Solujensiirron rajoitukset, vaarat ja komplikaatiot

Muovi-regeneratiivisen lääketieteen perustuu oivallukseen klinikalla ja toti- ominaisuudet pluripotenttien kantasolujen ja progenitorisolujen, jolloin in vitro ja in vivo muodostamaan ennalta määrätty solulinjoja uudelleenpopulointi vahingoittuneita kudoksia ja elimiä ihmispotilaan.

Tosiasiallinen mahdollisuus käyttää ihmisen lopullisten kudosten (ns. Aikuisten kantasolut) alkion kantasoluja ja kantasoluja terapeuttisiin tarkoituksiin ei enää ole epäilyksiä. Yhdysvaltojen kansallisten ja lääketieteellisten akatemioiden asiantuntijat suosittelevat kuitenkin, että kokeissa olevien kantasolujen ominaisuuksia tutkitaan yksityiskohtaisemmin riittävistä biologisista malleista ja arvioida objektiivisesti kaikki transplantaation seuraukset ja käyttää vain kantasoluja klinikalla.

On todettu, että kantasolut ovat osa kaikkien kolmen alkion lehtisen kudosjohdannaisia. Kantasolut esiintyy verkkokalvossa, sarveiskalvon, ihon, epidermin, luuytimen ja ääreisverenkierron, suonissa, massan hampaan, munuaisten, epiteelin ruoansulatuskanavan, haima ja maksa. Nykyaikaisten menetelmien avulla on osoitettu, että kantasoluihin liittyvät solut sijaitsevat aikuisten aivoissa ja selkäydinnesteissä. Nämä sensaatiomainen havainnot ovat herättäneet erityistä huomiota tutkijoiden ja median, kuten hermosoluja aivoissa olivat klassinen esimerkki staattisen solupopulaatiosta, joita ei voida palauttaa. Sekä varhain ja myöhään aikoja ontogenesis koska hermostoputken kantasoluja ihmisen ja eläimen aivot syntyy neuronien, astrosyytit ja oligodendrocytes (Kantasolut: tieteen kehitykseen ja tulevaisuuden tutkimuksen suuntiin Nat Inst, terveys- USA ..).

Normaaleissa olosuhteissa lopullisten kudosten kantasolujen plastisuus ei kuitenkaan ilmene. Lopullisten kudosten kantasolujen muovipotentiaalin saavuttamiseksi ne on eristettävä ja kasvatettava sitten sytokiinien mediaan (LIF, EGF, FGF). Lisäksi kantasolujen johdannaiset menestyvät onnistuneesti vain, kun ne on siirretty elimistöön, jossa on masennettava immuunijärjestelmä (y-säteilytys, sytostaatit, busulfaani jne.). Tähän mennessä ei ole ollut vakuuttavia todisteita kantasolujen plastisuudesta eläimissä, joita ei ole säteilytetty tai muuten altistunut syvälle immunosuppressiolle.

Tällaisissa olosuhteissa, vaarallisia teho PGC: t ilmenevät ensisijaisesti niiden ektooppinen transplantaatioalueella - ihonalainen injektio ESK immuunivajavaisten hiiret injektiokohdassa muodostettu teratokarsinoomasta. Lisäksi aikana ihmisen alkion kehityksen taajuus kromosomin poikkeavuuksien kuin alkionkehityksessä eläimissä. On blastokystivaiheeseen vain 20-25% ihmisalkioiden koostuvat soluista, joissa on normaali karyotyyppi ja valtaosa varhaisen ihmisalkioiden saatu hedelmöityksen jälkeen in vitro, kromosomaalinen mosaicism havaittu kaoottinen ja hyvin usein numeerinen ja rakenteellisia poikkeavuuksia.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7]

Kantasolujen hyödyllinen vaikutus

Kliinisten tutkimusten alustavat tulokset vahvistavat kantasolujen myönteisen vaikutuksen potilaaseen, mutta toistaiseksi ei ole tietoa solutransplantaation pitkäaikaisista seurauksista. Kirjallisuudessa, aluksi hallitsee raportit positiivisia tuloksia transplantaation luuytimen fragmenttien alkioiden Parkinsonin taudin, mutta sitten alkoi ilmestyä tietojen kieltää tehokas terapeuttisia vaikutuksia alkion tai sikiön hermokudoksen transplantoitu potilaiden aivoissa.

Keskellä XX vuosisadan palauttamista hematopoieesin havaittiin ensimmäisen säteilytetään kuolettavasti eläinten laskimoon verensiirron luuytimen soluja, ja vuonna 1969 amerikkalainen tutkija D. Thomas suoritti ensimmäisen luuydinsiirron mies. Tiedon puute mekanismeista immunologinen yhteensopimattomuus luuytimen luovuttajan ja vastaanottajan samalla aiheuttanut korkea kuolleisuus johtuu usein neprizhivleniya siirteen ja kehitys reaktion "graft versus host". Löytö major histocompatibility complex, joka koostuu HLA (HbA), ja menetelmien parantaminen kirjoittamalla on mahdollista lisätä merkittävästi eloonjäämisprosentti luuydinsiirron jälkeen, mikä johti laajoihin tämän menetelmän hoidon onkologian ja hematologian. Kymmenen myöhemmin, ensimmäisen transplantaation hematopoieettisten kantasolujen (HSC: t) on suoritettu, saatu ääreisverestä leukafereesiä. Vuonna 1988 Ranskassa hoitoon lapsen Fanconin anemia lähteenä HSC: iden sitä käytettiin ensimmäisen Napanuoraveren, ja vuoden 2000 loppuun lehdistössä alkoi ilmestyä siitä, pystyvätkö HS-solujen erilaistua soluihin eri kudosten tyyppejä, jotka mahdollisesti laajentaa soveltamisalaa niiden kliinistä soveltamista. Kuitenkin osoittautui, että siirrännäisen materiaali yhdessä GSK: n kanssa sisältää merkittävän määrän hemopoieettisia soluja, jotka ovat luonteeltaan ja ominaisuuksiltaan erilaisia. Tässä yhteydessä kehitetään proseduureja siirteen puhdistamiseksi ja kriteerit sen solupuhtauden arvioimiseksi. Erityisesti käytetään CD34 + -solujen positiivista immunosaktiota, mikä mahdollistaa HSC: n eristämisen monoklonaalisten vasta-aineiden avulla.

