Napanuoraveren hemopoieettiset kantasolut

Hyvä proliferaatiopotentiaali ja mahdollisuuksia repopulyatsionnym hematopoieettisten solujen lähde Veren kantasolut toimii napanuoran verestä. Toistuvasti osoittanut, että kun syntyvyys napanuoran veri sisältää riittävän suuren määrän heikosti sitoutunut vanhempaini hematopoieesia. Jotkut kirjoittajat uskovat, että etu Luuytimensiirto napanuoraveren ole tarvetta löytää luovuttajan yhteensopiva HLA-antigeenejä. Niiden mukaan, kypsymättömyyteen vastasyntyneen immuunijärjestelmän aiheuttaa vähentynyt toiminnallinen aktiivisuus immunokompetenttien solujen ja vastaavasti pienempi kuin luuydinsiirron, oli vakavia reaktio "graft versus host". Tässä solussa elinsiirteen selviämiseen napanuoran veri ei ole pienempi kuin luuytimen soluja, jopa siinä tapauksessa, että käytetään pienempi määrä GSK annetaan per 1 kg potilaan painoa. Kuitenkin mielestämme optimaalinen määrä kysymyksiä siirrettyjen napanuoraverestä soluja, joita tehokas juurtumista kehossa vastaanottajan, niiden immunologisia yhteensopivuus, ja useita muita näkökohtia siirtoistutusten Veren kantasolut napanuoraveren vaatii enemmän vakavaa analyysia.

[1], [2], [3], [4], [5], [6]

Verenkierron verenkierron kantasolujen saaminen

Hakumenettely hematopoieettisten kantasolujen napanuoraveren vaatii sen saanti heti syntymän jälkeen ja sen erottaminen istukasta, kun istukka on kohdussa tai ex kohdussa, sekä keisarinleikkauksella, mutta myös ex kohdussa. On osoitettu, että tapauksessa lyhentää syntymästä vastasyntyneen istukan erottaminen jopa 30 sekuntia tilavuus napanuoraverestä saadun kasvaa keskimäärin 25-40 ml. Kun myöhempi toimenpide, sama määrä vertaa häviää. On selvää, että lapsen varhainen erottaminen jälkipoltosta ei aiheuta kielteisiä seurauksia vastasyntyneelle.

Venäjän tutkimuslaitos hematologian ja Veripalvelun kehittänyt tehokkaita ja edullisia tekniikoita sekä napanuoraverestä fysiologisessa suvusta ((70,2 + 25,8) ml) ja keisarinleikkauksella ((73,4 + 25,1) ml). Menetelmä erottaminen napanuoraveren on riittävän suuri saanto mononukleaaristen solujen ja tumallisten - (83,1 + 9,6) ja (83,4 + 14,1)%, vastaavasti. Parannettu menetelmä kylmäsäilytyksen napanuoraverestä, joka takaa korkean turvallisuuden yksitumaisten solujen ja CFU-GM-- (96,8 + 5,7) ja (89,6 + 22,6)%, vastaavasti. Kudosnäytteen tyhjennysmenetelmän tehokkuus määritettiin "Kompoplast-300" -astian (Venäjä) avulla. Aita napanuoraverestä kirjoittajat suoritetaan heti syntymän jälkeen ja sen erottaminen istukan suhteen sijoittamalla istukan kohdussa tai ex kohdussa. Ennen punktio napalaskimon napanuoran kerran käsiteltiin 5% tinktuura jodia, ja sitten kahdesti - 70% etyylialkoholia. Veren virtaus yhdysputkien kautta astiaan spontaanisti. Aidan kesto kesti enintään 10 minuuttia. 66 kerätään kuivatus tilavuus menetelmä navan verinäytteitä keskimäärin (72 + 28) ml ja leukosyyttien lukumäärä näytteessä keskimäärin koko - (1,1 + 0,6) x x 107. Analyysi napanuoran veren steriiliyden (bakteerikontaminaation, HIV-1-virusten hepatiitti B ja C, syfilis, ja sytomegalovirusinfektio) vain yksi näyte tunnistettiin IgG-vasta-aineita C-hepatiitin toisessa tutkimuksessa, kun istukan syntymän jälkeen sikiön pinta laitettiin erityinen kehys alaspäin, johto käsiteltiin 5%: isella jodi ja 75% etyyliä th alkoholia. Napalaskimon neulalla valutettiin verensiirron järjestelmä (G16). Veri valutettiin säiliöön spontaanisti. Tällä tavoin otetun veren tilavuus oli keskimäärin (55 + 25) ml. Paperin G. Kogler et ai (1996) napanuoraverestä otettu suljettu tavalla, ja saatu suuria määriä verta - keskimäärin (79 + 26) ml. Kirjoittajat toteavat, että joukossa 574 napanuoraverta näytteet sisältävät noin 7% vähemmän kuin 40 ml verta, joka ei salli käyttää niitä elinsiirtoon. K. Isoyama et ai (1996), ottaen napanuoraverestä aktiivisen exfusion ruiskujen avulla, oli keskimäärin 69,1 ml verta (napanuoraveren määrä vaihteli 15-135 ml). Lopuksi, A. Abdel-Mageed PI yhteistyökumppanit (1997) mukaan punovinnoy suoneen katetroimalla saatiin keskimäärin 94 ml napanuoraverestä (56-143 ml).

Riskin vähentämiseksi hoitoperäiset infektion ja saastumisen äidin eritteiden kehitetty suljetun järjestelmän verinäytteen, joka perustuu laajalti käytetty transfuzioinoy järjestelmä Baxter Healthcare Corp., Deerfield, IL (USA), joka sisälsi 62,5 ml CPDA (sitraatti-fosfaatti-dekstroosi adeniini), kuten antikoagulantti. Valmistustekniikan materiaali on ensiarvoisen tärkeää valmistettaessa laatu näytteessä suhteessa sisällön määrää ja puhtauden solususpensiota. Käytettäessä nykyisiä menetelmiä, napanuoran veren keräämistä, kotoryeuslovno luokitellaan suljettu, osittain avoin ja avoin järjestelmä sleduetotdavat ensin edullisesti, kuten suljetussa järjestelmässä merkittävästi vähentää mikrobikontaminaation materiaalin, sekä saastuminen solususpensiota emosolun.

A. Nagler ja co-authors (1998) tekivät vertailevan analyysin kaikkien kolmen verinäytteenottojärjestelmän tehokkuudesta. Ensimmäisessä variantissa menetelmä suoritettiin suljetussa järjestelmässä veren eksfuusion avulla suoraan säiliöön. Toisessa variantissa naarasverta saatiin injektioruiskujen1 aktiivisen verenpoiston menetelmällä istutuksen suonien lisäämiseksi ja veren samanaikaiseksi tyhjentämiseksi säiliöön (avoin menetelmä). Kolmannessa variantissa verta vedettiin puoliksi avoimeen järjestelmään puristamalla sitä aktiivisesti ruiskuilla ja pesemällä napanuoran valtimon läpi samanaikaisesti ulospäin säiliöön. Ensimmäisessä versiossa kirjoittajat saivat napanuoraveren määrän tilavuudessa (76,4 + 32,1) ml leukosyyttiluvulla (10,5 ± 3,6) x 10 ⁶ per 1 ml verta. Toisessa variantissa vastaavat indeksit olivat (174,4 + 42,8) ml ja (8,8 + 3,4) x ¹⁰⁶ / ml; kolmannella (173,7 + 41,3) ml ja (9,3 + 3,8) x ¹⁰⁶ / ml. Napanuoraverinäytteiden yleisimpiä infektioita havaittiin käytettäessä avointa systeemiä. Suhteellinen korrelaatio istukan massan ja uutetun veren tilavuuden välillä luodaan - istukan massan kasvaessa veren määrä kasvaa.

