nimellä karoteenia (valmistettu eläin- tai kasviperäiset), joka voidaan muuntaa retinolin seiniin ruoansulatuskanavan. Noin 50-90% retinolin saapuvasta ruokaa imeytyy ohutsuolesta ja kuljettaa kylomikroneissa liittyy monimutkainen maksaan, jossa se tallennetaan muodossa retinolipalmitaatti. Tarvittaessa se vapautuu verenkiertoon retinolin muodossa, joka on yhdessä A-sitovan proteiinin kanssa. Seerumissa A-sitova proteiini + retinolikompleksi sitoutuu transtyretiiniin. Seerumista retinoli otetaan talteen kohdesolujen, kuten verkkokalvon fotoreceptoreiden ja epiteelin kautta.

Kun A-vitamiini tulee elimistöön, joka ylittää vaatimukset (180-430 μg retinolia päivässä riippuen iästä, sukupuolesta ja fysiologisesta tilasta), sen ylimäärä kertyy maksaan, joka muodostaa tämän vitamiinin varaston. Kun retinolin saanti vähenee elintarvikkeesta, sen maksa-arvot vapautuvat verenkiertoon säilyttämällä retinolipitoisuus seerumissa normaalilla tasolla (yli 0,7 μmol / l). Muita biologisesti aktiivisia A-vitamiinivalmisteita (verkkokalvo ja retinoiinihappo) esiintyy veressä hyvin pienissä pitoisuuksissa (alle 0,35 μmol / l); retinolin estereissä on noin 5% A-vitamiinista (0,1-0,1 μmol / l).

A-vitamiinilla on tärkeä rooli hapettumisen vähentämisprosesseissa. Retinolia edistää muodostumista glykogeenin maksassa ja lihaksissa, parantaa veren kolesteroli on mukana synteesissä steroidien ja sukupuolihormonien. Se on tarpeen kasvun ja luun luuranko uudelleensyntetisoimisen rodopsiinin, ja myös edistää normaalin toiminnan limakalvojen ja epiteelin, ihon kansi, estää sen metaplasiaa, hyperkeratoosi ja liiallinen irtoaminen. A-vitamiini auttaa vahvistamaan hiuksia, hampaita ja ikeniä. Viime vuosina, se osoittaa, moninaiset A-vitamiinin syövän ehkäisyssä ja säätelyssä koskemattomuuden (olennaista loppuun fagosytoosin, lisätä synteesin Ig, stimuloi tappaja-T-solujen, stimuloi auttaja-T-tyypin II et ai.). A-vitamiini - aktiivinen antioksidantti, pääasiassa E-vitamiinin läsnäollessa; se suojaa C-vitamiinia hapettumiselta. A-vitamiinin puutos katsotaan riskitekijänä pahanlaatuisille kasvaimille. Kokeellisissa tutkimuksissa osoitettiin, että A-vitamiinipitoisuuden lisääntyminen ruokavaliossa kasvattaa elatusaineiden keskimääräistä kestoa 17,5%: lla. Sinkki on A-vitamiinin aineenvaihdunnan keskeinen kofaktori (tarvitaan A-sitovan proteiinin synteesiin).

Keskimääräinen päivittäinen vaatimus retinolia aikuisille (20-50 vuotta) oli 1,2 mg (4,000 IU, 1 IU vastaa 0,3 mikrogrammaa retinoli) raskaana oleville naisille - 1,5 mg (5000 IU) imetyksen - 1, 8 mg (6000 IU), yli 60-vuotiaille - 2,5 mg (10 000 IU). Ainakin kolmasosa retinolin päivittäisestä vaatimuksesta tulisi toimittaa keholle valmiissa muodossa; loput voivat imeytyä käyttämällä karotenoideja, joista retinoli muodostaa kehossa. On pidettävä mielessä, että noin 30% elintarvikkeen retinolista tuhoutuu niiden lämpökäsittelyllä. Retinolin aktiivisuus on 2 kertaa suurempi kuin karoteeni, lisäksi jälkimmäinen on vain 30 - 40% absorboitunut suolistossa. Siksi arvioitaessa ruokavaliota, katsotaan, että 1 mg retinolia vastaa suunnilleen 6 mg karotenoideja.

Retinolin (A-vitamiinin) ja karotenoidien määritys seerumissa Besseyn mukaan LA Anisimovan modifikaatiossa

Menetelmän periaate

A-vitamiinin ja karotenoidien määritys perustuu niiden hydrolyysiin emäksisessä alkoholiliuoksessa, jota seuraa uuttaminen orgaanisten liuottimien seoksella.