[8], [9], [10], [11], [12]

Kantasoluterapian komplikaatiot

Luuytimen elinsiirtojen komplikaatiot ovat useimmiten hematologisia ja liittyvät pitkäaikaiseen iatrogenipetosytopeniaan. Yleisimmät infektiot ovat anemia, anemia ja verenvuodot. Tässä yhteydessä on erittäin tärkeää, miten löytää optimaalinen näytteenotto- tilassa, käsittely ja varastointi luuytimen mahdollisimman säilyttämiseen kantasolujen, jotka tarjoavat nopean ja vakaa talteenotto hematopoieesia. Karakterisoinnissa siirteen avulla voidaan arvioida seuraavien parametrien se on nyt: määrä yksitumaisten ja / tai tumallisissa soluissa, ja pesäkkeitä muodostavien yksiköiden pitoisuus SB34-positiivisia soluja. Valitettavasti nämä indikaattorit antavat vain epäsuoran arvion kantasolusiirteen populaation todellisesta hematopoieettisesta kyvystä. Tänään on olemassa ehdottoman tarkkoja parametreja siirrännäisen riittävyyden määrittämiseksi hemopoieesin pitkäaikaiselle palautumiselle potilaille jopa autologisessa luuytimensiirrossa. Yhteisten kriteerien kehittäminen on äärimmäisen vaikeaa jäykkien käsittelystandardien, kryopreservaation ja siirteen testauksen vuoksi. Lisäksi on otettava huomioon sellaiset tekijät, jotka vaikuttavat hematopoieesin menestyksekkään elpymisen parametreihin kussakin potilaassa. Autologisen luuydinsiirron Näistä tärkeimpiä ovat useita aikaisemman hoitojakson, erityisesti esihoitona, ajan taudin, joka on tuotettu luuytimessä keräysjärjestelmän hakemus pesäkkeitä stimuloivat tekijät munuaisensiirron. Lisäksi ei pidä unohtaa, että sikiön oksastuksen edeltävä kemoterapia voi vaikuttaa negatiivisesti luuytimen kantasoluihin.

Vaikeiden toksisten komplikaatioiden esiintyminen kasvaa merkittävästi allogeenisen luuydinsiirron yhteydessä. Tässä yhteydessä kiinnostavat tilastolliset tiedot allogeenisen luuytimen siirtämisestä talassemiaan. Raporteissa Euroopan luuydinsiirtopotilaan Registered noin 800 luuydinsiirrot potilailla talassemia major. Allogeenisen transplantaation talassemia useimmissa tapauksissa suorittaa HLA-identtisiä sisaruksia, joka liittyy vakavia komplikaatioita ja korkeamman kuolleisuuden elinsiirron kantasolujen liittyvää materiaalia osittain yhteensopiva tai sovitettu luovuttajilta. Minimoimiseksi fataalien tarttuvan komplikaatioita, potilaat sijoitetaan eristetty aseptisissa laatikko laminaarinen virtaus, ovat alhainen tai abakteerisen ruokavalio. Bakteeri puhdistus suolen per os annetaan nerezorbtsionnye muotoja antibiootit, sienilääkkeet. Estääkseen laskimoon amfoterisiini B. Ehkäisy systeemisiä infektioita kiinteiden amikasiini ja keftatsidiimi, jotka nimeävät päivää ennen siirtoa, jatkaen hoitoa purkautua potilaille. Kaikki verivalmisteet ennen säteilytystä säteilytetään annoksella 30 Gy. Parenteraalinen ravitsemus elinsiirron aikana on edellytys ja alkaa välittömästi rajoittamalla ruoan saantia luonnollisesti.

Useita liittyvien komplikaatioiden korkea myrkyllisyys immunosuppressiivisten lääkkeiden, jotka aiheuttavat usein pahoinvointia, oksentelua ja mukosiitti, munuaisvaurio, ja interstitiaalinen keuhkokuume. Yksi vaikeimmista kemoterapian komplikaatioista on veno-okklusiivinen maksasairaus, joka johtaa kuolemaan varhaisessa siirron jälkeen. Niistä riskitekijöitä laskimotukos portaalin järjestelmän maksan huomattava, potilaan ikä, läsnä ollessa hepatiitti ja maksan fibroosi, ja pitämällä immunosuppressiivinen hoito luuydinsiirron jälkeen. Venookklyuzionnaya sairaus on erityisen vaarallista talassemia, johon liittyy hemosiderosis maksafibroosin ja hepatiitti - usein satelliitit trans- fusional terapiaa. Laskimotromboosi portaalin järjestelmän maksan kehittyy 1-2 viikkoa transplantaation jälkeen ja on tyypillistä nopea veren bilirubiinin ja transaminaasit, etenevä hepatomegalia, askites, enkefalopatia, ja kipu ylävatsassa. Histologisesti autopsiamateriaalista määritelty endoteelivaurion, subendoteliaalisessa verenvuoto, vaurioita tsentrolobulyarnyh hepatosyytit, tromboottinen tukkeuma maksan pikkulaskimoihin ja Keski suoneen. Thalassaemiapotilailla on kuvattu kohtalokasta sydänpysähdystä, johon liittyy sytostaattien myrkyllisiä vaikutuksia.

Valmistellessaan elinsiirtoa syklofosfamidi ja busulfaani aiheuttavat usein myrkyllistä verenvuotosykstiittiä patologisilla muutoksilla uroepiteelisoluissa. Käyttö syklosporiini A: luuytimensiirron liittyy usein vaikutuksia munuais- ja neurotoksisuutta, hypertensiivinen oireyhtymä, nesteen kertymistä ja sytolyysiä hepatosyyteissä. Naisiin kohdistuu useammin seksuaali- ja lisääntymistoiminnan häiriö. Pienissä lapsissa elinsiirron jälkeen puberteista ei yleensä tapahdu, mutta vanhemmilla lapsilla geneettisen pallon kehityksen patologia voi olla hyvin vakava - steriilisyyden varaan. Komplikaatioihin, jotka liittyvät suoraan itsesiirtoon, sisältyvät allogeenisten luuydinsolujen hylkääminen, yhteensopimattomuus ABO-järjestelmässä, "siirteen vs. Isän" reaktion akuutit ja krooniset muodot.