Napanuoraverenäytteen oton jälkeen erotusvaihe seuraa - mononukleaaristen solujen eristämistä ja solususpension puhdistusta erytrosyytteistä. Koeolosuhteissa nukleoidut solut eristetään menetelmällä, jossa niiden sedimentaatio metyyliselluloosalla ammonium-erytrosyyttien hajotessa kloridilla. Kuitenkin kliinisiin tarkoituksiin ei saa käyttää metyyliselluloosaa, koska hematopoieettisten kantasolujen katoaminen saavuttaa 50-90%. Lyysaamalla punasolujen yhteydessä suuria määriä työliuoksen klinikalla myös tuskin suorittaa, vaikka prosenttiosuus erottaminen tällä tavalla tumallisten solujen fenotyyppi CD34 +, ja esisolujen CFU-GM-toiminnot ja CFU-GEMM huomattavasti korkeampi. On raportoitu uusi agentti mononukleaaristen solujen eristämiseksi tiheysgradientin ostotustiheysliuoksella (BDS72). Tällä aineella on seuraavat fysiologiset parametrit: pH - 7,4, osmolaliteetti - 280 mosm / kg, tiheys - 1,0720 g / ml. Tekijöiden mukaan sen avulla on mahdollista eristää jopa 100% CD34-positiivisista soluista ja poistaa 98% punaisista verisoluista. Klinikka ei kuitenkaan vielä sovella BDS72: ta.

Erotusmenetelmiä testattiin tumallisten solujen napanuoran verestä käytetään tyypillisesti 10% HES liuos tai 3% gelatiinia liuos. Erytrosyyttien saostumisen tehokkuus ja nucleated solujen eristäminen molemmissa tapauksissa on suunnilleen yhtä suuri. Kuitenkin, kun kyseessä on käyttö sedimentointi aineena gelatiinia mahdollista saada hieman suurempi määrä CFU-GM, kuin käytettäessä HES. Oletetaan, että ero talteenoton hyötysuhde CFU-GM epätasainen nopeus johtuu laskeumien yksittäisten fraktioiden tai tumallisten solujen kyky HES-molekyylien absorboituu hematopoieettisten solujen pinnan reseptorien ja siten estää niiden herkkyys pesäkkeitä stimuloivat tekijät, joita käytetään kun viljellään CFU-GM-in vitro. Kuitenkin, molemmat sedimenter voi hyvinkin olla sopiva eristämiseksi tumallisten solujen luomiseen suurten napanuoraverestä pankit.

Veren napanuoraveren erottelun ja kryopreservoinnin menetelmät eivät periaatteessa poikkea niitä, joita käytetään aikuisten luovuttajien ääreisveren ja luuytimen hematopoieettisten kantasolujen kanssa. Mutta kun valmistellaan suuria määriä napanuoraverinäytteitä pankkeilleen, erottamisen menetelmät on ensinnäkin oltava edullisia. Siksi valitettavasti kliinisiin tarpeisiin on jo käytetty rutiinimenetelmiä napanuoran verisolujen eristämiseen ja kryopreservaatioon, ja tehokkaampia mutta taloudellisesti tehokkaita menetelmiä on yhä kokeilijoiden paljon.

Yleensä kriteerit hematopoieettisten solujen lukumäärän arvioimiseksi ja napanuoran verinäytteiden tutkimista varten määritettiin infektoivien aineiden tunnistamiseksi. Vero-veren solujen verensiirtojen siirtämisen turvaamiseksi kaikki verinäytteet on tutkittava ensisijaisesti hematogeenisille infektioille ja geneettisille sairauksille. Jotkut kirjoittajat suosittelevat muita erityisiä menetelmiä tutkimus napanuoran verestä varten diagnosoimiseksi geneettisten sairauksien, kuten talassemia ja sirppisoluanemia, adenosiinideaminaasigeeni puutos, agammaglobulinemiaan Bruton tauti Harlera ja punter.

Suositusten mukaan Ticheli L. Ym (1998), kunkin näytteen napanuoraveren on tarpeen määrittää lukumäärän tumallisten solujen, SB34-positiivisten solujen ja CFU-GM, HLA-tyypitys määrittämään veriryhmä ABO Rh sen jäsenyyden. Lisäksi kylvö suoritetaan bakteeri-, serologiset testit HIV ja CMV-infektio, HBsAg, hepatiitti C, HTLY-I ja HTLV-II (T-soluleukemia, ihmisen), syfilis, toksoplasmoosi. Sytomegaloviruksen ja HIV-infektion polymeraasiketjureaktio on pakollinen.

Ainoa nauha-veren saantimenettely olisi toteutettava tiukasti lääketieteellisen bioetiikan periaatteiden mukaisesti. Ennen verenkeräyksen aloittamista on tarpeen saada raskaana olevan naisen hyväksyntä sen toteuttamiseksi. Alustava haastattelu raskaana olevan naisen kanssa, jolla hän on saanut tietoonsa suostumuksen suorittaa kaikki manipulaatiot, verenlaskusta ja asiakirjojen loppuun saattamisesta, suorittaa vain lääkintähenkilöstö. Joka tapauksessa tutkimatta suoritat mitään näistä menettelyistä henkilöstön biologisiin, kemian-, lääke- ja muut lääketieteellisen koulutuksen, kun otetaan huomioon rikkoo vakiintuneiden normien bioetiikan ja ihmisoikeuksia. Positiivisia testejä varten kantaja-HBsAg, vasta-aineet aiheuttava aine hepatiitti C, HIV ja kuppa napanuoraverestä ei oteta, ja verinäytteistä on jo poistettu ja tuhottu. On huomattava, että vaunu piilevien tartuntojen vastasyntyneillä on paljon harvinaisempi kuin aikuisilla, ja siksi todennäköisyys hematogenous siirtämistä ja kehittämistä tarttuvan komplikaatioiden hematopoieettisten infuusioiden napanuoraverestä solujen on huomattavasti pienempi kuin siinä tapauksessa, transplantaation luuytimen aikuisen luovuttajilta.

Tärkeä kohta verinäytteen levittämisessä klinikalla on elinsiirron arviointi, joka perustuu verinäytteen hematopoieettisten kantasolujen lukumäärään ja siirtoihin tarvittaviin soluannoksiin. Tilanteita, jotka koskevat optimaalisen määrän napanuoran verisoluja siirrettäviksi, ei ole vielä kehitetty. Ei ole yleisesti hyväksyttyä näkemystä myös sellaisissa rutiiniparametreissa kuin CD34-positiivisten solujen ja CFU-GM: n määrä. Jotkut kirjoittajat arvioitiin mahdollisia hematopoieettisten solujen analyysi pitkän aikavälin viljelmiä sisällön määrittämiseen pesäkkeitä muodostavien yksiköiden yhteinen granulosyyttejä, erytrosyyttejä, monosyyttejä ja megakaryosyyttejä - CFU-GEMM.

Kuitenkin kliinisissä oloissa köysiradan vakiotutkimuksen tavanomainen arviointi sisältää yleensä vain nukleotoitujen tai mononukleaaristen solujen lukumäärän määrittämisen.

Veren punasolun verta hematopoieettisten kantasolujen varastointi

Hematopoieettisten verisuonisolujen varastointitekniikassa on joitain ongelmia. Kun kylmäsäilytyksen hematopoieettisten kantasolujen saavuttaakseen optimaalisen jäädytys tila on minimoida napanuoraverestä ja punasolujen aiemmin poistettu hemolyysin välttämiseksi ja riski yhteensopimattomuus reaktion Punasoluantigeeneihin (ABO, Rh). Näihin tarkoituksiin sopivat erilaiset menetelmät nucleating-solujen eristämiseksi. 90-luvun alussa on viime vuosisadan laajimmin käytetty menetelmä erottaa tumallisten solujen tiheysgradienttiin perustuva Ficoll, jonka tiheys on 1,077 g / ml, tai suodatusprosessissa, jonka tiheys 1,080 g / ml. Erottaminen napanuoraverestä tiheysgradienttisentrifugoinnilla voidaan valita pääasiassa mononukleaariset solut, mutta johtaa merkittäviin tappioihin hematopoieettisten esisolujen - jopa 30-50%.

