^

Terveys

Mesenchymal kantasolut

, Lääketieteen toimittaja
Viimeksi tarkistettu: 11.04.2020
Fact-checked
х

Kaikki iLive-sisältö tarkistetaan lääketieteellisesti tai se tarkistetaan tosiasiallisen tarkkuuden varmistamiseksi.

Meillä on tiukat hankintaohjeet ja vain linkki hyvämaineisiin mediasivustoihin, akateemisiin tutkimuslaitoksiin ja mahdollisuuksien mukaan lääketieteellisesti vertaisarvioituihin tutkimuksiin. Huomaa, että suluissa ([1], [2] jne.) Olevat numerot ovat napsautettavia linkkejä näihin tutkimuksiin.

Jos sinusta tuntuu, että jokin sisältö on virheellinen, vanhentunut tai muuten kyseenalainen, valitse se ja paina Ctrl + Enter.

Alueellisten kantasolujen joukossa mesenkymaaliset kantasolut (MSC) omistavat erityisen paikan, jonka johdannaiset muodostavat ihmisen kehon kaikkien elinten ja kudosten stromalmatriisin. Etusija MSC: n tutkimuksessa kuuluu Venäjän biologisen tieteen edustajiin.

Keskellä viime vuosisadan laboratoriossa Friedenstein eristettiin ensin homogeeninen kulttuurin multipotenttien strooman luuytimen kantasoluja. Mesenkymaaliset kantasolut kiinnitetään alustaan pitkään säilytetään korkea proliferaationopeus, ja viljelmiä alhaisella istutustiheyteen jälkeen kiinnitys substraatille muodostettu fibroblastisolu kloonit, joissa ei ole fagosytoosiaktiivisuutta. MSC: t proliferaatiota Lopeta päätökseen niiden spontaania erilaistumista in vitro luusoluiksi, rasva, rusto, lihas tai sidekudosta. Lisätutkimukset paljastivat osteogeeninen potentiaali fibroblastin kaltaisen luuydinperuskudossoluihin eri nisäkäslajien, sekä pesäkkeitä muodostava aktiivisuus. Kokeissa in vivo on osoitettu, että sekä hetero- elimen siirtämisen fibroblastin pesäkkeitä muodostavien solujen on suoritettu muodostamalla luun, ruston, ja kuitu- rasvakudoksen. Koska strooman kantasoluja luuytimen tunnusomaista suuri kapasiteetti itseuudistumiseen ja erilaistumista kontrapunktin samassa solulinjassa, niitä kutsutaan multipotentteja mesenkyymiesiastesolujen.

On huomattava, että mesenkymaalisten kantasolujen perustutkimuksen 45 vuoden aikana on luotu todelliset olosuhteet niiden johdannaisten käyttämiseksi kliinisessä käytännössä.

Nykyään ei ole epäilystäkään siitä, että kaikki ihmiskehon kudokset muodostuvat erilaisten solulinjojen kantasoluista proliferaation, muuttoliikkeen, erilaistumisen ja kypsymisen prosessien seurauksena. Kuitenkin äskettäin uskottiin, että kantasolut aikuisen ruumiissa ovat kudosspesifisiä, eli kykenevät tuottamaan erikoistuneita solulinjoja vain kudoksista, joissa ne sijaitsevat. Tämä käsitteellinen tilanne kumosi hematopoieettisten kantasolujen transformaation tosiasiat paitsi solun ääreisveren soluelementeissä, myös ovalisissa maksasoluissa. Lisäksi neuraaliset kantasolut pystyivät synnyttämään sekä hermosoluja että gliaalisia elementtejä samoin kuin aikaisemmin sitoutuneita hematopoieettisia progenitorisoluja. Toisaalta mesenkymaaliset kantasolut, jotka tavallisesti tuottavat luun, ruston ja rasvakudoksen soluelementtejä, kykenevät muuntamaan hermokudoksen kantasoluiksi. Oletetaan, että kasvun, fysiologisen ja parannetun kudoksen regeneroinnissa syntyy sitoutumattomia progenitorisoluja kudosspesifisistä varren varannoista. Esimerkiksi lihaskudoksen korjaus voidaan toteuttaa mesenkymaalisilla kantasoluilla, jotka siirtyvät luuydestä luurankolihaan.

Vaikka tällaiset rajat vaihdettavuus kantasolujen tunnistaa kaikki tutkijat eivät ole mahdollisuutta kliiniseen käyttöön mesenkymaalisten kantasolujen lähteenä solusiirteelle ja solujen vektorin geneettisen informaation ei ole kiistetty multipotenteista strooman luuytimen kantasoluja, jotka voivat olla suhteellisen helppo eristää ja levittää viljelmässä in vitro. Samalla tieteellisessä kirjallisuudessa toistuu raportteja mahdollisesta pluripotenttien kantasolujen luuydinstrooma. Kuten esitetyt todisteet tutkimus protokollia, jotka vaikutuksen alaisena erityisten indusoijien transdifferentiation MSC muunnetaan hermosoluihin, sydänlihassolut ja hepatosyytit. Kuitenkin jotkut tutkijat mahdollisuus uudelleen aktivoituminen ja geenin ilmentyminen alkupuolella Alkiokehityksen vakavia epäilyksiä. Samaan aikaan jokainen ymmärtää, että jos olosuhteet havaitaan laajentaa multipotentteina mesenkymaalisten kantasolujen pluripotenssin talous- ja sosiaalineuvostojen regeneratiivisen lääketieteen ja muovin automaattisesti ratkaistava monia ongelmia eettisiä, moraalisia, uskonnollisia ja oikeudellisia. Lisäksi, koska tässä tapauksessa kantasolujen lähde uusiutumiskyvyn potilaan ovat autologisia stroomasolujen on ratkaistu ja ongelma immuunihyljinnästä solutransplantaatin. Kuinka todella nämä näkymät ovat, lähitulevaisuus näkyy.

trusted-source[1], [2], [3], [4]

Mesenkymaalisten kantasolujen käyttö lääketieteessä

Klinikalla johdannaisten käyttö mesenkymaalisten kantasolujen liittyy ensisijaisesti vähentämään kudoksen aiheuttamia vikoja laaja ja syvä lämpö iholeesioita. Prekliininen kokeellinen sopivuus arvioidaan allogeenisten fibroblastin tapaisia mesenkymaalisten kantasolujen hoitoon Syvien palovammojen tehtiin. On osoitettu, että fibroblastimainen luuytimen mesenkymaalisia kantasoluja muodostavat yksikerroksisen viljelmän, joka mahdollistaa siirtäisivät ne optimoida elvyttämiseen syvät palovammojen. Kirjoittajat toteavat, että samanlaiset ominaisuudet ovat alkion fibroblastit, mutta kliinistä soveltamista jälkimmäinen rajoittuu nykyisiä eettisiä ja oikeudellisia ongelmia. Wistar-rotilla mallinnettiin syvä lämpöpoltto, joka vahingoitti kaikkia ihon kerroksia. Polttovyöhyke oli 18-20% ihon kokonaispinnasta. Ensimmäisessä kokeellisessa muodostui rotista, syvä lämpövaurio ja transplantaation allogeenisten fibroblasti mesenkymaalisia kantasoluja. Toinen ryhmä koostui eläimistä, joilla oli syvä lämpöpalaminen ja allogeenisten alkion fibroblasteiden istuttaminen. Kolmatta ryhmää edustivat valvonta-rotat, joissa oli syvä lämpöpalovaha, jotka eivät suorittaneet soluterapiaa. Suspensiota, jossa oli fibroblastin mesenkymaalisia kantasoluja ja alkion fibroblastien pantiin Palohaavojen pinta pipetoitiin määränä 2 x 10 4 solua 2. Päivänä sen jälkeen, kun poiston polttaa mallinnus ja nekroottisen rupi muodostettu. Elinsiirron jälkeen, solut polttaa pinta peitetään sideharsolla kastettu isotoninen natriumkloridiliuos gentamisiinin kanssa. Aita luuytimen solut saatiin MSC kanssa myöhemmin induktion fibroblastisolulinjaa mesenkymaalisissa soluissa tuotettu aikuisen Wistar-rotille reisiluista. Empiiriset fibroblastit saatiin keuhkoista, jotka olivat 14-17 päivän ikäisiä alkioita. Alkion fibroblastit ja luuytimen solujen saamiseksi ennalta MSC: eitä viljeltiin petrimaljoille 37 ° C: ssa C02-iikubatore, atmosfäärissä, jossa oli 5% CO 2 95%: n kosteudessa. Alkion fibroblastit viljellään 4-6 päivää, kun taas yksikerroksisen muodostumisen MSC vaaditaan 14-17 päivä. Tämän jälkeen MSC ylläpitää hyvin matalissa lämpötiloissa kuin lähtömateriaalina fibroblastien mesenkymaalisia kantasoluja, jotka valmistettiin sulattamalla ja viljelemällä MSC: eiden 4 päivä. Määrä fibroblasti syntyvän mesenkymaaliset kantasolut on enemmän kuin 3 kertaa enemmän alkion fibroblasteista, jotka aiheutuvat saman viljelyjakson aikana. Solujen tunnistamiseksi in transtslantirovannyh palovammat vaiheessa viljellään niiden genomiin leimattiin käyttäen virus- sukkulavektori, joka perustuu rekombinantti-adenoviruksen V tyyppi kantaja 1aS-2-geenin, joka koodaa beta-galaktosidaasin E. Coli. Elävät solut eri aikoina siirron jälkeen havaitaan immunohistokemiallisesti Jääleikkeitä on lisätty substraatin X-Gal, jolloin tunnusomainen sini-vihreä väri. Seurauksena visuaalisen dynaamisia, planimetric ja histologinen kunnon palovammat, havaittiin, että jopa 3. Päivänä transplantaation jälkeen solujen eristetyissä ryhmät näyttävät merkittäviä eroja haavan paranemista. Erityisesti erilainen, tämä ero tuli seitsemäntenä päivänä solutransplantaation jälkeen. Eläimet ensimmäisen ryhmän, joka siirrettiin fibroblastin tapaisia mesenkymaalisten kantasolujen, haava hankittu tasaisesti ruusuinen voimakas väri, granulaatiokudos kasvoi koko sen alueen tason iho, ja polttaa pinta pienenee huomattavasti. Haavan pinnalle muodostettu kollageenikalvo oli jonkin verran ohennusta, mutta se jatkui kattamaan koko polttovyöhykkeen. Eläimet toisen ryhmän, joka siirrettiin alkion fibroblasteissa, granulaatiokudos nostetaan tasolle orvaskeden haavan reunat, mutta vain joissakin paikoissa, samalla plazmoreya haavasta oli voimakkaampi kuin ryhmässä 1, ja aluksi muodostunut kollageeni kalvo käytännöllisesti katsoen katosi. Eläimillä, jotka eivät saaneet kantasoluhoito, 7. Päivänä palovammahaavalle oli kalpea, kuoppainen, nekroottista kudosta, päällystetty fibriinin. Plasmorrhea havaittiin koko polttopinnalla. Histologisesti eläimet 1. Ja 2. Ryhmät osoittivat laskua solujen infiltraatiota ja verisuoniston kehittyminen, näitä merkkejä alkavasta regeneraattorin prosessi on vakavampia Ryhmän 1 rotat. Kontrolliryhmässä oli merkkejä solujen haavan tunkeutumisen histologinen kuvio uudissuonien poissa. 15-30 päivänä havainnoinnin eläinten 1. Ryhmä polttaa pinta-ala oli merkittävästi pienempi kuin rotilla, muiden ryhmien ja rakeistus- pinta oli kehittynyt. Kun eläimet 2. Ryhmä polttaa pinta-ala on myös laski verrattuna koon palovammojen kontrolliryhmän rottien johtui marginaalinen epitelisaatiota. Kontrolliryhmän polttaa pinta sivustoilta säilyi vaalean granulaattien harvinainen, esiintyy siihen suonikohjuja, saarekkeet fibrinous plakin edelleen kohtalainen plazmoreya poikki polttaa pinnan, mikä on vaikea irrotettava rupi säilyi. Yleensä kolmannen ryhmän eläimet heikensivät myös haavan kokoa, mutta haavojen reunat pysyivät alhaalla.