Potilaaseen siirron jälkeen ABO-yhteensopimaton luuytimen idioagglutinin tyyppi "isäntä vastaan luovuttajan ABO" tuotetaan 330-605 päivää transplantaation jälkeen, joka voi johtaa pidentyneeseen hemolyysiä ja terävä kasvu verensiirtojen tarvetta. Mainittu komplikaatio on estää verensiirtoon punasolujen ryhmien vain 0. Transplantaation määrä potilaita autoimmuuni- neutropenia, trombosytopenia, pansytopenia, tai, että korjaus, joka on tehtävä pernan poistoa.

On 35-40% vastaanottajien akuutti reaktio "graft versus host" kehittyy 100päivä siirtämisen jälkeen allogeenisen hemoglobiini-identtisiä luuytimen. Aste ihovaurioita, maksan ja suoliston vaihtelee ihottuma, hyperbilirubinemiaan, ripuli ja lievä ihon hilseily, suolitukos, ja akuutti maksan vajaatoiminta. Talassemiapotilaiden taajuus akuutti reaktio "graft versus host" I määrin luuydinsiirron jälkeen on 75%, II ja suuremmassa määrin - 11-53%. Krooninen reaktio "graft versus host", kuten systeeminen useiden elinten oireyhtymä kehittyy yleensä sisällä 100-500 päivää transplantaation jälkeen allogeenisten luuytimen 30-50%: lla potilaista. Iho, suu, maksa, silmät, ruokatorve ja ylähengitysteihin vaikuttavat. Erottaa rajoitetussa muodossa kroonisen reaktio "graft versus host", kun iho ja / tai maksan, ja laajalle levinnyt, yleistynyt iholeesioita, kun se yhdistetään krooninen aggressiivinen hepatiitti, silmäsairaus, sylkirauhasten tai mikä tahansa muu elin. Kuoleman syy on usein tarttuva komplikaatio, joka johtuu vakavasta immuunipuutoksesta. Talassemia krooninen lievä muoto reaktion "graft versus host" havaittiin 12%, kohtalainen - 3% ja vakava - on 0,9% vastaanottajien HLA-yhteensopiva allogeenisen luuytimen. Vakava komplikaatio luuydinsiirron yhteydessä on siirteen hyljintä, joka kehittyy 50-130 päivän kuluttua toimenpiteestä. Hylkytaajuus riippuu säätötilasta. Erityisesti, talassemiapotilaiden käsiteltiin valmistelun aikana metotreksaatilla yksinään, hylkääminen luuytimen siirteen havaitaan 26%: ssa tapauksista, yhdistelmiä metotreksaatin kanssa syklosporiini A - 9%, ja kun osoitetaan vain syklosporiini A - 8%: ssa tapauksista (Haziyev jne. ., 1995).

Tulehdukselliset komplikaatiot, elinsiirron jälkeen luuytimen aiheuttamien virusten, bakteerien ja sienten. Niiden kehitystä liittyy syvä neutropenia, joita aiheuttaa kemoterapian aikana ilmastointi, sytostaatit voittaa limakalvon esteitä ja reaktio "käänteishyljinnän". Riippuen aikaan kehitystä, on kolme vaihetta infektion. Ensimmäisessä vaiheessa (kehittää ensimmäisen kuukauden aikana elinsiirron jälkeen) hallitsee vaurioita limakalvoesteen ja neutropenia, johon usein liittyy virusinfektio (herpes, Epstein-Barrin virus, sytomegalovirus, Varicella zoster), sekä aiheuttamien infektioiden grampolozhi - tulehdus- ja gram-negatiiviset bakteerit, Candida sienet , aspergilloomat. Varhaisessa munuaisensiirron jälkeen (toinen ja kolmas kuukauden jälkeen) on vakavin sytomegalovirusinfektiosta, mikä johtaa usein kuolemaan potilaista toisen vaiheen infektio. Talassemia sytomegalovirusinfektiosta transplantaation jälkeen luuytimen esiintyy 1,7-4,4% vastaanottajia. Kolmannen vaiheen havaitaan myöhään siirtoleikkauksen jälkeen (kolme kuukautta leikkauksen jälkeen), ja on tunnettu siitä, severe combined immunodeficiency. Tämä ajanjakso on yleisesti todettu aiheuttamien infektioiden vyöruusua, streptokokki, Pneumocystis Carini Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae ja hepatotrooppiset virukset. Talassemia kuolleisuutta potilailla, luuydinsiirron jälkeen liittyy bakteerien ja sienten sepsis, idiopaattinen interstitiaalinen ja sytomegalovirus keuhkokuume, akuutti hengitysvaikeusoireyhtymä, akuutti sydämen vajaatoiminta, sydämen tamponaatio, aivoverenvuoto, venookklyuzionnoy maksasairaus ja akuutti reaktio "graft versus host".

Tällä hetkellä on edistytty tietyssä määrin kehittämällä menetelmiä luuytimen eristämiseksi puhtaista hemopoieettisten solujen populaatiosta. Menetelmä sikiön veren saamiseksi napanuorasta on parantunut ja menetelmiä veren muodostavien solujen eristämiseen verinäytteestä on kehitetty. Tieteellisessä lehdistössä on raportoitu, että kun kasvatetaan mediaan sytokiinien kanssa, hematopoieettiset kantasolut pystyvät lisääntymään. Käytettäessä erityisesti suunniteltuja bioreaktoreita GCS: n laajentamiseksi luuytimestä, perifeerisestä tai verinäytteestä eristettyjen kantasolujen biomassa kasvaa merkittävästi. HSC-laajentumisen mahdollisuus on merkittävä asema solujensiirron kliinisessä kehityksessä.

Kuitenkin ennen jalostukseen in vitro GSK tarpeen myöntää homogeenisen populaation hematopoieettisten kantasolujen. Tämä saadaan yleensä aikaan käyttämällä markkereita, jotka mahdollistavat selektiivisesti merkitä HSC monoklonaalisia vasta-aineita kovalenttisesti sidottu magneetti- tai fluoresoivan leiman, ja valitse ne sopivan solu lajittelija. Samanaikaisesti hematopoieettisten kantasolujen fenotyyppisten ominaisuuksien ongelmaa ei ole lopultakin ratkaistu. A. Petrenko., V. Hryschenko (2003) ehdolle GSK käsiteltyjä soluja, jotka ovat läsnä pinnalla CD34, AC133 ja Thyl antigeenejä eikä CD38, HLA-DR ja muut markkereita erilaistumisen (solujen fenotyyppi CD34 + Liir). Lineaarista erilaistumisen markkereita (linjaa, Lin) ovat glykoforiini A (GPA), CD3, CD4, CD8, CD10, CD14, CD16, CD19, CD20 (Muench, 2001). Pidetään lupaava siirtoa varten solut fenotyyppi CD34 + CD45RalüW CD71low, sekä CD34 + Thyl + CD38low / c-kit-/ alhainen.