Hydroksietyylitärkkelyksen sedimentaatiotehokkuus napanuoran verisolujen eristämisprosessissa arvioidaan eri tavoin. Jotkut tekijät osoittavat erottelukyvyn huonon laadun tällä menetelmällä, kun taas muut tutkijat päinvastoin kaikista mahdollisista menetelmistä mieluummin jakavat HSC-cordin veren tarkasti käyttäen 6-prosenttista hydroksietyylitärkkelyksen liuosta. Tämä korostaa hemopoieettisten solujen sedimentoitumisen hyötysuhdetta, joka joidenkin tietojen mukaan saavuttaa 84%: sta 90%: iin.

Kannattajat toisesta näkökulmasta ajatella, että lähes kaikki fraktiointiprosesseihin kyse suurista tappioista yadrosoderzhashih soluja ja tarjoavat tehdä erottaminen linkoamalla, erottamalla napanuoraverestä osaksi 3 jakeet: punasolujen, valkosolujen ja plasma rengas. Erottamalla solut tällä tavalla, keksijät ovat havainneet, että sisältö mononukleaaristen solujen varhaisten hematopoieettisten esisolujen ja solujen CD34 + immunofenotyyppiä lopulta oli vastaavasti 90, 88 ja 100%: n alkuperäisestä tasosta. Variantit määriä puhdistettua kasvua tällä menetelmällä napanuoran verisolujen saatu muiden tutkijoiden: laskeutuksen jälkeen tumallisten jaetaan 92%, 98% - mononukleaarisia, 96% - CD34-positiivisia soluja ja 106% pesäkkeitä muodostavien yksiköiden.

1990-luvun lopulla gelatiinia käytettiin laajasti sedimentoituna aineena. Kliinisessä käytössä käytetään gelatiinia Veren kantasolut eristettiin napanuoran verestä vuodesta 1994. Kun käytetään 3-prosenttista gelatiiniliuosta, ydinpohjaisten solujen eristämisen tehokkuus on 88-94%. Laajamittainen käyttö liivate luomisessa napanuoraverestä pankki on vahvistanut sen etuja muilla tavoin sedimenttiä. Vertaileva analyysi kaikista edellä mainituista menetelmistä eristämisen tumallisten solujen suhteen niiden peräkkäistä käyttöä kussakin testin napanuoraverestä näytteet osoittivat, että optimaalinen sedimenter-out mononukleaaristen solujen kanssa fenotyypin CD34 + / CD45 +, samoin kuin useissa CFU-GM ja CFU-GEMM on 3% gelatiiniliuosta. Se osoittautui merkittävästi vähemmän tehokkaita menetelmiä käyttäen Ficoll tiheysgradienttia, ja käyttö metyyliselluloosa ja hydroksietyylitärkkelystä, jossa hematopoieettisten solujen menetys oli 60%.

Napanuoraveren kantasolujen siirron tilavuuden laajentaminen liittyy paitsi menetelmien kehittämiseen niiden tuottamiseen, myös varastoimiseen. On olemassa monia ongelmia, jotka liittyvät suoraan verinäytteen valmistamiseen pitkäaikaiseen varastoon ja optimaalisen kryopreservaatiotekniikan valintaan näytteille. Niistä mainittakoon erotteluprosessien suorittamisen tarkoituksenmukaisuus, erilaisten kryopreservoivien aineiden käyttö ja menetelmien käyttö sulatettujen solujen valmistamiseksi elinsiirtoon. Verinäytteestä syntyvien natiivien näytteiden kuljetus tapahtuu usein hematologisten keskusten ulkopuolisilta alueilta. Tässä yhteydessä syntyy ongelma, joka on sallittu säilymisjaksoissa, jotka on varastettu verinäytteen varastamishetkestä kryopreservaation alkuun, mikä on erityisen tärkeä suonien veripankkien kehittymisen kannalta.

Tutkimus toiminnallisen aktiivisuuden hematopoieettisten napanuoraveren solut jälkeen pitkäaikaisen varastoinnin (jopa 12 vuosi) nestetypessä osoitti, että noin 95% hematopoieettisten solujen tänä aikana eivät menetä niiden korkea proliferatiivinen kapasiteetti. Paperin Yurasova S. Et ai (1997) osoittivat, että napanuoraveren varastoitiin huoneen lämpötilassa (22 ° C) tai 4 ° C: ssa 24 ja 48 tuntia ei olennaisesti vähennä elinkelpoisuutta hematopoieettiset solut, että lähtötaso on sopivasti 92 ja 88%. Kuitenkin, jos säilytysaikaa pidennetään kolmeen päivään, solujen veren elinkelpoisten nukleosoitujen solujen lukumäärä vähenee merkittävästi. Samaan aikaan muut tutkimuksissa havaittiin, että varastoinnin aikana 2-3 päivää lämpötilassa 22 ° C: ssa tai 4 vaikuttaa ensisijaisesti elinkelpoisuuden valmiiden granulosyyttien, mutta ei hematopoieettisen solujen.

Kokoonpanon komponentit voivat vaikuttaa haitallisesti hematopoieettisten kantasolujen elinkelpoisuuteen. Analyysi vaikutus eri antikoagulanttien, joka vaikutusmekanismi johtuu kalsiumionien sitomisesta (ACD, EDTA, XAPD-1) ja hematopoieettisten esisolujen napanuoraverestä säilytys 24-72 tunnin paljasti niiden negatiivinen vaikutus elinkelpoisuuden tumallisten solujen. Tässä yhteydessä, kirjoittajat suositeltavaa käyttää PBS: ää (n fosfaattipuskuriliuosta) lisäämällä natiivin hepariinia ilman säilöntäainetta pitoisuutena 20 U / ml, joka niiden mielestä, tekee mahdolliseksi lisätä varastoinnin kestoa fraktioimattoman napanuoraveren jopa 72 tuntia ja tallentaa toiminnallinen aktiivisuus pesäkettä muodostavaa yksikköä. Kuitenkin, kun tutkitaan CFU-GM: n ja CFU-G: n turvallisuutta, on osoitettu, että veren varastointi aika ennen kryopreservaatiota ei saa ylittää yhdeksää tuntia. On selvää, että tässä tapauksessa olisi toimittava periaatetta, jonka mukaan on olemassa ristiriitaisia tietoja pitäisi käyttää niin vähän suositeltu napanuoraverestä säilyvyys ja aloittaa ohjelmoitavan jäädyttämistä eristetään soluja mahdollisimman nopeasti.

Veren punasolujen verenkierron kantasolujen jäätymisen yhteydessä käytetään tavallisesti 10% DMSO-liuosta kylmäsuoja-aineena. Ilmentymän kriittisen vaikutuksen lisäksi dimetyylisulfoksidilla tässä konsentraatiossa on kuitenkin suora sytotoksinen vaikutus, vaikka olosuhteet olisivat mahdollisimman vähäiset napanuoraverin veren muodostaville soluille. DMSO: n sytotoksisen vaikutuksen vähentämiseksi otetaan käyttöön nollavalotuslämpötila, kaikkien manipulaatioiden nopeus ja toistuva pesu napanuoranäytteiden sulatuksen jälkeen.

Ukrainan lääketieteellisen akatemian hematologian ja verensiirron instituutti on kehittänyt tieteellistä suuntaa vuodesta 1995 lähtien, jonka tavoitteena on tutkia verin verta vaihtoehtoisten lähteiden hemopoieettisten solujen lähteenä. Erityisesti on kehitetty uusia tekniikoita fraktioimattoman ja fraktioituneen verinäytteen hemopoieettisten solujen matalalämpötilalla tapahtuvaan kylmäsäilytykseen. Kryosuoja-aineena käytetään pienimolekyylipainoista lääketieteellistä polyvinyylipyrrolidonia. Fraktioimattoman verinäytteen kylmäsäilytysmenetelmä perustuu alkuperäisen solujen esikäsittelyyn ja jäätymisen valmistamiseen ja solususpensioon erikoistunutta tekniikkaa välittömästi ennen siirtoa.