Siten, aikana vertaileva tutkimus haavojen nopeuksiin käyttäen fibroblastien mesenkymaalisia kantasoluja ja sikiön fibroblasteja, ja ilman soluterapia merkitty kiihtyvyys paranemisen polttaa pinnan seurauksena transplantaation fibroblasti mesenkymaalisia kantasoluja ja alkion fibroblasteissa. Kuitenkin tapauksessa, jossa käytetään allogeenisten mesenkymaalisten kantasolujen fibroblastin haavan paranemista oli korkeampi kuin transplantaation alkion fibroblasteissa. Tämä ilmenee kiihtyvän muutoksen uudistamisen vaiheissa - vähentää solujen infiltraatiota aikana, lisää nopeutta leviämisen verisuoniston, sekä granulaatiokudoksen muodostumista.

Dynaamisen planimetrian tulokset osoittavat, että polttovauhan spontaani paraneminen (ilman soluterapiaa) oli pienin. 15. Ja 30. Päivän jälkeen elinsiirron allogeenisten mesenkyymikantasoluista fibroblasti- haavan paranemista oli yli elinsiirtoketjussa alkion fibroblasteissa. Histokemiallista menetelmä havaitsemiseksi beeta-galaktosidaasin osoittivat, että transplantaation jälkeen fibroblastin tapaisia mesenkymaaliset kantasolut ja alkion fibroblastit koko ajan havainto pinnalla ja syvä uudistamiseksi haavat siirretyt solut on eläviä. Kirjoittajat ehdottavat, että korkeampi palovammojen elvyttämiseen käyttämällä mesenkymaalisia kantasoluja fibroplasti- ilmastoitu vapautumisen näiden solujen kypsymisen aikana rostostimuliruyushih bioaktiivisten tekijöiden.

Transplantation autologista tai allogeenista keratinosyyttien ja allogeeninen fibroblastien hoitoon palovammojen ja käyttää klinikalla. On huomattava, että kirurginen hoito lasten laaja syvä palovammoja on monimutkainen tehtävä, koska suuri moninaisuus trauma ja kirurgisia toimenpiteitä, merkittäviä verenhukka, erilaisista reaktioista käytetään infuusio mediaa. Suurimmat vaikeudet täytäntöönpanossa ihon ja plastiikkakirurgia laaja syvä palovammoja, alue on yli 40% kehon pinta-alasta, vakavuuden vuoksi hänen tilansa ja resurssien puute luovuttajan ihoa. Käyttö mesh siirteiden on suuri rei'itys suhde ei ratkaise ongelmaa, koska kuvan jälkeen epiteliziruyutsya solu rei'itys on hyvin hidas, ja usein ihosiirteet hajotetaan tai kuiva. Tällaiset päällysteet palovammat kuten ksenokozha, kuolleelta allograftit, synteettinen kalvo pinnoitteet eivät aina ole riittävän tehokkaita, joten uusien menetelmien sulkemisen polttaa pintakerrosten viljeltyjen keratinosyyttien ja fibroblastien. Erityisesti menetelmä sulkeminen polttaa pinnoista käyttäen viljeltyjä allofibroblastov antaa elinsiirron aikana lausutaan stimuloiva vaikutus proliferaatioon epidermotsitov säilynyt haavan rajan palovammoja, ja keratinosyyttien siirteet mesh rainoja. Vuonna Budkevich L. Et ai (2000) esittää tuloksia tätä menetelmää varten palovammojen hoidossa lapsilla. 31 lasta, joiden lämpö trauma oli 1-14-vuotiaita, havaittiin. Kolme lasta ala palovammat IIIA-B - IV aste oli 40%, 25 - 50-70%, jopa kolme - 71-85% kehon pinta-alasta. Varhainen kirurginen necrectomy yhdistettynä transplantaation viljeltyjen allofibroblastov ja autodermaplasty. Ensimmäisessä vaiheessa suoritettiin käsittelylämpötilan nekroottista kudosta leikkaamalla, toinen - on transplantaatio viljeltiin allofibroblastov kantokalvo, kolmas (48 tuntia transplantaation jälkeen viljeltyjen allofibroblastov) - poistaminen matriisin ja ihon läpät kanssa autodermoplastiakirurgiat rei'itys suhde on 1: 4. Kolme potilasta sairaalaan on vaikea polttaa sairaus, viljellyt allofibroblasty siirrettiin päälle granuloinnin haavoja. Transplantation Viljeltyjen allofibroblastov suoritetaan kerran 18 lasta, kahdesti - 11 kolme - kaksi potilasta. Alueen haavan pinnan, suljettavissa soluviljelmässä vaihteli 30-3500 cm2. Tehoa viljeltyjen allofibroblastov arvioi kokonaisprosenttiosuus juurtumista ihon läpät, paranemisen aikaa palovammoja ja kuolemantapauksia vaikean lämpövaurioilta. Transplantaattien liittäminen oli täydellistä 86%: lla potilaista. Ihojen läpäisien osittainen ulkonäkö havaittiin 14 prosentissa tapauksista. Huolimatta jatkuvaan hoitoon kuusi (19,3%) lapsia kuoli. Kokonaispinta-ala iholeesiot ovat vaihdelleet 40-70% kehon pinta-alasta. Transplantation Viljeltyjen allofibroblastov ollut suhteessa kuolemaan palovammoja yhdelle potilaalle.

Tulosten analysoinnin Hoidon Kirjoittajat toteavat, että edellinen palovammoja sovellu elämään, hoitoon syvä lämpö ihovaurion alueen 35-40% kehon pinta-alasta (pikkulapsille - jopa 3 vuotta - ovat kriittisiä syviä palovammoja jonka pinta-ala on 30%, vanhemmille lapsille ikä - yli 40% kehon pinnasta). Kun kirurginen siirtäminen viljeltyjen necrectomy allofibroblastov autodermaplasty ja myöhemmät ihosiirretekniikoita suurilla palovammoja, rei'itys tekijä III B - IV asteen edelleen kriittisesti, mutta tällä hetkellä on mahdollisuuksia monissa tapauksissa pelastaa jopa sellaisia uhreja. Kirurginen necrectomy yhdessä elinsiirron viljeltyjen allofibroblastov ja autodermaplasty lapsilla syvä palovammoja osoittautui erityisen tehokkaaksi potilailla, joiden vaurioita ihon alijäämä luovuttajan sivustoja. Aktiiviset kirurgiset taktiikka ja istuttamisen viljeltiin allofibroblastov edistää nopeaa vakauttaminen yleiskunnon tällaisten potilaiden määrän vähentäminen tarttuvan komplikaatioita polttaa sairauden, luoda suotuisat olosuhteet engraftmentissa, vähentää aikaa palauttaa kadonnut ihon ja kesto sairaalahoitoon, vähentämiseen kuolemista potilailla, joilla on laaja palovammoja. Siten, transplantaatio viljeltiin allofibroblastov jälkeen autodermaplasty ihon läpät saavuttaa talteenotto lapsilla, joilla on vakavia palovammoja, joka pidettiin aiemmin tuomittu.

On laajalti tunnustettu, että polttotaudin ensisijainen tavoite on maksimoida vaurioituneen ihon täydellinen ja nopea elpyminen, jotta estetään syntyvät myrkylliset vaikutukset, tarttuvien komplikaatioiden ja ruumiin dehydraation. Viljeltyjen solujen soveltamisen tulokset riippuvat pitkälti itse poltettavan haavan siirtämisestä. Tapauksissa, joissa transplantaatio viljeltyjen keratinosyyttien haavan pintaan sen jälkeen, kun kirurginen necrectomy prizhivlyaetsya keskimäärin 55% (pinta-alan) siirrettyjen solujen, kun taas rakeistamalla haavojen juurtumista alennetaan 15%: iin. Siksi laajojen syvien ihon palovammojen onnistunut hoito vaatii ensinnäkin aktiivisia kirurgisia taktiikoita. Palovamman läsnä ollessa IIIB-IV-asteessa palamispinta vapautuu välittömästi nekroottisista kudoksista päihtymisvaikutusten vähentämiseksi ja poltevyyden komplikaatioiden määrän vähentämiseksi. Tällaisten taktiikka on avain vähentää aikaa siitä lähtien, kun palava haavan sulkemiseen ja oleskelun kesto potilailla, joilla on laaja palovammoja sairaalassa, mutta myös vähentää merkittävästi kuolleiden määrä.