Ongelmana on ongelma, joka on riittävän tehokas transplantaatioille riittävä määrä HSC: ää. Tällä hetkellä kantasolujen muodostavat solut ovat luuytimen, perifeerisen ja sorvin veren sekä alkion maksa. Kantojen hemopoieettisten solujen laajeneminen saavutetaan viljelemällä niitä endotelyyttien ja hematopoieettisten kasvutekijöiden läsnäollessa. Eri protokollia varten proliferaation induktio käytetyt HSC mieloproteiny, SCF, erytropoietiini, insuliinin kaltaiset kasvutekijät, kortikosteroidit ja estrogeenit. Kun sytokiinien yhdistelmiä käytetään in vitro, HSC-pitoisuuden merkittävää kasvua voidaan saavuttaa, kun niiden vapautuminen on huipussa toisen viljelyviikon lopussa.

Perinteisesti HSC-verin verta käytetään pääasiassa hemoblastooseissa. Kuitenkin hematopoieettisten solujen vähimmäisannos, joka on välttämätöntä veren solusolujen onnistuneelle transplantaatiolle, on 3,7 x 10 ⁷ nukleoidoitua solua per 1 kiloa vastaanottajan ruumiinpainoa. Pienemmän HSC: n käyttäminen lisää merkittävästi oksastuksen vajaatoiminnan ja taudin uusiutumista. Siksi napanuoraverin veren muodostavien solujen siirtämistä käytetään pääasiassa hemoblastoosin hoidossa lapsilla.

Valitettavasti vieläkään ei ole standardia tyhjiä, ja standardoituja protokollia kliiniseen käyttöön napanuoraverestä hematopoieettisten solujen. Näin ollen itse kantasolut napanuoraverestä ei laillisesti tunnustettu lähteenä hematopoieettisten kantasolujen siirron jälkeen. Lisäksi ei ole mitään eettisiä tai oikeudellisia sääntöjä ja organisaatiota koskevat pankkien navan krovb jotka ovat käytettävissä ulkomailla. Samalla turvallisuudesta siirtoistutusten napanuoraveren, kaikki näytteet on seurattava huolellisesti. Ennen verinäytteiden ottoa alussa raskaana olevan naisen on saatava suostumuksensa siihen. Kukin raskaana on tutkittava kelkkaan HBsAg, vasta-aineita C-hepatiittiviruksen, HIV: n, ja syfilis. Kukin näyte napanuoraverestä on testattava standardin numero tumallisten solujen ja CD34 + pesäkkeitä muodostavat kyky. Lisäksi HbA tehdään kirjoittamalla, veriryhmä ABO ja sen jäsenyys Rh tekijä. Testausmenetelmät tarvitaan sadon bakteriologiselle Steriiliksi serologisissa HIV-1 ja HIV-2-infektion, HBsAg, hepatiitti C, sytomegalovirusinfektiota, ntly ntly-1 ja II, kuppa, toksoplasmoosi. Lisäksi, havaitsemiseksi sytomegaloviruksen ja HIV-polymeraasiketjureaktio suoritetaan. Vaikuttaa asianmukaiselta täydentää analysointiin protokollien testauksen napanuoraveren HS-solujen tunnistaa tällaiset geneettisten sairauksien, kuten talassemia ja sirppisoluanemia, adenosiinideaminaasigeeni puutos, agammaglobulinemiaan Bruton tauti Harlera ja punter.

Siirtymävaiheen valmistelun seuraavassa vaiheessa syntyy kysymys GSK: n säilymisestä. Vaarallisimmat solujen elinkelpoisuudelle valmistettaessa niitä ovat jäätymis- ja sulatusmenetelmät. Hemopoietisten solujen jäätymisen aikana merkittävä osa niistä voidaan tuhota kristallin muodostumisen vuoksi. Solukuoleman prosenttiosuuden pienentämiseksi käytetään erityisiä aineita - kryoprotektansseja. Useimmin, kuten kryoprotektoriaineena, DMSO: ta käytetään lopullisessa 10%: n konsentraatiossa. Kuitenkin DMSO: lle tämä pitoisuus on luonteenomaista suoraa sytotoksista vaikutusta, joka ilmentää itsensä myös olosuhteissa, joissa minimaalinen altistuminen on vähäistä. Vähennetään sytotoksinen vaikutus saavuttaa säilyttämällä jäykkä nolla lämpötila valotustilassa ja asetuksen noudattaminen käsittely materiaalin aikana ja sulatuksen jälkeen (nopeus kaikki käsittelyt soveltamalla useita pesun menettelyt). Älä käytä DMSO-pitoisuutta, joka on pienempi kuin 5%, koska tässä tapauksessa hematopoieettisten solujen joukkokuolema tapahtuu jäädytysjakson aikana.

Punaisten verisolujen epäpuhtauksien läsnäolo GSK-suspensio-seoksessa luo vaaran kehittää yhteensopimattomuusreaktio erytrosyyttiantigeeneille. Samanaikaisesti erytrosyyttien poistamisella hematopoieettisten solujen menetykset lisääntyvät merkittävästi. Tässä yhteydessä ehdotettiin menetelmää GCS: n fraktioimattomalle erottamiselle. Tässä tapauksessa suojata tumalliset solut vahingollisia vaikutuksia matalissa lämpötiloissa 10% DMSO-liuos ja jäähdytetään tasaisella nopeudella (HS / min) -80 ° C: seen, minkä jälkeen solususpensio jäädytettiin nestetypessä. Uskotaan, että tällä kryopreservaatiotekniikalla tapahtuu erytrosyyttien osittainen hajotus, joten verinäytteet eivät edellytä fraktiointia. Ennen transplantaatiota solususpensio sulatetaan, pestään ilman hemoglobiinia ja DMSO: ta ihmisen albumiinin tai seerumin liuoksessa. Säilyttäminen hematopoieettisten esisolujen tällä menetelmällä on todellakin korkeampi kuin jälkeen napanuoraverestä fraktioinnin, mutta komplikaatioiden vaara johtuen siirron ABO-epäsopivan punasolujen tallennettu.