Yksi tärkeimmistä tekijöistä, jotka vaikuttavat kylmäsäilytettyjen hemopoieettisten kantasolujen funktionaaliseen aktiivisuuteen, on solususpension jäähdytysnopeus, erityisesti kiteytysvaiheen aikana. Ohjelmistomenetelmä nopeuden ja jäätymishetken ongelman ratkaisemiseksi tarjoaa suuria mahdollisuuksia luoda yksinkertaisia ja erittäin tehokkaita kriopreservaatiomenetelmiä ilman, että pesusolut suspendoituvat kryoproteiineilta ennen siirtämistä.

Välittömän jäädytyksen ja sulatuksen vaiheet ovat vaarallisimpia solujen elinkelpoisuudelle valmistuksen aikana. Hemopoietiikkasolujen jäädyttämisen aikana merkittävä osa niistä voidaan tuhota solunsisäisen väliaineen siirtymishetkestä nesteestä kiinteään faasiin - kiteytymiseen. Solukuoleman prosenttiosuuden pienentämiseksi käytetään kylmäsuojaimia, joiden vaikutusmekanismit ja niiden suojaamisen tehokkuus on katettu riittävästi tieteellisessä kirjallisuudessa.

Lupaava suunta optimoinnilla kylmäsäilytyksen luuytimen ja napanuoran verisolujen on yhdistää samaan liuokseen matalille jäänestoaineiden useita erilaisia toimintamekanismeja, esimerkiksi, joka vaikuttaa solunsisäisen tason DMSO: ta ja hydroksietyylitärkkelystä tai albumiini, jolla on solunulkoinen sulkeva vaikutus.

Kryopreservaatiota napanuoraverestä soluja käytetään perinteisesti 20% DMSO-liuos, joka on pysyvästi mekaanisesti sekoittaen jäähauteessa, kaadettiin hitaasti solususpensio saavuttaa yhtä (1: 1) tilavuuden suhde solususpension ja kylmältä suojaavan aineen. Dimetyylisulfoksidin lopullinen pitoisuus on 10%. Solususpensio jäähdytetään sitten ohjelmiston kryostaatilla nopeudella HS / min -40 ° C, minkä jälkeen jäähdytysnopeus nostetaan 10 ° C / min. Kun saavutetaan -100 ° C, säiliö, jossa solususpensio asetetaan nestetyppiin (-196 ° C). Tällä menetelmällä kryopreservaatio, funktionaalisesti aktiivisten mononukleaaristen solujen turvallisuus sulamisen jälkeen saavuttaa 85% alkuperäisestä tasosta.

Kylmäsäilytysmenetelmien muutoksilla pyritään vähentämään DMSO: n konsentraatiota lisäämällä hydroksietyylitärkkelystä (dimetyylisulfoksidin ja hydroksietyylitärkkelyksen lopulliset pitoisuudet ovat vastaavasti 5% ja 6%). Tämän kylmäaineen yhdistelmän tehokkuutta havaitaan, kun myeloidisolujen suspensio on jäädytetty, ei lainkaan sytoproteiinia kuin yhdellä 10-prosenttisella dimetyylisulfoksidiliuoksella. Elinkelpoisten nukleosoitujen solujen määrä saavutti 96,7% lähtötasosta ja niiden funktionaalinen aktiivisuus, arvioitu CFU-GM: n määrällä, oli 81,8%.

Kun dimetyylisulfoksidia käyttäen liuosta pitoisuuksissa 5-10% yhdessä 4% hydroksietyylitärkkelyksen (lopullinen konsentraatio) havaitsi, että säilyttäminen CD34-positiivisten solujen näillä alueilla dimetyylisulfoksidi käytännössä ennallaan. Samaan aikaan olosuhteissa vähentää DMSO: n pitoisuus 5-2,5% on havaittu massa syöttämällä napanuoraverestä soluja - elävien solulinjojen lukumäärä yksiköitä on vähennetty 85,4-12,2%. Muut tutkijat päättelivät myöskin, että se oli 5 ja 10% liuos, jossa oli dimetyylisulfoksidia (in tekijänoikeuden suoritusmuodossa - yhdessä autologista seerumia) mahdollisimman tehokkaasti tarjota sytoprotektio aikana kylmäsäilytyksen napanuoraverestä HSC. Lisäksi, korkea turvallisuus peräkkäin jäädyttää ja sulattaa solu on merkitty yhdistelmän tapauksessa on 5 tai 10% DMSO: 4% hydroksietyylitärkkelystä liuokseen, erityisesti kontrolloitu jäähdytys nopeudella TOS / min. Toisessa paperia käytetään kylmältä suojaavaa liuosta, joka koostuu kolmesta ainesosasta jo - DMSO, puhdistettua ihmisen albumiinia ja RPMI suhteessa 1: 4: 5, joka lisättiin solususpensioon jopa yhtä suuri tilavuus suhteissa (lopullinen DMSO-pitoisuus oli 5%). Kun sulatus oli vesihauteessa + 4 ° C: n lämpötilassa, CFU-GM: n turvallisuus ylitti 94%.

Jotkut tekijät ehdottavat, että kylmäsäilytyksellä käytetään fraktioimatonta verinäytettä, koska merkittäviä määriä hematopoieettisia soluja menetetään punaisten verisolujen poistamisen aikana. Tässä suoritusmuodossa dimetyylisulfoksidin 10-prosenttista liuosta käytetään mononukleaaristen solujen suojaamiseksi kryokiteytyksen haitallisilta vaikutuksilta. Jäädytys suoritetaan hitaasti / min - 80 ° C: n jatkuvalla jäähdytysnopeudella, minkä jälkeen napanuoraverisolujen suspensio upotetaan nestemäiseen typpiin. Tällä jäädytysmenetelmällä tapahtuu erytrosyyttien osittainen hajotus, joten verinäytteet eivät edellytä fraktiointia. Sulatuksen jälkeen solususpensio pestään vapaasta hemoglobiinista ja dimetyylisulfoksidista ihmisen albumiinin liuoksessa tai potilaan autologisessa seerumissa ja käytetään transplantaatioon.

Säilyttäminen hematopoieettisten esisolujen sulatuksen jälkeen fraktioimattomalla napanuoraverestä on todellakin korkeampi kuin fraktioitua, mutta yhteydessä krioustoychivostyu punaisten verisolujen voi aiheuttaa vakavia ongelmia seurauksena verensiirron jälkeisen siirron ABO-yhteensopimaton punasolut. Lisäksi varastoituneen fraktioimattoman veren määrä kasvaa merkittävästi. Kliinisestä näkökulmasta, vielä edullisemmin kylmäsäilytyksen aiemmin eristää ja puhdistaa muista solufraktioilla napanuoraverestä hematopoieettisten solujen.

Erityisesti menetelmä on kylmäsäilytyksen napanuoraveren solut fraktioitiin huomasi poistaa erytrosyyttien valmisteltaessa jäädyttämistä, joka käyttää 6% liuosta hydroksietyylitärkkelys koostumus plazmozameshchath liuos "Stabizol". Sulatuksen jälkeen näin saatu solususpensio on valmis kliiniseen käyttöön ilman lisäkäsittelyä.

Niinpä tällä hetkellä on olemassa monia melko tehokkaita keinoja napanuoraveren kylmäsäilyttämiseen. Tärkein ero on se, että verinäytteet jäädytetään fraktioimattomina tai altistetaan solufraktioille valmistuksen aikana ja kerätään nukleoitu soluja ilman erytrosyyttien seosta.