Reagenssit

• 11 M liuos kaliumhydroksidia (KOH).
• 96% etyylialkoholia.
• 1 M liuos kaliumhydroksidia (KOH) 96-prosenttisessa etyylialkoholissa: 1 tilavuus 11 M KOH-liuosta sekoitetaan 10 tilavuudella 96-prosenttista etyylialkoholia. Reagenssi valmistetaan tutkimuksen päivänä. Jos värjäys tapahtuu sekoittumisen aikana, alkoholi on puhdistettava tislaamalla ennen käyttöä.
• Xylol, hp.
• Oktan, h.ch.
• Ksyleeni-oktaaniseos: valmistetaan sekoittamalla yhtä suuret tilavuudet ksyleeniä ja oktaania.

Tutkimukset suoritetaan spektrofotometrillä.

A-vitamiinin määrityksen kulku

Sormista otettu veri (noin 1 ml) lisätään sentrifugin etikettiin ja asetetaan lasikuppiin lämpimällä vedellä (lämpötila 40 - 45 ° C) 20 - 30 minuutin ajan. Seerumin erottamiseksi veren hyyty on huolellisesti kierretty putken reunan ympärille ohuella lasisuihkulla ja sentrifugoidaan 3000 rpm: llä 10 minuutin ajan.

Valitse 0,12 ml seerumia ja siirrä se agglutinaatioputkeen, minkä jälkeen lisätään 0,12 ml 1 M alkoholikaliumhydroksidiliuosta. Sisältöä ravistetaan perusteellisesti.

Testiputket, joissa on koettimet, sijoitetaan vesihauteeseen 20 minuutin ajan 60 ° C: n lämpötilassa hydrolyysiä varten.

Näytteet jäähdytetään ja niihin lisätään 0,12 ml ksyleeni-oktaaniseosta, ravistellaan voimakkaasti 10-15 sekuntia. Jäähdytä uudelleen ja sentrifugoi.

Poista varovasti A-vitamiinia ja karotenoideja sisältävä päällystepatukka Pasteur-pipetillä kumin kanssa ja siirrä se mikrokyyleihin.

Näytteet ovat spektrofotometrisiä aallonpituudella 328 nm - A-vitamiinin määrittämiseksi ja aallonpituudella 460 nm - karotenoidien määrittämiseksi.

Spektrofotometrisen määrityksen jälkeen tutkittu näyte altistetaan ultraviolettisäteilylle hävittämistä vitamiinin Tätä tarkoitusta varten etäisyydellä 15-20 cm kvartsi mikrokyvettien asetettu (bakteereja tappava) lamppu, niin että säteilytys paljastettu osa kyvetin, täytetty nesteellä; valotusaikaa 45-60 minuuttia.

Näytteet toistetaan spektrofotometrisesti aallonpituudella 328 nm. A-vitamiinin pitoisuus määritetään ekstinktioarvojen erosta (optinen tiheys) ottaen huomioon Bessey A-vitamiinin laskema kerroin (kerroin 637).

Laskenta suoritetaan kaavalla:

X = 637 × (Е328 (1) - Е328 (2)),

Jossa X on A-vitamiinipitoisuus, μg / dL; 637 on kerroin, jonka Bessey on laskenut A-vitamiinin määrittämiseksi; Е328 (1) - liuoksen optinen tiheys ennen säteilytystä; E328 (2) on liuoksen optinen tiheys säteilytyksen jälkeen.

A-vitamiinipitoisuuden siirtä- miskerroin μg / dL: stä μmol / l on 0,035.

Karotenoidien pitoisuus lasketaan kaavalla:

X = 480 - A440,

Jossa X on karotenoidien pitoisuus, μg / dL; 480 on Bessey'n laskema kerroin karotenoidien määrittämiseksi; E480 on testiliuoksen optinen tiheys.

Huomautus

Besseyn mukaan suurempia tai pienempiä seerumimääriä voidaan ottaa tutkimusten aikana, mutta sen suhde alkoholiliuoksen tilavuuden tulee olla vakio, mikäli muutoksia ksyleeni-oktaaniseoksen tilavuudessa (määrä).

Veren seerumin A-vitamiinipitoisuuden normi on: vastasyntyneillä ja imeväisillä - 160-270 μg / l; aikuisilla 1,05-2,45 μmol / l (300-700 μg / l). Karotenoidien pitoisuus aikuisen seerumissa on 800-2300 μg / l.