Pankkien järjestelmän luominen HSC-testattujen ja HSC-näytteiden varastointiin voisi ratkaista edellä mainitut ongelmat. Tätä varten on kuitenkin tarpeen kehittää eettisiä ja oikeudellisia normeja, joista keskustellaan edelleen. Ennen pankkiviraston perustamista on tarpeen antaa useita säännöksiä ja asiakirjoja, jotka koskevat näytteenottoa, jakotislausta, testausta ja kirjoittamista sekä GCW: n kryokonservointiin liittyvien menettelyjen standardointia. Edellytyksenä tehokkaan toiminnan pankkien GSK on organisaatio ATK-tietokantojen suhde luovuttajan luuydintä rekisteröi World Association (WMDA) ja National luovuttajan luuydintä Yhdysvaltain Program (NMDP).

Lisäksi on välttämätöntä optimoida ja standardisoida HSC-laajenemisen menetelmät in vitro, pääasiassa veren kudosveren verisoluja. HSC-verinäytteen kopiointi on välttämätöntä HLA-järjestelmän kanssa yhteensopivien potentiaalisten vastaanottajien määrän lisäämiseksi. Koska pieniä määriä johto-verta, sen sisältämä HSC-määrä ei pääsääntöisesti pysty tuottamaan luuytimen uudelleenkoutamista aikuispotilailla. Samanaikaisesti liikkumattomien siirtojen suorittamiseksi on tarpeen saada riittävä määrä tyypillisiä GSK-näytteitä (10 000: stä 1 500 000: aan 1 vastaanottajalle).

Kantohemopoietisolujen transplantaatio ei poista komplikaatioita, jotka liittyvät luuytimen siirtoon. Analyysi osoittaa, että napanuoran veren kantasolujen transplantaation aikana akuutti "siirteen-versus-isäntä" -reaktion vakavat muodot kehittyvät 23 prosentilla, kroonisesti 25 prosentilla vastaanottajista. Oncohematologisissa potilailla akuutin leukemian toistuminen ensimmäisen vuoden aikana HSC-verinäytteen transplantaation jälkeen havaittiin 26 prosentissa tapauksista.

Viime vuosina perifeeristen hematopoieettisten kantasolujen transplantaation menetelmät ovat kehittyneet voimakkaasti. HSC: n sisältö perifeerisessä veressä on niin pieni (1 GSK / 100 000 verisolua), että niiden eristäminen ilman erityistä valmistetta ei ole järkevää. Siksi luovuttajalle on aiemmin annettu lääkeaineen stimulaatio, jolla hematopoieettiset luuydinsolut vapautuvat verenkiertoon. Tätä tarkoitusta varten käytetään niin kauheaan vaarattomia lääkkeitä kuin syklofosfamidi- ja granulosyyttipesäkkeitä stimuloiva tekijä. Mutta vaikka HSC: n mobilisoimiseksi ääreisverenkierrossa, CD34 + -solujen pitoisuus ei ylitä 1,6%.

HSC: n mobilisoimiseksi klinikalla käytetään yleisemmin C-CEC: tä, jolle on tyypillistä suhteellisen hyvä siedettävyys, lukuun ottamatta kipua lähes säännöllisesti luissa. On huomattava, että nykyaikaisten veren erottimien käyttö mahdollistaa hematopoieesin kantojen tehokkaan eristämisen. Kuitenkin, normaaleissa hematopoieesin saada riittäviä määriä hematopoieettisten kantasolujen, vertailukelpoinen kyky repopulyativnoy sіl medullaarinen lietteen, on tarpeen suorittaa vähintään kuusi hoitoja. Jokaisen tällaisen menetelmän mukaan erotin käsittelee 10-12 litraa verta, joka voi aiheuttaa trombosytopeniaa ja leukopeniaa. Erottamismenetelmällä tarkoitetaan antikoagulantin (natriumsitraatin) antamista luovuttajalle, joka ei sulje pois kuitenkaan yhteyttä verihiutaleiden aktivoitumiseen ekstrakorporaalisen sentrifugoinnin aikana. Nämä tekijät luovat edellytyksiä tarttuvien ja verenvuotojen aiheuttamien komplikaatioiden kehittymiselle. Menetelmän toinen haittapuoli on mobilisaation vasteen huomattava vaihtelu, joka vaatii HSC: n pitoisuuden seurantaa perifeerisissä verenluovuttajissa, mikä on tarpeen niiden maksimistason määrittämiseksi.

HSC: n autologinen transplantaatio, päinvastoin kuin allogeeninen, sulkee kokonaan hylkäysreaktion kehityksen. Kuitenkin, merkittävä haitta autologisen transplantaation hematopoieettisten kantasolujen, rajoittamalla eri indikaatioissa sen toiminnasta, on suuri todennäköisyys reinfusion solu leukemiasolujen klooni elinsiirtoa. Lisäksi immuunivälitteisen "siirteen-kasvaimen" vaikutuksen puute lisää huomattavasti pahanlaatuisen verisairauden toistumistiheyttä. Näin ollen, ainoa tapa radikaalin poistaminen klonaalisen hematopoieettisten neoplastisten ja palauttaa normaalin polyklonaalisen hematopoieesia in myelodysplastista oireyhtymää on intensiivinen kemoterapia allogeenisten HSC-siirron.

