Lääketieteen asiantuntija
Uudet julkaisut
Rajoituspätkäpituuden polymorfismianalyysi
Viimeksi tarkistettu: 05.07.2025
Kaikki iLive-sisältö tarkistetaan lääketieteellisesti tai se tarkistetaan tosiasiallisen tarkkuuden varmistamiseksi.
Meillä on tiukat hankintaohjeet ja vain linkki hyvämaineisiin mediasivustoihin, akateemisiin tutkimuslaitoksiin ja mahdollisuuksien mukaan lääketieteellisesti vertaisarvioituihin tutkimuksiin. Huomaa, että suluissa ([1], [2] jne.) Olevat numerot ovat napsautettavia linkkejä näihin tutkimuksiin.
Jos sinusta tuntuu, että jokin sisältö on virheellinen, vanhentunut tai muuten kyseenalainen, valitse se ja paina Ctrl + Enter.
Erilaisten restriktioendonukleaasien laaja käyttö kromosomien DNA:n analysoinnissa on paljastanut ihmisen genomin valtavan vaihtelevuuden. Jopa pienet muutokset rakennegeenien koodaavissa ja säätelyalueilla voivat johtaa tietyn proteiinin synteesin loppumiseen tai sen toiminnan menetykseen ihmiskehossa, mikä yleensä vaikuttaa potilaan fenotyyppiin. Noin 90 % ihmisen genomista koostuu kuitenkin ei-koodaavista sekvensseistä, jotka ovat vaihtelevampia ja sisältävät monia niin sanottuja neutraaleja mutaatioita eli polymorfismeja, eikä niillä ole fenotyyppistä ilmentymistä. Tällaisia polymorfisia alueita (lokuksia) käytetään perinnöllisten sairauksien diagnosoinnissa geneettisinä markkereina. Polymorfisia lokuksia on kaikissa kromosomeissa ja ne liittyvät geenin tiettyyn alueeseen. Määrittämällä polymorfisen lokuksen lokalisaation on mahdollista selvittää, mikä geeni liittyy potilaalla taudin aiheuttaneeseen mutaatioon.
Polymorfisten DNA-alueiden eristämiseksi käytetään bakteerientsyymejä - restriktaaseja, joiden tuote on restriktiokohdat. Polymorfisissa kohdissa esiintyvät spontaanit mutaatiot tekevät niistä resistenttejä tai päinvastoin herkkiä tietyn restriktaasin toiminnalle.
Restriktiokohtien mutaatiovaihtelevuus voidaan havaita muuttamalla DNA:n restriktiofragmenttien pituutta erottamalla ne elektroforeesilla ja hybridisoimalla ne myöhemmin spesifisillä DNA-koettimilla. Jos polymorfisessa kohdassa ei ole restriktiota, elektroforeesissa havaitaan yksi suuri fragmentti, ja sen läsnä ollessa pienempi fragmentti. Restriktiokohdan läsnäolo tai puuttuminen homologisten kromosomien identtisissä lokuksissa mahdollistaa mutantti- ja normaaligeenin melko luotettavan leimaamisen ja sen siirtymisen seurannan jälkeläisille. Siten tutkittaessa potilaiden DNA:ta molemmissa kromosomeissa, joissa restriktiokohta on polymorfisella alueella, elektroforeesissa havaitaan lyhyitä DNA-fragmentteja. Potilailla, jotka ovat homotsygoottisia polymorfista restriktiokohtaa muuttavalle mutaatiolle, havaitaan pidempiä fragmentteja ja heterotsygoottisilla potilailla lyhyitä ja pitkiä fragmentteja.
[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]