Veren punasolun verta hemopoieettisten kantasolujen transplantaatio

1980-luvun lopulla - viimeisen vuosisadan 90-luvun alussa todettiin, että raskauden aikana sikiölle toimittavan napanuoraveren veressä on suuri hematopoieettisten kantasolujen pitoisuus. Veren napanuoran verisolujen saamisen suhteellinen yksinkertaisuus ja ilmeisten eettisten ongelmien puuttuminen edisti johtoa veren kantasolujen käyttöä käytännön lääketieteessä. Ensimmäinen onnistunut verenvuodonsiirto lapselle, jolla oli Fanconi-anemia, oli lähtökohta laajentamaan verin kantasolujen elinsiirtoja ja luonut järjestelmän pankin tarjoamista varten. Maailmanlaajuisessa veren veripankin järjestelmässä suurin on New Yorkin Placentor Blood-keskus, joka on National Institutes of Healthin taseessa. Tämän pankin tallennettujen verinäytteiden määrä lähestyy 20 LLC: tä. Myös vastaanottajien (lähinnä lasten) määrä kasvaa ja onnistunut siirto on toteutettu. Yhdysvaltain terveydenhuollon osaston mukaan HSC-verinäytteen vastaanottajien elpymisen jälkeisen elpymisen jälkeinen uusiutumisjakso on jo ylittänyt 10 vuotta.

Tämä ei ole yllättävää, koska lukuisat tutkimukset hematopoieettisen potentiaalin napanuoraveren ovat osoittaneet, että määrä ja laatu varhaisimmista kantasolujen paitsi ei ole huonompi aikuisen ihmisen luuytimestä, mutta myös joitakin toimenpiteitä ylittävät sen. Suurempi proliferaatiopotentiaali napanuoraverestä kantasolujen aiheuttama kehitys- solun signalointi ominaisuuksia, reseptoreiden läsnäolosta HS-solujen spesifisiä kasvutekijöitä, kapasiteetti napanuoraverestä solujen autokriinisiä kasvutekijöiden, suuri koko ja pituus telomeres.

Näin ollen, genominen ja fenotyyppiset ominaisuudet hematopoieettisten kantasolujen napanuoraverestä ennalta määrätty laatu juurtumista korkea mahdollisen luovuttajan hematopoieettinen toipuminen vastaanottajan.

Napanuoraveren verenkiertoelimistön kantasolujen edut

Niistä todellisia etuja käyttämällä hematopoieettisen napanuoraverestä kantasoluja elinsiirtoon yli muista lähteistä hematopoieettisten solujen olisi huomattava lähes nolla riskin terveydelle luovuttajan (jos ei pidetä tällaisen istukka), samalla poistaa tarpeen yleisanestesian. Käyttö napanuoran verisolujen transplantaation laajenee johtuen osittain HLA-yhteensopiva siirteen järjestelmä (yhteensopimattomuudet yhdestä kolmeen antigeenejä). Tekniikka pitkäaikaisen varastoinnin hematopoieettisten napanuoraveren solut jäätyneessä tilassa, mikä lisää todennäköisyyttä saada harvinaisia HLA-tyyppiä ja vähentää haku aika HLA-yhteensopiva allogeenisen transplantaation. Samanaikaisesti riski kehittää joitakin latentti-infektioita, joita lähetysreitti välittää, vähenee merkittävästi. Lisäksi on edullinen muoto biologisen henkivakuutus yhteydessä mahdollisuus käyttää napanuoraverestä solujen autologiseen siirtämiseen.

Kuitenkin, koska pieniä määriä verta, joka voidaan kerätä istukasta (keskimäärin enintään 100 ml) esiin ongelman saada mahdollisimman paljon verta napanuoran laskimon tiukasti vaatimuksia noudattaen vähintään bakteeri- tartunnan vaara napanuoran verestä peräisin näytteitä.

Primitiivinen hematopoieettiset solut napanuoraverestä identifioidaan yleensä läsnä pinnallaan glikofosfoproteina CD34, ja sen perusteella, niiden funktionaaliset ominaisuudet tutkimalla klonogeeniset määritystä tai pesäkkeiden muodostumista in vitro. Vertaileva analyysi osoitti, että johto veressä ja luuytimessä enimmäispitoisuus CD34-positiivisten mononukleaaristen solujen fraktiossa ovat vastaavasti 1,6 ja 5,0%, enimmäismäärä pesäkkeitä muodostavien yksiköiden alapopulaation CD34 + - 80 ja 25%, yhteensä kloonaustehokkuudessa CD34 + soluissa - 88 ja 58%, enintään pesäkkeitä muodostavia soluja, joilla on suuri proliferaatiopotentiaali (HPP-CFC -populyatsii CD34 +) - 50 ja 6,5%. On lisättävä, että kloonaustehokkuudessa CD34 + CD38-solut ja kykyä vastata sytokiinistimulaation myös suurempi hematopoieettisten kantasolujen ja napanuoraverestä.

Yhdistelmä fenotyyppinen antigeenien Thy-1, CD34 ja CD45RA vahvistaa korkea proliferatiivinen kapasiteetti napanuoraverestä hematopoieettisten solujen, ja ilmaisu kolmesta antigeenistä pinnalla johto verisolujen osoittaa, että ne kuuluvat kantasolu. Lisäksi on todettu, että solusolu sisältää CD34 + -fenotyyppisiä soluja, joilla ei ole lineaarisia differentiaatiomarkkereita. Taso napanuoraverestä solualapopulaatioita kanssa fenotyyppistä profiilia CD34 + / Lin on noin 1% koko CD34-positiivisia soluja. Hematopoieettisten esisolujen aiheuttaa napanuoraverestä kuin lymfoidisolulinjat ja useita lineaarisia pluripotenttien myelooisen solujen erilaistumista, mikä myös viittaa siihen, että ne kuuluvat kantasoluja.

Kuten jo mainittiin, olennaiset erot luuytimestä ja napanuoran verestä ovat määrä, joka saadaan yhdellä näytteenottomenettely käyttää transplantaatioon hematopoieettisten solujen. Kun luuydinsiirron menetys solumassan erottamisen prosessissa, kylmäsäilytys sulatus ja testaus ovat sallittuja alueella 40-50%, napanuoraverestä solut, menetys on erittäin merkittävä, koska kun käytetään riittämätön määrä HSC elinsiirron voi olla kestämätön. Mukaan G. Kogler et ai (1998), solujen transplantaation vastaanottajan kehon paino 10 kg mahdollisten siirtoleikkauksen (kokonaismäärä kerätyn johto verinäytteet - 2098) voi olla kaikki johto verinäytteet, kehon paino 35 kg - 67%, ja vain 25% näytteistä voi tarjota tehokkaan elinsiirron potilaille, joiden paino on 50-70 kg. Tämä kliininen tilanne osoittaa tarpeen optimoida ja parantaa olemassa olevien napanuoran verisolujen näytteenotto-, kopiointi- ja säilytysmenetelmien tehokkuutta. Näin ollen, kysymyksiä standardoinnin näytteenottomenetelmiä, testaus, erottaminen ja kylmäsäilytyksen napanuoraverestä on nyt laajalti käsitelty kirjallisuudessa luomiseksi veren pankkeja, sen kliinisen käytön, sekä luoda edellytykset ja ehdot varastoinnin hematopoieettisten kantasolujen napanuoraverestä.

[7], [8], [9],

Veren napanuoraveren verenvuotojen kantasolujen käyttö lääketieteessä

Yleensä jopa 10 ⁶ hematopoieettista kantasolua voidaan eristää napanuoraverestä , harvemmin. Tässä yhteydessä tähän asti on edelleen kysymys niin monien hematopoieettisten verisuonisolujen riittävyydestä palauttaa aikuisen vastaanottajan hematopoieesi. Lausunnot tästä asiasta jaettiin. Jotkut tutkijat uskovat, että tämä määrä on riittävä siirtoa varten lapsille, mutta liian pieni elinsiirron aikuiselle ihmiselle, jonka anto on optimaalinen (7-10) x 10 ⁶ CD34-positiivisia soluja per 1 kg kehon painoa - keskimäärin 7 x 10 ⁸ per siirto. Näistä laskelmista seuraa, että yksi napanuoran näyte sisältää 700 kertaa vähemmän hematopoieettisia kantasoluja kuin mitä vaaditaan yhdelle siirrännäiselle aikuispotilaille. Kuitenkin tällainen määrällinen arviointi suoritetaan analogisesti verensiirtojen solujen lukumäärään luuytimessä ja jättää täysin huomiotta hematopoieesin ontogeeniset ominaisuudet.