Mutta jopa tässä tapauksessa useimpien hemoblastoosien hoito on tarkoitettu ainoastaan lisäämään potilaiden eloonjäämää ja parantamaan elämänlaatua. Useiden suurten tutkimusten mukaan pitkittynyt taudista vapaan eloonjääminen HSC-allotransplantaation jälkeen saavutetaan 40%: lla onkohematologisista potilaista. Kun käytetään HbA-yhteensopivaa sisarta kantasoluja, parhaita tuloksia havaitaan nuorilla potilailla, joilla on lyhyt sairauden historia, räjähdyssuolien määrä jopa 10% ja suotuisa sytogenetikka. Valitettavasti HSC-allotransplantaatioon liittyvä kuolleisuus myelodysplastisten sairauksien potilailla on edelleen korkea (useimmissa raporteissa - noin 40%). Tulokset 10 vuoden toimi Yhdysvaltain kansallinen ohjelma luuytimen luovutukseen (510 potilasta, mediaani-ikä - 38 vuotta) osoittavat, että tautivapaan elinajan on 29% kahden vuoden kuluessa suhteellisen alhainen todennäköisyys uusiutumisen (14%). Kuolleisuus, joka aiheutuu GSC: n allotransplantaation menettelystä riippumattomasta luovuttajasta, on äärimmäisen korkea ja saavuttaa 54% kahden vuoden jakson aikana. Samanlaisia tuloksia saatiin eurooppalaisessa tutkimuksessa (118 potilasta, mediaani ikä 24 vuotta, 2 vuoden relapsiton selviytyminen 28%, toistuminen 35%, kuolleisuus 58%).

Suorittaessaan intensiivistä kemoterapiaa ja sen jälkeen pelkistämällä allogeenisten hematopoieettisten solujen gemopo- eettisiä syntyy usein immunohematology ja verensiirron komplikaatiot. Monin tavoin ne liittyvät siihen, että ihmisryhmien veriryhmät periytyvät MHC-molekyyleistä riippumatta. Siksi, vaikka luovuttaja ja vastaanottaja ovat yhteensopivia tärkeimpien HLA-antigeenien kanssa, niiden erytrosyytteillä voi olla erilainen fenotyyppi. Jakaa "suuri" yhteensopimattomuus kun preexist vastaanottajan vasta-antigeeneille luovuttajan punasolujen, ja "pieni", kun luovuttaja vasta-aineita antigeeneille punasolujen vastaanottajan. On olemassa tapauksia, joissa yhdistyy "suuret" ja "pienet" yhteensopimattomuudet.

Tulokset vertaileva analyysi kliinistä tehoa luuytimen ja hematopoieettiset kantasolut napaverestä elinkykyä hematologisissa pahanlaatuisuuksissa osoittavat, että lapset allotransplantaation GSK napanuoraverestä vähensi merkitsevästi reaktion "graft versus host", mutta on pidempi talteenotto neutrofiilien ja verihiutaleiden 100 vuorokauden transplantaation kuolleisuuden yleisyys.

Varhaisen kuolleisuuden syiden selvittäminen mahdollisti GSK: n allogeenisen elinsiirron vasta-aiheiden selvittämisen, joista tärkeimpiä ovat:

• läsnäolo vastaanottajalla tai positiivisten testien luovuttajalla sytomegalovirusinfektiolle (ilman ennaltaehkäisevää hoitoa);
• akuutti säteilysairaus;
• läsnäolo tai jopa epäileminen mykoottisen infektion esiintymisestä potilaassa (ilman systeemistä varhaista profylaksia fungisidisten lääkkeiden kanssa);
• hemoblastooseja, joissa potilaat saivat pitkäaikaista sytostaattihoitoa (koska äkillinen sydänpysähdys ja useiden elinten vajaus olivat suuret todennäköisyydet);
• siirto HLA-ei-identtisistä luovuttajista (ilman syklosporiini A: n äkillistä "transplantaatiota isäntä-reaktiota" vastaan);
• krooninen virusperäinen C-hepatiitti (johtuen maksan veno-okklusiivisen maksatulehduksen suuresta riskistä).

Näin ollen GSK-siirto voi aiheuttaa vakavia komplikaatioita, jotka johtavat usein kuolemaan. Alussa (jopa 100 päivä elinsiirron) aikana nämä ovat tulehdukselliset komplikaatiot, akuutti reaktio "graft versus host", siirrännäisen hylkimisen (neprizhivlenie HSC luovuttaja), venookklyuzionnaya maksasairaus, sekä johtuen esihoitona myrkyllisyys, kudosvaurioita, jonka korkea ominainen nopeus remontin (iho, verisuonten endoteelin sisäepiteelissä). Komplikaatiot myöhään munuaisensiirron jälkeen ovat krooniset reaktio "käänteishyljintää" uusiutumisen taustalla olevan sairauden, lasten kasvu on hidastunut, heikentynyt lisääntymiskyky ja kilpirauhasen silmäsairaus.

Äskettäin luuydinsolujen plastisuutta vastaan julkaisujen yhteydessä on syntynyt ajatus GSK: n käytöstä sydänkohtausten ja muiden sairauksien hoidossa. Vaikka jotkut eläinkokeet tukevat tätä mahdollisuutta, on vahvistettava johtopäätökset luuydinsolujen plastisuudesta. Tämän olosuhteen olisi otettava huomioon ne tutkijat, jotka uskovat, että ihmisen luuytimen siirretyt solut muunnetaan helposti solujen luiden, sydänlihaksen tai keskushermoston soluiksi. Olettamus, että GSK: t ovat näiden elinten regeneroinnin luonnollinen solulähde, edellyttää vakavia todisteita.

Erityisesti julkaisi ensimmäiset tulokset avoin satunnaistettu tutkimus Belenkova V. (2003), jonka tarkoituksena - tutkimaan vaikutusta C-SIS (eli liikkeelle autologisen veren HSC: iden) kliiniseen, hemodynaaminen ja Neurohumoraalisten potilaan asemaan kohtalaista tai vaikeaa kroonista sydämen vajaatoimintaa, sekä sen turvallisuuden arviointia tavanomaista hoitoa (ACE-estäjät, beeta-salpaajat, diureetit, sydänglykosidit). Ensimmäinen julkaisu tulosten tutkimusohjelman Kirjoittajat toteavat, että ainoa peruste O-CBP ovat tulokset hoidossa yksi potilas hoidon aikana tätä lääkettä löydetty kiistaton parannus kaikista kliinisistä ja hemodynaamisia parametrejä. Kuitenkin teoria HS-solujen mobilisaatio verenkiertoon regeneraatio sydänlihaksen infarktin jälkeinen vyöhyke ei ole vahvistettu - vaikka potilaalla positiivisen kliinisen dynamiikkaa rasitusultraäänikardiografia kanssa dobutamiini ei havaittu syntymistä elinkelpoisten sydänlihaksen arpi alueilla kentän.