Ensimmäiset raportit viljeltyjen keratinosyyttien onnistuneesta käytöstä polttopinnan kattamiseksi ilmestyivät viimeisen vuosisadan alkupuolella. Tämän jälkeen tämä manipulointi suoritettiin viljeltyjen keratinosyyttien kerrosten avulla, jotka saatiin useimmiten autocellsista, paljon harvemmin allokeratinosyytteistä. Autokeratinosytoplastin tekniikka ei kuitenkaan mahdollista solupankin luomista, kun taas keratinosyyttien riittävän siirteen tuottamiseksi tarvittava aika on suuri ja se on 3-4 viikkoa. Tänä ajanjaksona polttotaudin tarttuvien ja muiden komplikaatioiden riski kasvaa voimakkaasti, mikä merkittävästi pidentää sairaalahoidon kokonaispituutta. Lisäksi autokeratinosyytit eivät käytännössä eloon, kun ne siirretään granuloivaan polttovauhaan, ja erityisten kasvuaineiden ja biologisesti aktiivisten keratinosyyttien kasvun stimulaattorien korkeat kustannukset rajoittavat merkittävästi niiden kliinistä käyttöä. Muut bioteknologiset menetelmät, kuten kollageeniputki, kryoproteiineja sisältävien xenoidien siirto ja erilaisten biopolymeeripinnoitteiden käyttö lisäävät laajapinnan, mutta ei syvien palovammojen tehokkuutta. Menetelmä haavan pinnan pinnoittamiseksi viljeltyjen fibroblastien kanssa on olennaisesti erilainen sillä, että viljellyn solualueen pääkomponentti ei ole keratinosyyttejä vaan fibroblasteja.

Edellytyksenä kehittämiseen menetelmän toimi näyttöä siitä perisyyttien jotka ympäröivät pienet alukset ovat pro genitornymi mesenkyymisolut pystyy muuttamaan fibroblasteiksi, jotka tuottavat monet kasvutekijät ja tarjota haavan paranemista vahvan stimuloiva vaikutus leviämisen ja tarttuvuutta keratinosyyttien. Käyttäen viljeltyjä fibroblastit sulkemiseksi haavan pinnoille välittömästi havaittu useita merkittäviä etuja tämän menetelmän käyttöön nähden viljeltyjen keratinosyyttien. Erityisesti, valmistettaessa fibroblastien viljely ei vaadi erityisiä elatusaineita ja kasvunedistäjiä, mikä vähentää kustannuksia siirteen yli 10 kertaa hankintakustannukset keratinosyyttien. Fibroblastit ovat helposti altistetaan nuorennuksen jonka aikana ne osittain menettää pinta-histokompatibiliteettiantigeenit, mikä puolestaan tekee mahdolliseksi käyttää valmistukseen allogeenisten siirteiden solujen ja luoda pankit. Lyhentää saavat siirrännäisen, käyttövalmiina klinikalla, 3 viikosta (keratinosyyttien) 1-2 päivää (fibroblastien). Primaariviljelmissä fibroblastien voidaan saada viljelemällä soluja ihon fragmentit otettu autodermoplastiakirurgiat ja solunistutusta tiheys saatuaan alaviljelmistä ihmisen fibroblastien on vain 20 x 10 3 kohti 1 cm 2.

Vaikutuksen tutkimiseksi fibroblastien ja niiden säätelyproteiinit leviämisen ja keratinosyyttien erilaistumisen, vertailevan analyysin ominaisuudet ja morfologia keratinosyyttien proliferaation substraateille kollageenin tyyppien I ja III ja fibronektiinin rinnakkaisviljelemällä ihmisen fibroblasteissa. Ihmisen keratinosyyttejä eristettiin sellaisten potilaiden ihon fragmentteista, joilla oli autodermoplastin käytön aikana palovammoja. Keratinosyyttien tiheys oli 50 x 103 solua / cm2. Viljeltyjen fibroblastien transplantaation kliinistä tehokkuutta arvioitiin 517 potilaalla. Kaikki potilaat jaettiin kahteen ryhmään: 1. Aikuiset, joilla on palovammoja IIA, B - IV astetta; Toinen - lapset, joilla on syvä palovammoja IIIB - IV astetta. Arviointi dynamiikkaa rakenteellisia ja toiminnallisia järjestämisestä yksikerrosviljelmä fibroblastien suhteen roolin regenerointiprosessi glykosaminoglykaanien, fibronektiinin, kollageenin, ja annettiin kirjoittajat määrittää kolmantena päivänä kaikkein edullisin ehdoin käyttäen fibroblastiviljelmät tuotantoon elinsiirtojen. Tutkimus vaikutuksesta fibroblastien proliferaatiota ja keratinosyyttien erilaistumisen osoitti, että in vitro-fibroblasteissa on selvä stimuloiva vaikutus, lähinnä keratinosyyttiadheesioaste prosesseja, lisäämällä Tarttuvien solujen lukumäärä ja määrä vahvistaa enemmän kuin 2 kertaa. Stimulaatio adheesioprosesseja liittyy lisääntynyt intensiteetti DNA-synteesin ja taso keratinosyyttien proliferaatiota. Lisäksi havaittiin, että fibroblastien ja soluväliaineen muodostettu niistä on edellytys muodostumisen tonofibrillyarnogo laite keratinosyyttien solujen väliset yhteydet ja viime kädessä keratinosyyttien erilaistumista ja tyvikalvon muodostumisen. Hoidossa lasten syviä palovammoja vakiintunut kliininen teho Elinsiirron allofibroblastov kulttuurin, erityisesti potilailla, joilla on laajoja vaurioita ihon luovuttajan sivustoja alijäämäinen. Monimutkainen morfofunktcionalnoe tutkimus osoitti, että siirteen tunnettu siitä, fibroblastit aktiivinen DNA-synteesin, sekä kollageeni, fibronektiini ja glykosaminoglykaanit, joka syntyy solujen soluväliaineen. Kirjoittajat ehdottavat, että suuri osa juurtumista siirrettyjen fibroblasteissa (96%), voimakas lasku mitattuna niiden valmistamiseksi (kuluessa 2-3 tunnin sijasta 24-48 viikkoa tapauksessa keratinosyytit), selvästi nopeampi epitelisoitumisen polttaa pinnan, ja vähentää merkittävästi hinta (10 kertaa) tekniikasta kasvattaa oksastetta fibroblasteista verrattuna keratinosyyttien siirtoon. Käyttö siirtoistutusten viljeltyjen allofibroblastov mahdollistaa pelastaa lasten kriittinen palovammoja - lämpövaurioilta yli 50% kehon pinta-alasta, joka aiemmin on luultu ristiriidassa elämän. On huomionarvoista, että allogeeninen transplantaatio alkion fibroblastien myös vakuuttavasti osoittautunut paitsi nopeampaa uudistumista haavojen ja toipilasaika, joilla oli erilaisia asteen palovamma ja alue, mutta myös vähentää huomattavasti kuolleisuutta.

Autologisia fibroblasteja käytetään niin monimutkainen ja plastiikkakirurgia korvaajana korjauksen vahinkoa äänihuulet. Tavallisesti käytetään tähän tarkoitukseen naudan kollageeni, vaikutuksen kesto, jota rajoittaa sen immunogeenisyyttä. On vieras proteiini, naudan kollageeni, kollagenaasi herkkä vastaanottajalle ja voi aiheuttaa immuunijärjestelmän reaktioita, vähentämiseksi, joka tekniikka kollageenin valmisteita on kehitetty, silloitettu glutaraldehydillä. Niiden etuna on suurempi vakaus ja alemman immunogeenisyyden, mikä on havaittu käytännön soveltamista poistaminen vikoja ja äänihuulten surkastumista. Autologisen kollageenin injektioita käytettiin ensin vuonna 1995. Menetelmien säilyttäminen kantavan rakenteen autologisen kollageenisäikeiden, kuten entsymaattisesti katalysoidun molekyylinsisäisen ristisiltoja. Se seikka, että kollageenin kuidut ovat vastustuskykyisempiä proteaasien kuin rekonstruoitu kollageenin telopeptidien jossa leikkaus. Eheys telopeptidien tärkeää kvaternäärinen rakenne kollageenisäikeiden ja ristisidoksia vierekkäisten kollageenimolekyylien. Toisin kuin valmisteet, naudan kollageeni, autologisia kollageeni ei aiheuta immuunivasteita vastaanottaja, mutta se ei ole riittävän tehokas, koska täyttää aineena. Jatkuva korjaus voidaan saavuttaa, koska paikallisen tuotannon autologinen transplantaatio kollageenin fibroblasteissa. Tutkimus kuitenkin tehokkuuden siirtoistutusten autologisia fibroblasteja klinikalla paljasti joitakin ongelmia. Alussa aikana transplantaation jälkeen fibroblastien kliininen vaikutus oli heikompi verrattuna siihen, antamisen jälkeen naudan kollageeni. Kun niitä viljellään autologisia fibroblasteja ei voida sulkea pois mahdollisuutta muutosta normaalien fibroblastien epänormaalia, ns myofibroblasteissa vastaa fibroosin kehittymisen ja arpia, osoituksena väheneminen kollageeni geeli, koska spesifinen vuorovaikutus fibroblastien ja kollageenin fibrillejä. Edelleen, sen jälkeen kun sarja fibroblastien siirros- in vitro menettävät kyky syntetisoida soluväliaineen proteiineja.

Kuitenkin tällä hetkellä koemenetelmän täydelliseksi viljely ihmisen autologisia fibroblasteja, joka poistaa edellä mainitut epäkohdat ja johtaa kasvaimia muutosta normaalien fibroblastien. Tämän menetelmän avulla saatuja autologisia fibroblasteja käytetään kasvojen pehmytkudosten puutteiden täyttämiseen. H. Kellerin ja muiden kirjoittajien (2000) tutkimuksessa 20 potilasta, jotka saivat 37-61 vuotta ryppyjä ja atrofisia arpia vastaan, sai hoitoa. Ihokoepaloissa (4 mm) BTE alue me kuljetetaan laboratorioon steriileihin putkiin, jotka sisälsivät 10 ml kasvualustaa (Dulbecco antibiootti mikoseptikom, pyruvaatti ja naudan sikiön seerumia). Materiaali sijoitettiin 3-5 viljelyastiaan, joiden läpimitta oli 60 mm, ja inkuboitiin termostaatissa atmosfäärissä, joka sisälsi 5% C02: ta. Yhden viikon kuluttua solut poistettiin astioista trypsiinisoimalla ja asetettiin 25 cm2: n injektiopulloihin. Solut annetaan potilaille määrässä 4 x 107. Merkittävä ja pitkäaikainen vaikutus havaittiin potilailla, joilla korjaus nasolabial taittuu, ja potilailla, joilla on arvet jälkeen 7 ja 12 kuukausi sen jälkeen, kun kolmas transplantaation autologisen fibroblasteissa. Virtaussytometrian mukaan viljellyt fibroblastit tuottivat suuren määrän tyypin I kollageenia. In vitro -tutkimuksissa esitetään injektoitavien fibroblasteiden normaali supistuvuus. Kahden kuukauden kuluttua viljeltyjen fibroblastien ihonalaisesta annoksesta 4 x 107 solun annoksella ei havaittu nude-hiiriä. Injektoitavat fibroblastit eivät aiheuttaneet heikkojen muodostumista ja diffuusi fibroosia potilailla. Tekijän mukaan implantoidut autologiset fibroblastit pystyvät tuottamaan jatkuvasti kollageenia, mikä antaa kosmeettista nuorentavaikutusta. Tässä tapauksessa, koska eriytettyjen solujen käyttöikä on rajoitettu, nuoresta potilasta otetut fibroblastit ovat tehokkaampia kuin vanhuksilla. Tulevaisuudessa nuoren luovuttajan ottama fibroblastikulttuurin kylmäsäilytysnopeus oletetaan myöhemmin siirtävän vanhalle potilaalle omia nuoria solujaan. Lopuksi se ei ole aivan oikein katsoa, että autologiset fibroblastit, jos niiden toiminnallinen turvallisuus ovat ihanteellisia korjaamiseksi kasvojen pehmytkudoksen vikoja. Samalla kirjoittaja itse toteaa, että tutkimusprosessissa syntyi myös joitain ongelmallisia tilanteita, jotka liittyivät autologisen fibroblasti-kollageenijärjestelmän käyttöön. Kliininen vaikutus oli usein heikompi kuin naudan kollageenin käyttö, mikä aiheutti pettymyksen potilaille.