Erityisesti se ei oteta huomioon, suurempi proliferatiivinen kapasiteetti hematopoieettisten kantasolujen napanuoraverestä verrattuna hematopoieettisten esisolujen luuytimen. Havainnot in vitro pesäkkeitä muodostavaa potentiaalia osoittavat, että yksi annos voi tarjota napanuoran verta muodostavan käyttökuntoon aikuisten vastaanottajalle. Toisaalta, ei pidä unohtaa, että määrä HS-solujen pienenee jopa prosessissa alkionkehityksen: sisällön CD34-positiivisten solujen napanuoraveren lineaarisesti vähennetään 5 kertaa ajan 20 viikko (veren tutkimukseen saatiin tapauksessa ennenaikainen päättäminen raskauden) ja 40 viikko tiineyden (fysiologisten synnytysaika), johon liittyy lineaaristen sytodifferenteitumamerkkien ilmaisun rinnakkainen, pysyvä kasvu.

Koska ei ole standardoitu kvantifiointitapa napanuoraverestä näytteistä progenitorisolujen kiistaa optimaalinen annos hematopoieettisten kantasolujen napaverestä jatkuu. Jotkut tutkijat uskovat, että kun kriteerit valinnassa napanuoraverestä näytteitä voidaan käyttää useissa tumallisten solujen ja mononukleaarisolut, laske vastaanottajan kehon painon, eli annosta. Jotkut tekijät uskovat, että CD34 + -solujen minimaalinen kvantitatiivinen kynnys jopa HSC: n autologisen transplantaation suorittamiseksi on 2 x 10 ⁶ / kg. Kasvu annoksen hematopoieettisten solujen 5 x 10 ⁶ solua / kg (yhteensä 2,5) jo antaa soveltuu paremmin alussa siirtoleikkauksen jälkeen, vähentää esiintyvyys tarttuvan komplikaatioita ja lyhentää aikaa ennalta ehkäisevää antibioottihoitoa.

Mukaan E. Gluckman et ai (1998) hematologian onnistuneen transplantaatioon napanuoran verisolujen se on käyttöön vähintään 3,7 x 10 ⁷ tumallisten solujen per 1 kg kehon painoa vastaanottajan. Pienentämällä annosta hematopoieettisten kantasolujen 1 x 10 ⁷ tai vähemmän tumallisten solujen per 1 kg kehon painoa potilaan ja riski siirteen epäonnistumisen toistuva syöpiä veressä kasvaa dramaattisesti. On tunnustettava, että hemopoieetin nopeaa elpymistä varten tarvittavien esisolusolujen vähimmäismäärä ei ole vielä tiedossa GSG-allotransplantaation jälkeen. Teoriassa tämä voidaan saavuttaa käyttämällä yhden solun, mutta kliininen luuydinsiirron nopeaa ja vakaata juurtumista taattu verensiirtoon ainakin (1-3) x 10 ⁸ tumallisten solujen per 1 kg potilaan ruumiinpainoa.

Viimeaikainen yksityiskohtainen tutkimus HSC: n optimaalisen määrän määrittämiseksi onkohematologiassa sisälsi kolmen ryhmän eristettyjen ryhmien havainnon, jotka oli eristetty siirto-aineen CD34-positiivisten solujen pitoisuudesta riippuen. Ensimmäisen ryhmän potilaat saivat (3-5) x 10 ⁶ solua / kg. Toisen ryhmän potilaiden HSC-annos oli (5-10) x ¹⁰⁶ solua / kg ja kolmannen ryhmän potilaat saivat transplantaation yli 10 x 10 ⁶ CD34 + solua / kg. Paras tulos havaittiin vastaanottajaryhmässä, joka sai siirrettä CD34-positiivisten solujen lukumäärän ollessa (3-5) x 10 ⁶ / kg. Siirrettyjen solujen annoksen kasvaessa yli 5 × 10 ⁶ / kg ei havaittu tilastollisesti merkitseviä hyötyjä. Samanaikaisesti erittäin suuri HSC-pitoisuus transplantaatiossa (> 10 x 10 ⁶ / kg) liittyy merkittävän määrän jäljelle jääneiden tuumorisolujen reinfuusioon, mikä johtaa sairauden uusiutumiseen. Siirrettyjen allogeenisten progenitorisolujen lukumäärän ja "siirteen vs. Isäntä" -reaktion kehittymisen välillä ei ollut suoraa yhteyttä.

HSC-verinäytteen transplantaation kertynyt maailmanlaajuinen kokemus vahvistaa niiden suurta uudelleenimupotentiaalia. Johtimen verensiirron liittämisenopeus korreloi käyttöön otettujen nukleosoitujen solujen lukumäärän kanssa. Parhaita tuloksia havaitaan transplantaation ollessa 3 × 10 ⁷ / kg, kun taas luuytimessä tämä annos on 2 × 10 ⁸ / kg. Koordinaatiokeskusten tietojen mukaan vuoden 2000 lopussa 1200 napanuoran verisolujen siirtoa tehtiin maailmassa pääasiassa luovuttajien sukulaisista (83%). On selvää, että verin verta olisi harkittava vaihtoehtona luuytimelle transplantaatiolle hemoblastooseille.

Kuitenkin, vastasyntyneiden luonne Cordova lähde hematopoieettisten kudosten kannustaa johtuen läsnä toiminnalliset piirteet sen GCW. Kuitenkin vain kliinistä kokemusta antaa vastauksen kysymykseen riittävyydestä näytteen napanuoraveren aikuisten hematopoieettisen ennalleen vastaanottajalle aplasian hematopoiesis. Napaverestä soluja käytetään hoidettaessa monia sairauksia kasvaimen ja muiden kasvaimen luonne: leukemiat ja myelodysplastista oireyhtymää, non-Hodgkin-lymfoomaa ja neuroblastooma, aplastinen anemia, synnynnäinen Fanconin anemia ja Diamond musta tuuletin, puutos Leukosyyttiadheesion, Barr syndrooma, Gunther tauti Harlera oireyhtymä, talassemia .

Huomiota ja erillistä tutkimusta ansaitsevat navan veren veren muodostavien solujen transplantaation immunologiset näkökohdat. On osoitettu, että kun on kyse napaverestä kantasoluja luovuttajilta, joilla epätäydellinen HLA-yhteensopiva elinsiirtojen tulokset on varsin tyydyttävä, että laatijoiden mukaan, osoittaa alempi immunoreaktiivisuuden napanuoraverestä kuin luuytimestä.

Yksityiskohtainen tutkimus solukoostumus napanuoraveren osoitti piirteitä sekä fenotyyppisen taajuuksien efektorisolujen immuunijärjestelmän ja niiden funktionaalinen aktiivisuus, jonka avulla on mahdollista harkita napanuoraverestä lähteenä HSC: iden suhteellisen vähäinen reaktio "graft versus host". Muita ominaisuuksia Toiminnallinen kypsymättömyytensä immunokompetentteja napanuoraverestä soluja on huomattava epätasapaino sytokiinituotannon ja lasku herkkyys sytokiinien uusi asetus immuunivasteen. Sytotoksisen lymfosyyttiaktiivisuuden aikaansaamaa inhibitiota pidetään tekijänä, joka edistää immunologisen sietokyvyn muodostumista transplantoidulle hemopoieettiselle kudokselle. Populaatiossa napanuoraverestä lymfosyyttien, toisin kuin ääreisveren ja luuytimessä aikuisen luovuttajilta, hallitsi passiivinen, kypsymättömiä soluja ja vaimennin soluja. Tämä osoittaa, että veren veren T-lymfosyyttien saatavuus heikkenee immuunivasteeseen. Napanuoran verisolujen monosyytti-populaation tärkeä piirre on funktionaalisesti täydellisten ja aktiivisten antigeenia esittelevien solujen alhainen sisältö.