On huomattava, että tällä hetkellä tiedot, jotka sallivat suositella korvaushoitolääkitystä laajalle levittämiselle arkipäivän kliiniseen käytäntöön, eivät selvästikään riitä. Taitavasti ja toiminnan laatua kliinisiä tutkimuksia tehokkuuden määrittämiseksi eri vaihtoehtojen regeneratiivisen soluterapian kehittäminen merkintöjen ja vasta sen sekä ohjeet sekakäyttö uusiutuvia ja muovin hoito ja tavanomaisten kirurgiseen tai konservatiivinen hoito. Toistaiseksi ei vastausta kysymykseen millainen populaation luuydinsolujen (hematopoieettisten kanta- tai stroomakasvainten) voi aiheuttaa neuronien ja sydänlihassolujen, eikä ole selvää, mitä edellytyksiä osallistua tähän in vivo.

Näillä aloilla työskentelee monissa maissa. Yhteenvedossa symposiumin akuuttiin maksan vajaatoiminta Yhdysvaltain National Institutes of Health joukossa lupaava hoitomenetelmissä, sekä maksansiirtoa, siirteen merkitty ksenon tai allogeenisiä hepatosyyttien in vitro bioreaktoreissa yhteydessä maksasoluja. On suoraa näyttöä siitä, että vain vieraat, toiminnallisesti aktiiviset hepatosyytit voivat tarjota tehokasta tukea vastaanottajan maksalle. Eristettyjen hepatosyyttien kliinistä käyttöä varten on välttämätöntä luoda solupankki, joka vähentää huomattavasti solujen vapautumisen ja käytön välistä aikaa. Hyväksyttävin yksittäisten hepatosyyttien pankkien luomiseksi on maksasolujen kylmäsäilytys nestetyppissä. Kun tällaisia soluja käytettiin klinikalla potilailla, joilla oli akuutti ja krooninen maksan vajaatoiminta, paljastui melko korkea terapeuttinen vaikutus.

Huolimatta optimistinen ja rohkaisevia tuloksia maksasolujen siirto kokeessa ja klinikalla, on vielä monia ongelmia on vielä kaukana ratkaistu. Näitä ovat muun muassa rajallinen määrä sopivia elimiä eristettyjen hepatosyyttien riittävän tehokas erotusmenetelmät, puute standardoitujen säilyttää maksasolujen sumea mekanismien ymmärtäminen sääntelyn kasvun ja lisääntymisen siirrettyjen solujen, riittämätön menetelmien juurtumista arviointi tai hylkäämisestä allogeenisen hepatosyyttien. Tämän tulisi myös sisällyttää läsnä elinsiirtojen immuniteetin allogeenisia tai ksenogeenisia soluja, vaikkakin vähemmän kuin ortotooppisessa maksansiirron, mutta vaaditaan soveltamaan immunosuppressiivisten aineiden, kapseloimiseksi eristetty hepatosyyttejä tai erityistä käsittelyä entsyymejä. Transplantation hepatosyyttien johtaa usein immuunivasteen ristiriidat vastaanottajan ja luovuttajan on hylkimisreaktion, joka edellyttää sytostaattien. Yksi ratkaisu tähän ongelmaan on käyttää polymeeri mikrohuokoinen median eristämiseksi maksan solut, jotka parantavat niiden selviytymistä, koska kapselin kalvo suojaa tehokkaasti hepatosyytit, huolimatta isännän immunisoinnin.

Kuitenkin akuutti maksan vajaatoiminta, kuten hepatosyyttien elinsiirrot ei ole vaikutusta, koska melko pitkä aika, joka tarvitaan juurtumista maksan solujen uuteen ympäristöön pääsy vaiheessa optimaalista toimintaa. Mahdollinen rajoitus sapen eritys on ektooppinen transplantaation eristetty hepatosyyttien, ja kun käytetään bioreaktoreissa elintoimintoja este toimii ristiriita lajien ihmisen proteiineja ja proteiineja, jotka tuottavat ksenogeenisiä hepatosyytit.

Kirjallisuudessa on raportoitu, että paikallinen transplantaatio luuytimen stroomasolujen kantasolujen mahdollistaa tehokkaan korjaus luun vikoja, ja luun palautumista tässä tapauksessa on tehokkaampaa kuin spontaaniin korjaavaa palautuminen. Useissa prekliinisissä tutkimuksissa eläinmalleissa ovat vakuuttavasti osoittaneet mahdollisuutta käyttää siirteiden luuydinperuskudossoluihin ortopediassa, vaikka optimoida nämä menetelmät, jopa yksinkertaisin tapauksissa työtä on jatkettava. Erityisesti ei ole vielä löydetty optimaalisia olosuhteita osteogeenisten stromasolujen laajentamiseksi ex vivo, niiden ihanteellisen kantajan (matriisin) rakenne ja koostumus pysyvät ennallaan. Sellaisten solujen vähimmäismäärää, joita tarvitaan irtotavaran luun uudistumiselle, ei ole määritetty.

Se osoitti, että mesenkymaaliset kantasolut ilmentävät transgermalnuyu plastisuutta - kyky erilaistua solutyypit, jotka fenotyyppisesti eivät liity alkuperäiseen solulinja. Optimaalisissa olosuhteissa polyklonaalisen kantasolulinjaan kulttuurin luuydinperuskudos- ylläpitää in vitro yli 50 jakautuminen, joka tekee mahdolliseksi saada miljardeja stroomasolujen 1 ml: luuydinaspiraatista. Kuitenkin, populaatio mesenkymaalisten kantasolujen tunnettu siitä, heterogeenisyys, joka ilmenee vaihtelua pesäkkeiden kokoa, eri nopeuksia muodostumisen ja morfologiset monimuotoisuus solutyyppien - kohteesta fibroblastin kaltaisen kara-muotoinen suuri tasainen soluja. Kuluessa 3viikko viljelyn stroomasolujen kantasolujen havaittu fenotyyppinen heterogeenisyys: yksi pesäkkeitä muodostavien kyhmyt luukudoksen, kun taas toiset - klustereita adiposyyttien, ja muut, harvemmin, muodostaen saaria rustoa.