Yleensä kirjallisuustiedot mesenkymaalisten kantasolujen kliinisen käytön mahdollisuuksista näyttävät melko optimistisilta. Yritetään hyödyntää autologisia luuytimen multipotentteja mesenkyymiesiastesolujen hoitoon rappeuttavia sairauksia nivelet. Ensimmäiset kliiniset tutkimukset viljeltyjen mesenkymaalisten progenitorisolujen hoidosta luun kompleksisten murtumien hoidossa suoritetaan. Autologisten ja allogeenisten mesenkymaalisten stroomasolujen luuytimen soluja käytetään tuottamaan rustokudoksen transplantaation korjauksen nivelruston vikojen johtua traumasta tai autoimmuuni vaurioita. Harjoiteltu menetelmiä kliinisen soveltamisen multipotenttien mesenkyymiesiastesolujen korjaamaan luuston epämuodostumia lapsilla Vaikeaa osteogenesis edistymisen aiheuttaa mutaatio tyypin I kollageenin geenissä. Jälkeen mieloabelyatsii lasten vastaanottajat siirrännäisenä luuydintä HLA-yhteensopiva terveestä luovuttajasta kuin fraktioimaton luuytimen voi sisältää riittävän määrän mesenkymaalisten kantasolujen täydentää vaikea luun vika. Elinsiirron jälkeen, allogeeninen luuydin tällaiset lapset ovat olleet myönteisiä histologisia muutoksia hohkaluun, nousu kasvu ja väheneminen luunmurtumien. Joissain tapauksissa positiivinen kliininen tulos saavutetaan siirtämällä läheisesti toisiinsa liittyneitä allogeenisia luuytimiä ja osteoblasteja. Hoitoon synnynnäisten luun hauraus johtuu epätasapaino osteoblastien ja osteoklastien luukudoksen, ja käytetty MSC elinsiirtoja. Luunmuodostuksen palauttaminen tässä tapauksessa saavutetaan johtuen potilaan luukudoksessa olevan kanto- ja progenitorstromasolujen kimeerisoinnista.

Luovuttavien mesenkymaalisten kantasolujen geneettisen modifikaatiomenetelmiä parannetaan stromaalikudosten geneettisten virheiden korjaamiseksi. Oletetaan, että mesenkyymiesiastesolujen pian käytetään neurologian suunnattuun kimerisaatiota aivosoluja ja luoda allas terveiden solujen, joka pystyy tuottamaan puutteellinen entsyymin tai tekijä vastaa kliinisiä oireita sairauden. Transplantaatio mesenkymaalisia kantasoluja voidaan käyttää palauttamaan luuydinstrooma syöpäpotilailla sädehoidon jälkeen ja kemoterapian ja yhdessä luuytimen soluja - palauttamisessa hematopoieesin. Kehittäminen korvaushoidon tavoitteena on poistaa viat ja liikuntaelinten järjestelmän avulla MSC edistää Engineering suunnittelussa matriisissa biomateriaalien tai biomimics muodostavien luurankoja elävät jälkeläiset mesenkymaalisten kantasolujen.

Mesenkymaalisten kantasolujen lähteet

Päälähde mesenkymaalisten kantasolujen luuytimen Veren kantasolut joka nisäkkäillä jatkuvasti erilaistuvat verisolut ja immuunijärjestelmän, kun taas mesenkymaaliset kantasolut esitti pieniä populaatioita fibroblastin kaltaisen luuydinperuskudossoluihin ja auttaa säilyttämään erilaistumattomasta tilan Veren kantasolut. Tietyissä olosuhteissa, mesenkymaaliset kantasolut erilaistuvat soluihin ruston ja luun. Kun levitettiin viljelyalustassa pienitiheyksinen istutus mononukleaariset luuydinperuskudossoluihin muodostaa pesäkkeitä tarttuvien solujen, jotka itse asiassa ovat fibroblasti multipotentteja mesenkymaalisten esiastesolujen. Jotkut tutkijat ovat ehdottaneet, että luuytimen talletettu sitomatta mesenkymaalisia kantasoluja, jotka, kiitos kyky itseuudistua ja korkea erilaistumispotentiaalin saada kaikkia niitä elimistön kudoksissa edeltäjien mesenkymaalisten stromasoluja koko elämän nisäkäseliön.

Luuytimessä stromaaliset soluelementit muodostavat verkon, joka täyttää sinusoidien ja luukudoksen välisen tilan. Aikuisen luuytimen lepäävän MSC: n sisältö on verrattavissa hematopoieettisten kantasolujen lukumäärään ja ei ylitä 0,01-0,001%. Meshchymal-kantasolut, jotka on eristetty luuydimestä ja joita ei ole kohdistettu viljelyyn, puuttuvat liimamolekyyleistä. Tällaiset MSC: t eivät ilmentä CD34: n, ICAM: n, VCAM: n, tyypin I ja III kollageenin, CD44: n ja CD29: n. Näin ollen, in vitro mesenkymaalisten kantasolujen ei ole kiinnitetty kasvualusta, ja kehittyneempiä kantaisä mesenkymaalisia kantasoluja, ovat muodostaneet solun tukirangan komponentteja ja reseptorin laite soluadheesion molekyylejä. Stromalisolut, joilla on fenotyyppi CD34, löytyvät myös perifeerisessä veressä, vaikka ne ovat paljon vähemmän luuytimessä kuin CD34-positiiviset mononukleaariset solut. Verestä eristetyt ja siirrettyyn CD34-solut kiinnittyvät substraattiin ja muodostavat fibroblastin kaltaisten solujen pesäkkeitä.

Tiedetään, että alkioasteen aikana strooman perusteella kaikkien elinten ja kudosten nisäkkäiden ja ihmisten syntyy yhteinen uima mesenkymaalisten kantasolujen ennen ja vaiheessa organogeneesin. Siksi uskotaan, että kypsässä kehossa useimpien mesenkymaalisten kantasolujen tulisi olla sidekudossa ja luukudoksessa. On osoitettu, että suurin osa irtonaisen sidekudoksen ja luukudoksen stromaasin soluelementeistä esitetään edenneillä progenitorisoluilla, jotka kuitenkin säilyttävät kyvyn kerääntyä ja muodostaa klooneja in vitro. Kun tällaiset solut viedään kokonaisverenkiertoon, yli 20% mesenkymaaleista esisolusoluista implantoidaan hematopoieettisen kudoksen ja parenchymaalisten elinten stromaalisten elementtien joukkoon.

Mahdollinen lähde mesenkymaalisten kantasolujen on rasvakudoksessa, joista on sitoutunut havaitut kantasolut vaihtelevalla adiposyyttien progenitoreja. Vähintään kypsä kantaisä osia rasvakudoksen - strooman verisuonten solujen, joka on sama kuin multipotenteista mesenkymaalisten kantasolujen luuytimestä erilaistumaan adiposyyteiksi vaikutuksen alaisena glukokortikoidien, insuliinin kaltainen kasvutekijä ja insuliini. Kulttuurissa strooman verisuonten solujen erilaistumaan adiposyyteiksi ja kondrosyyteiksi ja rasvakudoksen luuytimestä peräisin olevat solut ovat muodostavat adiposyyttien ja osteoblastien.

Lihaksissa havaittiin myös stromaalisia varren lähteitä. Primääriviljelmässä soluja eristettiin ihmisen luurankolihaksessa, paljastaa tähden muotoisia soluja ja monitumaisiksi lihasputkiksi. Läsnä ollessa hevosen seerumia Langerhansin solut lisääntyvät in vitro ilman merkkejä erilaistumaan ja lisäyksen jälkeen deksametasonin viljelyalustaan erilaistumisen on ominaista ulkonäön soluelementit solujen fenotyypin luuston ja sileän lihaksen, luun, ruston, ja rasvakudoksessa. Näin ollen sekä sitoutuneita että sitoutumattomia multipotentteja mesenkymaalisia progenitorisoluja esiintyy ihmisen lihaskudoksessa. On osoitettu, että populaatio progenitorisolujen läsnä luurankolihasten tulee sitomatta multipotenteista luuytimen mesenkyymiesiastesolujen, ja se eroaa myogeenisen satelliitti solujen.

Sydänlihaksen vastasyntyneiden rottien myös havaittu, liima liposyyttien, sopiva erilaistumisen potentiaalin multipotenttien mesenkyymiesiastesolujen, kuten vaikutuksen alaisena deksametasonin ne erilaistumaan adiposyyteiksi, osteoblastit, kondrosyytit, sileät lihassolut, lihasputkia luurankolihasten ja sydämen lihassolujen. On osoitettu, että verisuonten sileät lihassolut (perisyyteissä) on johdettu multipotenteista erilaistumaton perivaskulaarisen mesenkymaalisten esiastesolujen. Kulttuurin perivaskulaaristen mesenkymaalisten kantasolujen ilmentävät-sileän lihaksen aktiinin ja verihiutaleperäisen kasvutekijän reseptorin ja kykenevät erottamaan vähintään sileitä lihassoluja.

Erityinen paikka suhteen varren varausten kestää rusto, hyvin alhainen korjaava potentiaali, jonka uskotaan johtuvan puutos multipotenttien mesenkyymiesiastesolujen tai erilaistumiseen ja kasvutekijöitä. Oletetaan, että prekommitirovannye on hondro- ja osteogenesis multipotentteja mesenkyymiesiastesolujen syöttää rustokudokseen muista kudoslähteistä.

Myös kudoksen alkuperää ja ehtoja mesenkymaalisten esiasteiden soluille jänteissä ei ole osoitettu. Ekspermentalnye havainnot viittaavat siihen, että varhain syntymän jälkeiseen kanin akillesjänteen primaariviljelmiin ensimmäisen kanavan ja säilyttää ilmentymisen kollageenin tyypin I ja dekoriinin, mutta kun jatkoviljelyn ne menettävät tenotsitov erilaistumisen markkereita.