Toisaalta, matala kypsyyden efektorisolujen immuunijärjestelmän napanuoraverestä lukemat ulottuu sen kliinisen käytön, koska nämä ominaisuudet mahdollistavat intensiteetin vähennys immuunisolujen ristiriita luovuttajan ja vastaanottajan soluja. Mutta toisaalta, me tiedämme, että on olemassa korrelaatio reaktion "käänteishyljintäsairaudelle" ja elinsiirtoa Antituumorivaikutuksen eli vaikutus kehitykseen "käänteishyljintäsairauden leukemia". Tähän liittyen tutkimuksen vastaisen kasvainsytotoksisuutta napanuoraverestä solujen tehtiin. Tulokset osoittavat, että huolimatta todella heikentynyt immuunivaste napanuoraverestä solujen antigeenistimulaatioon, aktivoitu ensinnäkin ovat luonnolliset tappajasolut ja killeropodobnymi solut, jotka ovat aktiivisesti mukana mekanismeja täytäntöönpanon anti-kasvain sytotoksisuutta. Lisäksi napanuoraverestä lymfosyyttien alapopulaatioiden kanssa löydettiin fenotyyppi CD16 + CD56 + ja CD16 "TCRa / s +. Oletetaan, että nämä solut ovat aktivoidussa muodossa toteuttaa reaktio" graft-versus-leukemia".

Vuoden syöpäinstituutti, Academy of Medical Sciences Ukrainan matalissa lämpötiloissa säilytettyjen hematopoieettisten solujen napanuoran verestä annettiin syöpäpotilaille pysyviä hypoplasia hematopoieesiprosessiin takia kemoterapiaa ja sädehoitoa. Näillä potilailla, transplantaation hematopoieettisten kantasolujen napanuoraverestä tehokkaasti palauttaa veren ahdistus, mistä on osoituksena jatkuvasti koholla kypsä muodostettu elementtien perifeerisessä veressä, sekä kasvua indikaattoreita kuvaavat tilaa soluvälitteisen ja humoraalisen immuniteetin. Vakaus repopulyatsionnogo vaikutus elinsiirron jälkeen hematopoieettisten napanuoraverestä soluja mahdollistaa jatkuvan säteilyn ja kemoterapiaa, keskeyttämättä hoitoa. On näyttöä siitä tehokkuuden siirteen kantasolujen napanuoraverestä syöpäpotilaita: vuotuinen riski toistumisen kasvain niiden käytössä oli 25% vs. 40% potilailla, joilla on istuttaa allogeenisen luuytimen geeniä.

Vaikutusmekanismi kylmäsäilytetyn napanuoraverestä kantasolujen olisi pidettävä tuloksena humoraalisen stimulaation hematopoieesin vastaanottajien aiheuttama ainutlaatuinen kyky vastasyntyneen solujen autokriinisiä tuotannon hematopoieettisten kasvutekijöiden, sekä seurauksena väliaikainen juurtumista luovuttajan soluja (kuten vahvistus - merkittävä kasvu sisällön perifeerisen veren sikiön hemoglobiinin vastaanottaja 7-15 päivä verensiirron jälkeen verrattuna perusviitteisiin). Puuttuminen vastaanottajien napanuoraverestä verensiirron jälkeisen reaktiot - seurausta sen suhteellisen toleranssi immuunisolujen, sekä luotettavuuskriteerin hyödyllisyyttä kylmäsäilytetyn biologisen materiaalin.

Progenitorisolut T-lymfosyyttien tappaja napanuoraverestä kykenee aktivoinnin vaikutuksen alaisena eksogeenisen sytokiinistimulaation, jota käytetään kehittämään uusia ex vivo ja in vivo menetelmiä indusoida kasvaimen vastaisen sytotoksisen lymfoidisoluja myöhempää elinsiirtoa immunoterapiassa. Lisäksi immunokompetenttien verisuonisolujen genomin "kypsymättömyys" sallii niiden käyttämisen kasvaimen vastaisen aktiivisuuden parantamiseksi molekyylimallintamismenetelmillä.

Tänään, verin verta on yleisesti sovellettu ensisijaisesti lasten hematologiassa. Lasten akuutti leukemia allotransplantaation hematopoieettisten kantasolujen napanuoraverestä verrattuna luuytimen allograftit, vähensi merkitsevästi reaktion "graft versus host". Pitkäaikainen neutropenia ja trombosytopenia on kuitenkin pidempi, ja valitettavasti korkeampi 100 päivän siirrännäisen kuolleisuus. Pidempi elpymisen perifeerisen veren granulosyyttien ja verihiutaleiden voi johtua riittämättömästä erilaistumista yksittäisten alapopulaatioiden CD34-positiivisten solujen napanuoran verestä, on osoituksena alhainen absorptio radioaktiivisen rodamiini ja heikkoa ilmentymistä CD38-antigeenien pinnallaan.

Samaan aikaan, siirroissa Veren kantasolut navan veren aikuisilla potilailla, suoritetaan puutteen vuoksi sekä yhteensopivan liity luuytimen luovuttajan, sekä mahdollisuuksia saada liikkeelle autologiseen HSC osoitti korkean vuotuisen uusiutumisen elinaika potilailla alle 30 vuotta (73%) . Laajennus vastaanottaja ikäryhmä (18-46 vuotta) laski selviytymisen 53%.

Kvantitatiivinen analyysi solujen fenotyyppi CD34 + luuytimestä ja napanuoran verestä oli suurempi (3,5 kertaa) niiden sisältöä luuytimessä, mutta napanuoran veressä osoittivat merkittävää vallitsevana solujen fenotyyppinen profiili CD34 + HLA-DR .Izvestno, chtokletkikrovisimmunologicheskimi CD34 + HLA-DR lisääntyvät aktiivisempi kuin solut immunofenotyyppiä CD34 + HLA-DR +, kuten vahvistettiin kokeellisissa tutkimuksissa kasvun pitkäaikaisen kulttuuri hematopoieettisten solujen in vitro. Primitiivinen solujen kantasolujen kanssa fenotyypin CD34 + CD38 sisältyvät johto veressä ja luuytimessä, mutta napanuoran verisolujen merkin kanssa asetettu CD34 + CD38 on korkeampi klonogeenisten aktiivisuus kuin hematopoieettisten solujen saman fenotyypin, joka on eristetty aikuisten luovuttajan luuytimessä. Lisäksi, napanuoran verisolujen CD34 + CD38 immunofenotyyppiä tuotanto kasvaa vasteena stimulaatiolle sytokiinien (IL-3, IL-6, G-CSF) ja toistaa 7 kertaa enemmän pesäkkeitä pitkällä aikavälillä viljelmiä kuin luuytimen soluja.

Pankit johtoa veren kantasoluja

Asianmukaisen kehittäminen uuden kentän käytännön lääketieteessä - napaverestä kantasolujen sekä suorittaa elinsiirtoja hematopoieettisen luuytimen kantasolut, sinun on oltava laaja veripankkien, jotka on jo vahvistettu Yhdysvalloissa ja Euroopassa. Verkkorivapankkien sisäisiä verkostoja yhdistää Netcord-pankkien liitto. Onko mahdollista perustaa kansainvälinen yhdistys napanuoraverestä pankkien määräytyy se, että suorittaa liity elinsiirroissa tarvitaan suuri määrä näytteitä napanuoraverta kirjoitit, jonka avulla on mahdollista valita HLA-identtisten luovuttaja. Vain pankkijärjestelmän luominen, jossa erilaisten HLA-tyyppisten verinäytteiden tallentaminen niihin voi todella ratkaista tarvittavan luovuttajan löytämisen ongelman. Tällaisen verivirtopankkien järjestelmän luominen edellyttää eettisten ja oikeudellisten normien alustavaa kehittämistä, jota käsitellään parhaillaan kansainvälisellä tasolla.

Luodakseen verin pankkien veripankit Ukrainassa on tarpeen käsitellä useita säännöksiä ja asiakirjoja.