Keskushermoston degeneratiivisten sairauksien hoitoon käytettiin alkion hermokudoksen siirtoa. Viime vuosina, sen sijaan, että sikiön aivojen kudostransplantin teräs soluelementtien neuropalloja, jotka ovat peräisin neuraalisista kantasoluista (.Poltavtseva, 2001). Neuropallot sisältävät sitkeitä neuraalisia esiasteita ja neurogliaa - tämä antaa toivomuksen kadonneiden aivotoimintojen palautumiselle transplantaation jälkeen. Transplantaation jälkeen solujen neuropallojen dispergoidaan rotan striatumissa runko merkitty niiden proliferaatiota ja erilaistumista dopaminergisten neuronien, mikä eliminoi moottori epäsymmetriaa rotilla, joilla on kokeellinen gemiparkinsonizmom. Joissakin tapauksissa tuumorisolut kehittyivät neurosfäärin soluista, mikä johti eläinten kuolemaan (Bjorklund, 2002).

Klinikka tutkitaan huolellisesti kahden potilasryhmissä, joissa potilaat eivätkä lääkärit tiesivät heitä katsellessa (kaksoissokkoutettu), että yksi ryhmä potilaita siirrettyjen alkioiden kudoksesta neuronien dopamiinia tuottavat, toinen ryhmä potilaita tehnyt väärän askeleen, antoi odottamattomia tuloksia . Potilaat, jotka olivat siirtäneet alkionihermokudoksen, eivät tunne parempaa kuin kontrolliryhmän potilaat. Lisäksi 5 out of 33 potilasta 2 vuoden kuluttua elinsiirron jälkeen alkion hermokudoksen kehittynyt pysyviä pakkoliikkeet, joita ei ollut kontrolliryhmän potilaaseen (Kantasolut: tieteen kehitykseen ja tulevaisuuden tutkimuksen suuntiin Nat Inst, of Health USA ...). Yksi ratkaisemattomat ongelmat kliinisten tutkimusten aivojen neuraalisten kantasolujen on analysoida todellisia mahdollisuuksia ja rajoituksia niiden johdannaisten elinsiirtojen korjaamiseksi keskushermoston häiriöitä. On mahdollista, että pitkittynyt kohtaus indusoidun neyronogenez hippokampuksessa, mikä sen rakenteellisia ja toiminnallisia muutoksia voivat olla tekijä asteittaista kehittymistä epilepsia. Tämä johtopäätös on erityisen huomionarvoista, koska se osoittaa mahdolliset kielteiset vaikutukset sukupolven uusien neuronien aikuisen aivoissa, ja muodostuminen poikkeavan synaptisten yhteyksien.

Meidän ei pidä unohtaa, että viljelynesteiden sytokiinien kanssa (mitogeenien) approksimoi ominaisuudet kantasolujen että tuumorisolujen, kun ne tapahtuvat lähellä muutosten säätelyssä solusykleihin, määritetään kyky jakaa loputtomiin. On typerää siirtää ihmisille alkion kantasolujen varhaisia johdannaisia, koska tässä tapauksessa pahanlaatuisten kasvainten kehittymisvaara on erittäin suuri. On paljon turvallisempaa käyttää entistä enemmän sitoutuneita jälkeläisjään, toisin sanoen erilaistuneiden linjojen esiastesoluja. Tällä hetkellä luotettavaa tekniikkaa stabiilien ihmissolulinjoiden saamiseksi oikeaan suuntaan ei kuitenkaan ole vielä selvitetty.

Molekyylibiologian tekniikoiden käyttö perinnöllisen patologian ja ihmisen sairauksien korjaamiseksi kantasolumodifikaation avulla on erittäin hyödyllistä käytännön lääketieteessä. Kantasolujen genomin ominaispiirteet mahdollistavat ainutlaatuisten siirtojärjestelmien kehittämisen geneettisten sairauksien korjaamiseksi. Mutta tähän suuntaan on myös useita rajoituksia, jotka on voitettava ennen kuin kantasolujen geenitekniikan käytännön soveltaminen alkaa. Ensinnäkin on välttämätöntä optimoida kantasolun genomien modifikaatiota ex vivo. Tiedetään, että kantasolujen pitkittynyt (3-4 viikon) lisääntyminen heikentää niiden transfektiota, joten useat transfektiosyklit ovat välttämättömiä niiden geneettisen modifikaation korkean tason saavuttamiseksi. Suurin ongelma liittyy kuitenkin terapeuttisen geenin ekspression kestoon. Tähän mennessä yksikään tutkimuksista ei ole todettu, että tehokkaan ilmentymisen aika muuntuneiden solujen transplantaation jälkeen oli korkeintaan neljä kuukautta. 100 prosentissa tapauksista ajan mittaan transfektoitujen geenien ilmentyminen vähenee promoottorien inaktivoinnin ja / tai solujen kuoleman vuoksi modifioidulla genomilla.

Tärkeä ongelma on solutekniikan käytön kustannukset lääketieteessä. Esimerkiksi arvioitu vuotuinen rahoitustarve vain luuytimensiirtoyksikön lääketieteellisistä kuluista, joiden tarkoituksena on suorittaa 50 siirtoa vuodessa, on noin 900 000 dollaria.

Soluteknologian kehittäminen kliinisessä lääketieteessä on monimutkainen ja monivaiheinen prosessi, johon osallistuu monitieteisten tieteellisten ja kliinisten keskusten ja kansainvälisen yhteisön rakentava yhteistyö. Samalla kiinnitetään erityistä huomiota soluterapian alan tieteelliseen organisaatioon. Tärkeimpiä näistä ovat kliinisten tutkimusten pöytäkirjojen kehittäminen, kliinisten tietojen pätevyyden seuranta, kansallisen tutkimusrekisterin perustaminen, integrointi kansainvälisiin monikeskustutkimuskokeisiin ja tulosten käyttöönotto kliiniseen käytäntöön.

Tekemisestä johdannossa solutransplantaatiossa asioita, haluaisin esittää toiveen, että yhteiset ponnistelut johtavat asiantuntijat Ukrainan eri tieteenaloilta takaa merkittävää edistystä kokeellisissa ja kliinisissä tutkimuksissa ja mahdollistaa tulevina vuosina löytää tehokkaita tapoja auttaa vakavasti sairaita ihmisiä, jotka tarvitsevat elinsiirtoja , kudokset ja solut.

[13], [14], [15], [16], [17], [18]