On huomattava, että vastaus kysymykseen, onko todellakin paikallinen eri kudoksissa multipotenttien mesenkyymiesiastesolujen ovat aina läsnä niiden strooman, tai kudoksen allas mesenkymaalisten kantasolujen kompensoidaan migraatio strooman luuytimen kantasoluja, se odotetaan edelleen.

Aikuisen organismin luuytimen ja muiden mesenkymaalisten kudosvyöhykkeiden lisäksi yksi MSC: n lähde voi olla johto-veri. On osoitettu, että napanuoran verisuoninäytteitä sisältää soluja, joilla on samankaltaisia morfologisia ja antigeenisten ominaisuuksien kanssa multipotenteista mesenkyymiesiastesolujen pystyvät tarttuvuus, eikä huonompi multipotenteista mesenkyymiesiastesolujen peräisin luuytimestä eriyttämällä potentiaalia. Viljelmissä mesenkymaalisten kantasolujen napanuoraveren havaittu 5-10% sitomatta multipotenteista mesenkymaalisia progenitoreja. Kävi ilmi, että niiden määrä on napanuoraverestä on kääntäen verrannollinen Raskauden kestoon, mikä on epäsuora todiste muuttoa multipotenttien mesenkyymiesiastesolujen erilaisiin kudoksiin aikana sikiön kehitykseen. Oli ensimmäinen tietoa kliinisistä soveltamisesta mesenkymaalisten kantasolujen eristetty napanuoran verestä sekä alkiosta peräisin biomateriaali, joka perustuu tunnettuun kykyyn sikiön kantasolujen integroida ja toiminta prizhivlyatsya elinten ja kudosten järjestelmiin aikuisten vastaanottajia.

Etsi uusia mesenkymaalisten kantasolujen lähteitä

Alkion alkuperää olevien mesenkymaalisten kantasolujen käyttö, kuten muut sikiön solut, luo joukon eettisiä, oikeudellisia, oikeudellisia ja lainsäädännöllisiä ongelmia. Siksi etsimistä extraembryonista solun luovuttajamateriaalista jatkuu. Yritys ei onnistunut kliinistä käyttöä ihmisen ihon fibroblasteista, se määritettiin paitsi suuri taloudellinen kapasiteetti tekniikkaa, mutta myös nopea erilaistumista fibrosyyttejä fibroblastien ottaa huomattavasti vähemmän mahdollista ydinaseiden leviämistä ja tuotetaan rajoitettu määrä kasvutekijöitä. Edistyttävä alan biologian ja MSC ovat multipotentteja mesenkymaalisten luuytimen kantasoluja vastaan annetaan kehittyä strategia kliinisen käytön autologisten mesenkymaalisia kantasoluja. Eristymisen, viljelyn, eksivoivan lisääntymisen ja kohdennetun erilaistumisen tekniikka edellytti ensinnäkin MSC: n molekyylimerkkispektrin tutkimista. Heidän analyysinsä osoittivat, että ihmisen luukudoksen primääriviljelmissä on monenlaisia multipotentteja mesenkymaalisia progenitorisoluja. Proosteoblastov fenotyyppi löytyy merkkiainetta ilmentävät solut STRO-1 strooman progenitorisolujen, mutta eivät kanna markkeri osteoblastien - alkalisella fosfataasilla. Sellaisille soluille on tunnusomaista alhainen kyky muodostaa mineraalinen luu-matriisi samoin kuin osteopontinin ja lisäkilpirauhashormonireseptorin ekspression puuttuminen. STRO-1-positiivisten solujen johdannaiset, jotka eivät ilmentä alkalista fosfataasia, edustavat välituotteita ja täysin erilaistuneita osteoblasteja. Todettiin, että soluelementtien kloonatun riviä STRO-1-positiivisten solujen ihmisen trabekulaarisen luun pystyvät erilaistumaan kypsiksi osteosyyteiksi ja adiposyyttien. Suuntaan näiden solujen erilaistumisen riippuu altistuksen monityydyttymättömien rasvahappojen, proinflammatoristen sytokiinien - IL-1b ja kasvaimen alfan (TNF-a), samoin kuin anti-inflammatorisia ja immunosuppressiivisia TGF-b.

Myöhemmin havaittiin, että multipotentteja mesenkymaaliset esiastesolut ole spesifisiä vain ne luonnostaan fenotyyppiä, mutta ilmaista monimutkaisia markkereita, ominaisia mesenkymaalisten, endoteeli-, epiteeli- ja lihassolujen ilmentymisen puuttumisen hematopoieettisten solujen immunofenotyyppisiä antigeenien - CD45, CD34 ja CD14. Lisäksi, mesenkymaaliset kantasolut ja konstitutiivisesti indusoitavasti tuottaa hematopoieettisten ja ei-hematopoieettiset kasvutekijät, interleukiinit, ja kemokiinit, ja multipotentteja mesenkymaalisten esiastesolujen ilmaistuna reseptoreita joidenkin kasvutekijöiden ja sytokiinien. Keskuudessa stroomasolujen perusteet ihmiskehon löytynyt dormantnye tai levossa solujen immunofenotyyppiä, lähes sama antigeeninen profiili raaka 5-fluorourasiilin multipotentteja mesenkyymiesiastesolujen - nämä ja muut solut ilmentävät CD117, merkintä "aikuinen" kantasoluja.

Näin ollen mesenkymaalisten kantasolujen yksilöllistä solumarkkia ei ole vielä määritetty. Oletetaan, että lepotilassa olevissa soluissa ovat sitomattomia populaatioita multipotenttien mesenkymaalisten esiastesolujen, koska ne eivät ilmennä solun markkereita sitoutunut nivelrikko (Cbfa-1) tai adipogeneesin (PPAR-y-2). Pitkäaikainen altistuminen lepää hitaasti lisääntyvät solut vasikan sikiön seerumilla tuloksena muodostuu terminaalisesti erilaistuneita sitoutunut esiasteita, joille on ominaista nopea kasvu. Tällaisten kantojen mesenkymaalisten solujen klonaalista kasvua tukee FGF2. Vaikuttaa siltä, että genomiperäinen stroomasolujen kantasolut "suljettu" riittävän tiukka on raportoitu siitä, ettei spontaanin erilaistumisen MSC -. Ilman erityiset edellytykset sitomiselle, vaikka niitä ei ole muunnettu mesenkyymistä sarja.

Tutkia väestön rakenne mesenkymaalisia kantasoluja etsitään differentiaatiomarkkeri proteiinien peruskudoksen solulinjat ja primaarisissa viljelmissä. Kloonatuissa -pesäkemääritys Luuytimen soluja in vitro havaittu, että kun se alistetaan primaariviljelmissä EGF nostaa keskimääräistä pesäkkeiden koko ja vähentää klonaalinen alkalisen fosfataasin ekspressoimista, kun taas lisäämällä hydrokortisonia aktivoi alkalisen fosfataasin ekspressoimista, joka on merkkiaine luuta muodostavan erilaistumisen MSC suunta. Monoklonaalisia vasta-aineita vastaan STRO-1 oli mahdollista erottaa ja tutkimus populaatiot STRO-1-positiivisten tarttuvien solujen heterogeeninen järjestelmä Dexter viljelmiä. Spektri sytokiinien säädellä ei ainoastaan lisääntymistä ja erilaistumista hematopoieettisten ja imusoluja, mutta myös osallistua muodostumista, muodostumisen ja resorption luuston kudoksen para-, auto- ja hormonaaliset mekanismeja. -Reseptorivälitteisen vapautumisen toisiolähettien, kuten cAMP: n, diasyyliglyserolin, inositolitrifosfaatin, ja Ca2 + käytetään myös markkerin analyysiin eri stroomasolujen kudosten solujen kyseessä olevia reseptoreita ekspressoivaan. Käyttämällä monoklonaalisia vasta-aineita markkereita voivat perustaa strooman imukudoselimiin kuuluvat retikulaarisia solujen T- ja B-riippuvainen alueilla.

Jo jonkin aikaa tieteelliset kiistat jatkoivat kysymystä MSC: n alkuperän mahdollisuudesta hematopoieettisesta kantasolusta. Todellakin, kun explantation suspensio luuytimen solujen yksikerrosviljelmässä jossa erillisiä pesäkkeitä kasvaa fibroblasteissa. Kuitenkin, se on osoitettu, että kun läsnä on esiasteiden fibroblastien pesäkkeistä ja eri bakteereita erilaistumista hematopoieettisten kudosten osana luuytimen ei ole todiste niiden yhteinen alkuperä hematopoieettisten kantasolujen. Käyttäen erotteluanalyysi luuytimen kantasolujen havaittu, että mikroympäristö on heterotooppisen transplantaation, hematopoieettiset solut luuytimen siirretään, mikä osoittaa, että on olemassa, luuytimessä riippumaton histogenetic MSC populaation hematopoieettisten solujen.

Lisäksi, valikoiva kloonaus menetelmä paljasti yksikerroksisiin luuydinperuskudossoluihin uuden luokan esiastesolujen määrittää niiden määrä, tutkimaan niiden ominaisuuksia, proliferatiivisten ja erilaistumisen potentiaalin. Havaittiin, että in vitro fibroblastin tapaisia strooman solut lisääntyvät ja muodostavat diploideja pesäkkeitä, että kun käänteinen siirrettäväksi elin varmistaa uusien verisuonten muodostusta muodostavien elinten. Tutkimustulokset yksittäisten kloonien osoittavat, että on solujen populaatio uudiskasvuvaste ja erilaistumispotentiaalin voi vaatia roolin kantasoluista strooman kudoksen Gistogeneticheskaja riippumaton Veren kantasolut strooman progenitorisolujen. Tämän väestön soluille on tunnusomaista itsekantava kasvu ja erilaistuminen luun, ruston ja verkkokalvon luuytimen kudoksen esiasteisiin soluihin.