Ensinnäkin nämä ovat kysymyksiä, jotka koskevat napanuoraverin näytteenoton, jakamisen ja jäädyttämisen standardointia. On tarpeen säädellä napanuoraveren keräys sääntöjä sairaaloissa, mukaisesti vaatimusten lääketieteen etiikan, määrittää vähimmäismäärä napanuoraveren, joka tarjoaa onnistuneen siirto. Se on verrattava ja standardointi eri kriteerien laadun arvioinnin ja useita hematopoieettisten esisolujen sekä HLA-tyypitys menetelmiä ja diagnoosi geneettisten ja tartuntataudit, jotka voidaan lähettää infuusio napanuoran verisolujen asettaa yleisiä valintakriteereitä terveiltä luovuttajilta. On myös syytä keskustella erityisten varastointitilojen luomisesta seerumille, soluille ja DNA: n johdosta.

On ehdottoman välttämätöntä järjestää tietokoneverkkoa verinäytteestä suhteen luuytimen luovuttajien rekistereihin. Kehittää edelleen solun transplantaation täytyy kehittää erityisiä protokollia vertaamalla tuloksia transplantaation napanuoran veressä ja luuytimessä HLA-identtisiä sukulaisia, ja luovuttajilta. Käsitellessään eettisiä ja oikeudellisia ongelmia kliinisestä käytöstä napanuoraverestä solut voivat auttaa standardoida dokumentaatio, mukaan lukien ilmoitti vanhempien suostumusta, sekä ilmoitus äidin tai sukulaisten lapsen tunnistaa geneettinen ja / tai tartuntatauteja.

Määrittävä kehittämisen ehtona solutransplantaati- Ukrainassa on hyväksymistä koskevan kansallisen ohjelman luovuttamista kantasolujen ja kehittämällä kansainvälistä yhteistyötä muiden maiden kautta World Association of luovuttajan luuydintä (WMDA), National Yhdysvaltain luovuttajan luuydintä ohjelma (NMDP) ja muissa rekistereissä.

Yleistäen vielä lyhyt historia Luuytimensiirto istukkaveren, toteamme, että ensimmäinen oletus mahdollisuudesta kliininen käyttö napanuoran verestä, tehty 70-luvun alussa, vahvistettiin 80 vuotta tuloksia kokeellisia tutkimuksia eläimillä, ja vuonna 1988 vuosi on toteutettu maailman ensimmäinen siirteen hematopoieettisten solujen ihmisen napanuoran verestä, ja sitten alkoi kehittyä maailmanlaajuinen verkosto napanuoraverestä pankkien. Jälkeen 10 vuosi, potilaiden määrä, joilla siirrettyjen hematopoieettisten solujen, napanuoran verestä lähempänä 800. Joukossa oli potilaita, joilla eri kasvainsairauksien (leukemia, lymfooma, kiinteät kasvaimet) ja ei-kasvain (synnynnäinen immuunipuutos, anemia, sairaudet, jotka liittyvät metabolisiin häiriöihin) luonne.

Johtimen veressä varhaisten ja sitoutuneiden solujen progenitorien sisältö on suurempi kuin aikuisen ääreisveren. Granulosyyttien ja makrofagien pesäkkeitä muodostavien yksiköiden määrällä ja niiden proliferatiivisella potentiaalilla napanuoraverin veri ylittää merkittävästi aikuisten perifeerisen veren kasvutekijöiden käyttöönoton jälkeen. Pitkäkestoisissa soluviljelmissä in vitro, umbiliksen verisolujen suurempi proliferatiivinen aktiivisuus ja elinkelpoisuus olivat luuytimen soluja. Kriittiset hetket elinsiirtoon napanuoraveren kantasolut ovat hematopoieettisia potentiaalista määrää ja tumallisten solujen läsnäolo sytomegalovirusinfektiosta, HLA-yhteensopivia luovuttajan ja vastaanottajan, painon ja potilaan ikä.

Kuitenkin napaverestä kantasolujen olisi pidettävä vaihtoehtona luuydinsiirto vaikeiden verisairaus, erityisesti lapsilla. Kliinisiä ongelmia transplantaation napanuoran verisolujen vähitellen ratkaistua - on jo varsin tehokas otantamenetelmistä, erottaminen ja kylmäsäilytyksen napanuoraverestä soluja, edellyttäen, että olosuhteet muodostumista napanuoraverestä pankkien, testausmenetelmien paranevat tumallisten solujen. Optimaalinen erottaminen aikana suurten esimuotin napanuoraverestä hematopoieettisten kantasolujen perustamiseen pankkien olisi pidettävä 3% gelatiinin ja 6% hydroksietyylitärkkelystä liuokseen.

Perehrestenko P. Ym (2001) perustellusti huomauttavat, että napaverestä kantasolujen pitäisi ottaa sille kuuluvan paikan monimutkainen hoitotoimenpiteitä voittamiseksi masennuksen hematopoieesiprosessiin eri alkuperää, kuten GSK napanuoraverestä eroavat useita merkittäviä etuja, joista tärkein on suhteellisen helppo korjuu, ei ole vaaraa, että luovuttajan, alhainen saastuminen vastasyntyneen solujen viruksia ja suhteellisen alhaiset kustannukset elinsiirtoa. Jotkut kirjoittajat ehdottavat, että transplantaation napanuoran verisolujen harvemmin kuin luuytimen solut liittyy komplikaatioita, jotka liittyvät reaktio "graft versus host", joka johtuu niiden mukaan, heikko ilmentyminen napanuoraverestä solujen HLA-DR-antigeenejä ja niiden kypsymättömyyttä. Kuitenkin tärkein populaatio tumallisten solujen napanuoran veren ovat T-lymfosyytit (SDZ-positiivisia soluja), jonka pitoisuus on noin 50%, joka on 20% pienempi kuin perifeerisessä veressä aikuisen, mutta fenotyyppiset erot osapopulaatioiden T-solujen näistä lähteet ovat merkityksettömiä.

Tekijöitä, jotka vaikuttavat suoraan selviytymisen kantasolusiirron istukkaveren, on syytä panna merkille potilaan iästä (parhaat tulokset nähdään vastaanottajat ikä on enintään 5 vuotta), varhainen taudinmääritys ja leukemian muoto (hyötysuhde on huomattavasti korkeampi akuutti leukemia). Huomattavia merkkejä ovat nukleiinoitujen napanuoran verisolujen annos sekä niiden HLA-yhteensopivuus vastaanottajan kanssa. Se ei ole sattumaa analyysin kliininen teho napanuoraveren siirtoa GSK onkologian ja hematologian näyttää parhaat tulokset hoidon avulla liittyvien elinsiirrot: yhden vuoden tautivapaan elinajan tässä tapauksessa saavuttaa 63%, kun taas liity elinsiirrot - vain 29%.

Siten, että läsnä on suuri määrä kantasoluja napanuoraverestä ja korkea repopulyatsionnaya kyky vastasyntyneiden hematopoieettisten kantasolujen ansiosta ne soveltuvat allogeenisen transplantaation potilailla, joilla on pahanlaatuisia hematologisia sairauksia. Huomaa kuitenkin, että kertaus hematopoieesin transplantaation jälkeen hematopoieettisten kantasolujen napanuoraverestä "venytetään aika": palauttaa sisällön perifeerisen veren neutrofiilien tapahtuu yleensä loppupuolella 6. Viikko, ja trombosytopenia ilmiö häviävät, tavallisesti sen jälkeen, kun 6 kuukausi. Lisäksi epäkypsä verta muodostavien solujen napanuoran veri ei sulje pois immunologista ristiriita: vakavammaksi akuutin ja kroonisen reaktio "graft versus host" havaittiin vastaavasti 23 ja 25% vastaanottajia. Akuutin leukemian relapseja ensimmäisen napautuksen jälkeen napanuoran verisolujen siirron jälkeen on havaittu 26 prosentissa tapauksista.

[10], [11]