Suurta kiinnostusta ovat tutkimusten tulokset Chailakhyan R. Et ai (1997-2001), joka viljeltiin luuytimestä peräisin stroomasolujen progenitorisolujen kanit, marsut, ja hiiriä, a-MEM-elatusaineessa, jota on täydennetty vasikan sikiön seerumia. Kirjoittajat tekivät eksplantaation alkuperäisen tiheyden ollessa 2-4 x 103 luuydinsolua / cm2. Käytettynä syöttölaite homologinen tai heterologinen inaktivoitu säteilyttämällä luuytimen solujen annoksesta syöttölaite Kiinnipitotoiminto, mutta täysin tukossa proliferaatiota. Fibrroblastien kahden viikon primääriset diskreetit pesäkkeet trypsinisoitiin monoklonaalisten kantojen tuottamiseksi. Todisteita kloonialkuperää pesäkettä saatiin käyttäen kromosomimarkkereita sekoitettu luuytimen viljelmistä miesten ja naisten marsut, aikaväli ammunta elävinä viljelminä, sekä sekoitettu luuytimen viljelmistä syngeenisten hiirien ja CBA SVAT6T6. Transplantation lietteen juuri eristetty luuytimen soluja kasvatetaan in vitro tai strooman fibroblastit munuaiskotelon alle tehtiin ivalonovyh huokoinen tukirunkoja tai gelatiini, sekä inaktivoidun kani hohkaluun matriisi. Transplant kloonit luuhun kansi reisien marsu puhdistettu pehmytkudoksen ja luukalvon, leikkaa epiphysis ja pestään huolellisesti niiden luuytimessä. Luu leikattiin fragmentteihin (3-5 mm), kuivattiin ja säteilytettiin annoksella 60 Gy. Luullisissa peitteissä sijoitettiin yksittäiset fibroblasti-pesäkkeet ja implantoitiin lihaksensisäisesti. Vatsaontelon sisäisen transplantaation strooman fibroblastit, kasvattaa in vitro, käytimme tyypit A diffuusiokammion (V = 0015 cm 3, h = 0, l mm) ja D (V = 0,15 cm 3, h = 2 mm).

Tutkittaessa dynamiikkaa kasvun Klonaalisten kannoista Chailakhyan R. Ym (2001) havaitsi, että yksittäiset solut, pesäkkeitä muodostavien fibroblastit sekä heidän jälkeläisensä ovat suuria proliferaatiopotentiaalin. Kymmenennessä vaiheessa tiettyjen kantojen fibroblasteiden määrä oli 1,2-7,2 x 10 9 solua. Kehittyessään ne suorittivat jopa 31-34 solukkojärjestelmää. Näin heterotooppista transplantaatio luuytimestä peräisin olevien kantojen muodostaman strooman esiasteita useita kymmeniä klooneja johti siirto luuytimen mikroympäristön ja koulutuksen uutta aluetta hematopoieettisten elinsiirto. Kirjoittajat esiin kysymyksen, onko yksittäisiä klooneja sietävät luuytimen mikroympäristön stromasoluja tai se edellyttää yhteistyötä useiden eri -klonogeenistä strooman kantaisä? Ja jos yksittäiset kloonit pystyy siirtämään mikroympäristön, onko se on täynnä kaikki kolme alkio verta tai eri kloonia tarjoavat muodostumista hematopoieettista mikroympä- eri bakteereita? Näiden ongelmien ratkaisemiseksi on kehitetty tekniikka viljelyn strooman kantasolujen kollageenigeelissä että voit kuvata pinnasta fibroblastien kasvaneita viljelmiä myöhempää heterotooppi- siirroista. Yksittäisten kloonien strooman fibroblastit, luuytimen solut kasvatettiin CBA ja marsut, leikataan yhdessä fragmentin geelipinnoitteen ja siirrettyjen heterotooppista - munuaiskotelon alle syngeenisten hiirten tai autologisten lihaksen marsuja. Kun siirryttiin lihakseen, geeliä olevat pesäkkeet asetettiin luullisiin peittoihin.

Olemme havainneet, että 50-90 päivää transplantaation jälkeen luuytimen fibroblasti- pesäke 20% tapauksista havaittiin transplantaation alueella kehitys luun tai luun ja hematopoieettisten kudosten. 5% saajaeläinten muodostettu taskuja luun, jossa on ontelo on täytetty luuytimen. Sisällä luun sylinterit kuten pesäkkeitä on pyöristetty muoto ja kapselin rakennettu luukudoksen kanssa osteosyytit ja hyvin kehittynyt osteoblastisissa kerros. Luuydintila sisältää verkkomaisen kudoksen myelooisen ja erytroidisoluissa, osuudet, jotka eivät poikkea normaalin luuytimen. Munuainen siirre oli tyypillinen medullaarinen muodostama natiivi luuydinsiirron, jossa luu kapseli kattaa vain medullaariontelon päässä munuaiskapselin. Hematopoieettisen kudoksen mukana myelooinen, megakaryosyyttistä ja erythroid elementtejä. Stroomaosan medullaarinen kanava oli sivuonteloiden hyvin kehittynyt ja sisälsi tyypillisen rasvasolujen järjestelmään. Samalla alueella transplantaation noin pesäkkeiden luun ilman merkkejä hematopoieesin todettiin munuaiskotelon alle. Tutkimus proliferatiivisten ja erilaistumisen teho yksittäistä kloonia jatkettiin monoklonaalinen kanin luuytimen kantoja, solut suspendoidaan uudelleen elatusaineeseen ja erillisessä ivalonovoy sieni, joiden paino 1-2 mg työntää munuaiskotelon alle kanin luuytimen luovuttajan. Tällainen autotransplantaatio altistettiin 21 monoklonaalisten kantojen soluille. Tulokset otettiin huomioon 2-3 kuukautta. Kirjoittajat havaitsivat, että 14% siirretyn luuytimen monoklonaalinen kannat on muodostettu elin, joka koostuu luun ja luuytimen joka on täytetty hematopoieettiset solut. 33%: ssa tapauksista siirrettyjen kantojen muodostettu kompakti luu erikokoisia onteloita ostootsitami muurattu sisään osteoblastiset ja kehittyneissä kerros. Joissakin tapauksissa, sienet istutetut kloonit kehitetty satakerta ilman luuta tai hematopoieettisten solujen. Joskus verkkomainen strooman muodostusta, jossa on hyvin kehittynyt verkosto siniaaltojen, mutta ei asutuilla hematopoieettiset solut. Näin ollen saadut tulokset olivat samankaltaisia kuin ne, jotka saatiin transplantaatio kloonien kollageenigeelin. Kuitenkin, jos kloonit transplantaation alustalle kasvatetun johti muodostumista luuytimen kudos on 5% luun - 15% ja verkkomainen kudos - 80%: ssa tapauksista, elinsiirron monoklonaalinen kannat muodostumista luuytimen soluissa havaittiin 14%: ssa tapauksista luun - 53% ja reticular - 53% tapauksista. Kirjoittajien mukaan, tämä osoittaa, että edellytykset toteuttamista proliferatiivisten ja erilaistumisen potentiaalin peruskudoksen fibroblastien kun transplantoitu huokoiseen tukirunkoja olivat optimaalisia kuin niiden elinsiirtoja luu- ja kattaa kollageenin alustaan. Ei ole poissuljettua, että käyttö kehittyneempiä viljelymenetelmiä ja elinsiirtojen kloonien palaute voi parantaa edellytyksiä täytäntöönpanon sen klooneja erilaistumista mahdollisuuksia ja muuttaa näitä suhteita. Tavalla tai toisella, mutta tärkein arvo Tutkimuksen on se, että jotkut kloonit stromasoluja kykenee muodostamaan luukudoksen varmistaen stroomakasvainten hematopoieettista mikroympäristölle heti kolmen versot luuytimen verta: erytroidiset, myeloideja megakaryosyyttisen luoden riittävän suuri jalansijat hematopoieettisten kudosten ja jotain luumassaa.

Lisäksi tekijät ratkaisivat ongelman, joka koskee kykyä tällaisten solujen erilaistumiseen yksittäisten kloonaalisten stromal-progenitorisolujen suhteen suljetun diffuusiokammiojärjestelmän olosuhteissa. Lisäksi, se oli välttämätöntä määrittää, onko yksittäisten kloonien pluripotenttien näytteille tai näyttö erottaa mahdolliset edellyttää operatiivinen vuorovaikutus, useiden kloonien kanssa kiinteä merkki erilaistumaan eri suhde, joka määrittää ensisijaisen luun, ruston tai verkkomainen. Yhdistämällä kaksi menetelmää koskevan lähestymistavan - monoklonaalinen eristää luuytimen stroomasolujen progenitorisolujen ja transplant heidät diffuusiokammiot, Chailakhyan R. Et ai (2001) Saadut tulokset, jotka annetaan lähestyä ymmärrystä rakenteellisen organisaation luuydinstroomalla. Transplantation monoklonaalinen kannat stroomasolujen kantasolujen O-tyypin solujen johti muodostumista sekä luun ja ruston kudoksen, osoittaa kykyä jälkeläisten yhtä pesäkettä muodostavaa stroomasolujen muodostamalla samanaikaisesti luun ja ruston. Oletus, että luu- ja rustokudos on peräisin yhteisestä stromaalisesta esisolusta, on toistuvasti ilmaistu toistuvasti. Tässä hypoteesissa ei kuitenkaan ollut oikeaa kokeellista vahvistusta. Luun ja ruston muodostuksen diffuusiokammioihin oli tarpeen olemassaolon osoittamiseksi kantasolujen ovat luuytimen stroomasolujen esiastesolujen yhteinen näiden kahden kudoksen.

Sitten 29 klonaalinen kantoja toinen ja kolmas kanava, primäärisiä viljelmiä, jotka ovat peräisin luuytimen kanin asetettiin diffuusiokammioihin ja intraperitoneaalisesti homologisten eläinten. Tutkimukset ovat osoittaneet, että 45% luuytimestä monoklonaalisilla kannoilla on osteogeenisiä voimia. Poikkeuksellisesti retikulaarinen kudos sisälsi 9 kammiota, mutta yhdessä luun ja rustokudoksen kanssa se oli läsnä 13 kammiossa, joiden osuus oli 76% kaikista kannoista. O-tyypin kammioissa, joissa sekä luu- että rustokudos oli mahdollista erilaistua, tutkittiin 16 kappaletta. Neljässä kammiossa (25%) muodostui sekä luu- että rustokudos. On jälleen huomattava, että tutkimukset Chailakhyan R. Et ai (2001) yksittäisten progenitorisolujen tehtiin solukantaa, joka koostuu 31-34 kaksinkertaistumista, ja niiden jälkeläisiä oli 0,9-2,0 x 10 9 solua. Niiden mitojen lukumäärä, joihin polyklonaalisten kantojen esiastesolut olivat alttiina, oli käytännössä sama kuin monoklonaalisten kantojen solut. Samanaikaisesti polyklonaalisten kantojen kehitystaso, erityisesti niiden ensimmäisessä vaiheessa, riippui suuressa määrin kantojen aloittamiseen käytettyjen pesäkkeiden määrälle. Diploidisista ihmisen alkion fibroblasteissa (WI-38) 12-15 reklonirovanii th kaksinkertaistaa tasoilla myös muodostivat pesäkkeitä halkaisijaltaan erilaisten ja niiden sisällön soluja. Suuret pesäkkeet, joissa oli yli 103 solua, olivat vain 5-10%. Suurten pesäkkeiden prosenttiosuus väheni divisioonien määrän kasvaessa. Mono- ja polyklonaalisten luuydinperuskudos- fibroblastikantoja säilytetään diploidi kromosomi asetettu jälkeen 20 tai enemmän kahdentumista, ja taipumus kehitys oli verrattavissa dynamiikkaa Diploidisista alkion fibroblasteissa. Analyysi erilaistumisen potentiaalin erityisiä luuytimen stroomasolujen progenitorisolujen suoritettiin transplantaatio monoklonaalinen kantojen diffuusiokammioihin, osoitti, että puoli niistä osteogeenisen. Suurten pesäkkeiden osuus oli 10% niiden kokonaismäärästä. Näin ollen osteogeenisten pesäkkeitä muodostavien solujen määrä vastasi noin 5% niiden kokonaispopulaatiosta. Tekijöiden tunnistama osteogeenisten progenitorisolujen kokonaismassa oli soluja, jotka kykenivät muodostamaan luuta ja rustokudosta samanaikaisesti. Ensimmäistä kertaa se havaittu, että näiden kahden kudosten aikuisen organismi on yhteinen esiaste solu: 25% testatuista klooneista luonut samanlaisia soluja, ja niiden numerot väestössä progenitorisolujen ei ollut pienempi kuin 2,5%.

Näin ollen luuytimen fibroblastien yksittäisten kloonien heterotyyppinen transplantaatio on avannut uusia mesenkymaalisten progenitorisolujen rakenteellisen organisoinnin näkökohtia. Löydetty strooman progenitorisolut, joka pystyy siirtämään tietyn mikroympäristön välittömästi kaikkien hematopoieettisten kantasolujen, jotka numero joukossa tutkittiin kloonien suurempi eri malleja on 5-15% (0,5-1,5% kokonaismäärästä progenitorisolujen havaittu). Yhdessä klooneja siirtäen täydellinen luuytimen mikroympäristön olemassa progenitorisolujen deterministinen vain luun muodostumista, jotka muodostavat kun ne siirretään avoin järjestelmä, luun, joka ei tue kehitystä hematopoieesin. Niiden lukumäärä esisolujen kokonaismäärästä on 1,5-3%. Jotkut näistä soluista voivat muodostaa luukudoksen rajoitetulla itsehuoltotoimenpiteellä. Näin ollen stromaalisten progenitorisolujen populaatio on heterogeeninen erilaistumispotentiaalissaan. Niiden joukossa on solujen luokka, väittää rooli strooman kantasolujen, jotka kykenevät erilaistumaan kaikissa kolmessa ulottuvuudessa olennaisesti luuydinperuskudos- kudos, joka muodostaa luun, ruston ja verkkomainen kudos. Nämä tiedot mahdollistavat toivoa siitä, että avulla eri solumarkkereiden on mahdollista määrittää osuus kunkin stroomasolujen mikroympäristössä kunkin organisaation ja tukea hematopoieesia Dexter kulttuureissa.

Mesenkymaalisten kantasolujen ominaisuudet

Viime vuosina, se todettiin, että paikallaan luuytimen viljelmistä mesenkymaalisten multipotentteja progenitorisolujen esitetty kanta on rajallinen pieniä agranulaarisen solujen (RS-1-solut), tunnettu siitä, että alhainen kolonisaatiokyky ja puuttuessa Ki-67-antigeenin ekspression spesifinen lisääntyviä soluja. Antigeeninen parametrit dormantnyh RS-1-solut ovat eri spektristä sitoutunut antigeenien nopeasti lisääntyviä stroomasolujen progenitorisolujen. Havaittiin, että korkea proliferaation esisolujen havaittiin vain, kun läsnä on RS-1-soluissa. Vuorostaan, RS-1-soluissa lisää kasvuvauhti vaikutuksen alaisena erittämät tekijät kypsä peräisin multipotentteja mesenkyymiesiastesolujen. Näyttää siltä, että RS-1-solut ovat osajoukko sitomatta MSC kykenee kierrätys. In vitro resistenttejä 5-fluorourasiilin stroomasolujen esisolujen luuytimen tunnusomaista matala RNA pitoisuus ja ilmentymisen korkeita tasoja ornitiinidekarboksylaasin geenin - markkeri ei-lisääntyviin soluihin.

Intensiivinen jalostus strooman progenitorisolujen alkaa jälkeen kiinnityksen alustaan. Kun tämä ilmaistaan merkki profiilia huonosti erilaistuneita soluja: SH2 (TGF-reseptori (3), SH3 (domain signalointi proteiini), kollageenityyppeihin I ja III, fibronektiini, adheesioreseptorin VCAM-1 (CD106) ja ICAM (CD54), kadheriinin-11 , CD44, CD71 (transferriinireseptori), CD90, CD120a ja CD124, mutta ilman ilmentymistä ominaisuuden markkereiden hematopoieettisten kantasolujen (CD34, CD14, CD45). Klonaaliset kasvu mahdollistaa toistuvasti siirrostettiin mesenkymaalisia kantasoluja tuottamaan kulttuurin monet geneettisesti homogeeninen strooman kantaisä pluripotenttien soluja. Cerea 2-3 kulkua niiden määrä saavuttaa 50-300 miljoonaa. Kun viljelmän riittävä tiheys lopettamisen jälkeen proliferaation strooman progenitorisolujen, toisin kuin hematopoieettisen kudoksen fibroblastien erilaistumaan adiposyyteiksi, myosyytit, rustosolujen, ja luukudosta. Yhdistelmä kolme erilaistumista säätelevät signaalit joka käsittää 1-metyyli-izobutilksantin (indusoija solunsisäisen cAMP: n muodostumisen), deksametasonin (estäjä fosfolipaasi A ja C) ja indometasiinia (syklo-oksigenaasin estäjä, tromboksaani alentavaa aktiivisuutta ja) kääntyy adiposyyttien ja 95% mesenkyymiesiastesolujen. Adiposyyttien muodostumisen epäkypsiä stroomasolujen vahvisti ilmentyminen lipoproteiinilipaasia geenin, histokemiallinen tunnistaminen apolipoproteiinien ja peroxysomal reseptoreihin. Solut saman kloonin vaikuttaa TGF-b seerumittomassa väliaineessa luo homogeenisen populaation kondrosyyttien. Tämän rustokudoksen monikerroksisesta soluviljelmästä on tunnusomaista kehittynyt solunsisäinen matriisi, joka koostuu proteoglykaanista ja tyypin II kollageenista. Ravintoalusta, jossa oli 10% naudan sikiön seerumia vaikutus erilaistumisen signaalien kompleksi, joka koostuu b-glyserofosfaatti (lahjoittaja epäorgaaninen fosfaatti), askorbiinihappo ja deksametasoni, samassa viljely strooman progenitorisolujen progenitorisolujen johtaa muodostumista solun aggregaatteja. Tällaisissa soluissa, on asteittainen kasvu aktiivisuus alkalisen fosfataasin ja osteopontiinin tasoja, mikä osoittaa luun mineralisaation jotka solut vahvisti progressiivinen kasvu solunsisäisen kalsiumin.

Joidenkin, kyky mesenkymaalisten kantasolujen jakaa loputtomiin ja lisääntymiselle erilaisten mesenkymaalisten linjan solujen yhdistettynä korkean plastisuus. Kun ne annetaan kammiot, tai valkean aineen mesenkymaalisten kantasolujen kulkeutumaan parenkyymiin hermokudoksen ja erilaistuvat hermosolujen tai gliaperäinen solulinja. Lisäksi on tietoa MSC transdifferentiation hematopoieettisissa kantasoluissa sekä in vitro, ja in vivo. Vielä perusteellisen analyysin joissakin tutkimuksissa määritettiin poikkeuksellisen korkea venyvyys MSC, joka ilmenee niiden kyky erilaistua astrosyytit, neuroneista, sydänlihassolujen sileitä lihassoluja ja poikkijuovaisten lihassolujen. Useissa tutkimuksissa transdifferentsirovochnogo mahdollisia MSC: iden in vitro ja in vivo havaittu, että multipotentteja mesenkymaaliset esiastesolut peräisin luuytimestä terminaalisesti erilaistumaan solulinjoja, jotka muodostavat luuta, rustoa, lihas, hermo ja rasvakudoksessa, sekä jänteet ja strooman, joka tukee hematopoieesia .

Kuitenkin, muissa tutkimuksissa ei ole havaittu merkkejä rajoituksia pluripotenttisuuden genomin mesenkymaalisten kantasolujen ja ei voitu havaita stroomasolujen progenitorisolupopulaatioita, mutta voi varmistaa pluripotenttien stroomasolujen tutkittiin yli 200 MSC: klooneista, jotka eristettiin primäärisestä viljelmästä. Valtaosa in vitro kloonien tallella kyky erilaistua osteogeenisen, kondrogeenisiksi ja adipogeenisiksi suuntiin. Kun ilman todennäköisyys migraation vastaanottajan solujen transplantaation mesenkymaalisten kantasolujen munuaiskotelon alle tai diffuusiokammioihin näytti siltä, että strooman esisolujen in situ säilyttää heterogeenisen fenotyyppi, joka osoittaa joko ilman vyöhykkeen siirteen rajoitus tekijät tai puuttuminen pluripotenttien MSC yksin. Samalla sallitaan olemassaoloa harvinainen somaattisten pluripotenttien kantasolujen, jotka ovat yhteisiä esiasteita aikuisen kantasoluja.

Moni-, mutta ei ole totta pluripotentteja mesenkymaalisia kantasoluja muodostavat hyvin pienen osan luuydinsolujen ja ovat sellaisia, että tietyissä olosuhteissa, kun niitä viljellään in vitro lisääntymään joutumatta erilaistumista, mistä on osoituksena niiden indusoiman linjan sitoutuminen solujen luu-, rusto-, rasva, lihaskudoksen ja tenotsity ja peruskudoselementeistä jotka tukevat hematopoieesia. Tyypillisesti jatkuva altistus elatusaineessa naudan sikiön seerumilla provosoi ulostulo MSC stroomasoluissa ja esisolujen, jälkeläiset, joka läpikäy spontaanin lopullinen erilaistuminen. In vitro voidaan saavuttaa suuntaava osteoblastien muodostumista lisäämällä väliaineeseen ilmastointi deksametasoni, ß-glyserofosfaatti ja askorbiinihappoa, kun taas yhdistelmä erilaistumisen signaalit deksametasonia ja insuliinia indusoi muodostumista adiposyyttien.

Todettu, että ennen vaiheessa terminaalista erilaistumista luuytimen MSC luoda tiettyjen viljelyolosuhteet aluksi erilaistua fibroblastin tapaisia mesenkymaalisia kantasoluja. Näiden johdannaisia soluihin in vivo ovat mukana luun, ruston, jänteen, rasvaa ja lihaskudosta sekä strooman tukea hematopoieesia. Monet kirjoittajat ymmärtävät termin "multipotenteista mesenkyymiesiastesolujen" tosiasiallisesti MSC, ja sitoutunut strooman progenitorisolujen ja luuytimen mesenkymaalisten kudosten. Klonaalinen analyysi mesenkymaalisten multipotenttien esisolujen peräisin luuytimestä osoitti, että hieman yli kolmasosa klooneista eriytetty osteo-, hondro- ja adiposyyttien, kun taas muita klooneja, jotka solut ovat osteogeeninen potentiaali ja muoto vain hondro- ja osteosyyttien. Tämä klooni multipotenttien mesenkymaalisten esiastesolujen kuin kierukan 9, sopivissa olosuhteissa mikroympäristön erilaistuneet soluihin fenotyyppiä ja toiminnalliset ominaisuudet paitsi osteoblastien, kondrosyyttien ja adic potsitov mutta stroomasolut, jotka tukevat hematopoieesia. Eristetty rotan sikiön luuytimen solujen kloonaamiseksi RCJ3.1 erilaistuneet mesenkymaaliset solut eri fenotyyppejä. Yhdistetyllä vaikutuksella askorbiinihapon, b-glyserofosfaatti, ja deksametasonin soluelementtien Tämän kloonin muodostetaan ensin monitumaisia myosyyttien ja sitten peräkkäin, adiposyyttien, kondrosyyttien ja saarekkeet mineralisoituneeseen luuhun. Väestön granulaarisolujen periostista rotan sikiöiden vastaa sitomatta multipotentteja mesenkyymiesiastesolujen, kuten tunnettu alhainen leviämisen, ei ilmentävät merkkiaineita, erilaistumisen, ja eriytetty viljelyolosuhteissa muodostamiseksi hondro-, osteo- ja adiposyyttien ja sileät lihassolut.

Siten, se olisi tunnustettava, että kysymys plyuri- tai multipotenttisuus genomin mesenkymaalisten kantasolujen on edelleen auki, mikä näin ollen vaikuttaa esitys erilaistumisen potentiaalin strooman progenitorisolujen, joka on myös asennettu kokonaan.

Kokeellisesti todistettu ja tärkeä ominaisuus mesenkymaalisten kantasolujen on niiden kyky lähteä kudokseen kapealla ja kiertävät verenkierrossa. Aktivoida geneettinen ohjelma eriyttäminen näiden kiertävien kantasolujen täytyy saada sopivaan mikroympäristön. On osoitettu, että kun annetaan systeemisesti verenkiertoon MSC saajaeläinten kehittymätön istutettujen solujen eri elimissä ja kudoksissa, sitten erilaistuvat verisolujen adiposyytit, kondrosyytit ja fibroblastit. Tästä seuraa, että kudoksen paikallisen alueilla esiintyy signaali-sääntelyyn vuorovaikutus sitoutuneita ja sitoutumattomia strooman esisolujen, sekä niiden ja ympäröivän kypsien solujen. Oletetaan, että erilaistumisen induktio suoritetaan parakriinisestä säätelevät tekijät, mesenkymaaliset ja nemezenhimalnogo (kasvutekijät, eikosanoidien soluväliaineen molekyylit), jotka tarjoavat ajallisen ja suhteet mikroympäristössä multipotentti mesenkymaalisten esisolujen. Näin ollen, paikallinen vaurio, mesenkymaalista kudosta pitäisi johtaa muodostumiseen mikroympäristön vyöhykkeiden multipotentteja mesenkymaalisten esiastesolujen eroa laadullisesti monimutkainen säätelysignaalit ehjänä kudoksille, joissa fysiologisissa prosesseissa esiintyy sijasta korjaavan palautuminen. Tämä ero on ratkaiseva rooli asiantuntemuksen solufenotyypissä normaalissa ja aiheutti vahinkoa mikroympäristön.

Ideojen mukaan on olemassa kaksi tunnettua prosessia, fysiologista uudistumista ja tulehduksellista leviämistä, olennaisen eron mekanismit. Ensimmäinen niistä päättyy erikoistuneen solukkoveksikoostumuksen ja sen toiminnan palautumiseen, kun taas proliferaatioprosessin tulos on kypsän sidekudoselementin muodostuminen ja vaurioituneen kudosvyöhykkeen toiminnan häviäminen. Siten kehittää optimaalisia sovellusohjelmat multipotenteista mesenkyymiesiastesolujen regeneratiivisen lääketieteen ja muovin vaatii huolellisen tutkimuksen omituisuuksia mikroympäristön vaikuttavien tekijöiden erilaistumiseen MSC.

Kantasolujen osaston rakenteen riippuvuus solu- ja autokriinisten säätimien kohdalla, joiden ilmaisua moduloivat ulkoiset signaalit, kukaan ei epäile. Sääntelyn tekijöiden joukossa tärkeimpiä ovat MSC: n epäsymmetrisen jaon ja geenien ilmentyminen, jotka määrittävät komennon vaiheet ja solualueiden määrän. Ulkoiset signaalit, joihin MSC: n jatkokehitys riippuu, saadaan niiden mikroympäristöstä. Kasvuvaiheessa MSC lisääntyä riittävän pitkään, samalla kun säilytetään kyky erilaistumaan adiposyyteiksi linja, myofibroblasteissa hematogeeninen strooman kudos, rusto soluja, ja luun. On havaittu, että kanta on rajallinen verenkierrossa SB34-negatiivinen stroomasolujen elementtejä verenkierrosta palautetaan luuydinstroomalla kudos, muuntuu linja, jossa CD34-positiiviset hematopoieettiset kantasolut. Nämä havainnot viittaavat siihen, että kierrätyksen esisolujen mesenkymaalisten solujen verenkiertoon kudosta tukee tasapaino strooman kantasolujen eri elimissä ottamalla käyttöön yhteinen uima-allas epäkypsien luuydinperuskudossoluihin. Erilaistumista MSC: t soluihin, joissa on useita mesenkymaalisten fenotyyppejä ja niiden osallistumista korjaamiseksi tai uudistamiseksi luun, ruston, jänteiden ja rasvakudoksessa in vivo osoittaa adoptiivisen siirron mallit koe-eläimillä. Mukaan muut tekijät, kaukainen migraatio MSC verisuoniston on yhdistetty paikallisen siirtyminen tai korotkodistantnym multipotentteja mesenkymaalisten esiastesolujen sisällä kudoksen korjaamiseen ruston, lihaksen uudistumista ja muita pelkistysreaktioita.

Paikallinen varannot varsi stroomakasvainten kudos säätiöt osansa lähde solujen fysiologisen kudoksen uusiutumista prosesseja ja täydennetään kaukaiset liikenteen MSC kuin menojen stroomakasvainten kudosta varren resursseja. Kuitenkin, tarvitsevat hätätilanteessa liikkeelle solun korjaavan kapasiteetin, kuten useita trauma, korjattavassa prosesseissa palautuminen osallistuu MSC koko junan, ja kehän kautta verenkiertoon palvelukseen mesenkymaaliset esiastesolut luuytimen.

Mesenkymaalisten kantasolujen transplantaatio

Kudosten fysiologisen regeneroinnin prosesseja ja niiden muodostumista välillä on tiettyjä verensokereita intrauterin kehityksen aikana. Sikiönkehityksen ihmisten ja nisäkkäiden, muodostumista eri erikoistuneiden solujen peräisin Ecto, meso endodermaalisissa sukusolujen kerroksia allas, mutta pakollista osallistumista mesenchyme. Löysä matkapuhelinverkko sikiön mesenkymaalisten kudosten suorittaa lukuisten säätelevien, metabolinen, luuston ja morfogeneettisen toimintoja. Kirjanmerkki väliaikaisluonteinen elinten suoritetaan vasta sen jälkeen, kun tiivistyvä mesenkyymin kasvun kustannuksella klonogeenisten progenitorisolujen, jotka tuottavat ensisijainen morfogeneettinen signaaleja organogeneesin. Stroomaperäisen alkion mesenkyymi luoda telineen väliaikaisluonteinen elimet ja muodostaa perustan tulevaisuuden energoplasticheskogo varmistaa kasvun vuoksi ensisijaisen verisuonten ja imusuonten. Toisin sanoen sikiön elinten mikrokruunun yksikön stromaaliset elementit esiintyvät ennen rakenteellisten funktionaalisten yksiköiden muodostumista. Lisäksi, aktiivinen migraatio mesenkymaalisten solujen organogeneesin aikana tarjoaa avaruudellinen suuntautuminen kehittyville elimille johtuen merkintä niiden rajat tilavuuden rajoittaminen homeotic Hox-tepov. Stromal-telineessä on myös parenkymaattisten elinten rakenteelliset ja toiminnalliset yksiköt, jotka usein sisältävät morfogeneettisesti ja toiminnallisesti täysin erilaisia soluja. Näin ollen alkionkehityksen mesenkyymissä ovat ensisijainen funktio ja toteutetaan muodostamalla säätelevät signaalit aktivoivat alue- esiastesolujen lisääntymistä ja erilaistumista epiteelisoluihin. Alkion mesenkyymin solut tuottavat kasvutekijöitä, kuten jalat, HGF-b, CSF, joille on olemassa vastaavat reseptorit peruskudostilassa progenitorisoluihin. Kypsä eriytetty kudoksissa aikuisen organismin stroomasolujen mediassa myös synnyttää signaalit säilyttää elinkelpoisuus ja lisääntyminen progenitorisolujen nemezenhimalnogo alkuperää. Kuitenkin spektri strooman säätelysignaalit syntymän jälkeisessä ontogenesis muut (SCF, HGF, IL-6, IL-1, IL-8, IL-11, IL-12, IL-14, IL-15, GM-CSF: n, flt-3, LIF jne.), Ja se on tarkoitettu fysiologisen regeneroinnin tai vahingoittuneiden kudosvyöhykkeiden korjaamiseen. Lisäksi stromalisäätelijöiden spektriominaisuudet kussakin kudoksessa ja jopa samassa elimessä ovat erilaiset. Erityisesti, hematopoieesin ja lymfopoieesin kertolaskun ja erilaistumista hematopoieettisten ja immunokompetenttien solujen esiintyy vain tiettyjen elinten, jonka sisällä toimii strooman mikroympäristön tarjoamalla edellytykset kypsymisen hematopoieettisten ja imusoluissa. On jopa säätelytekijöistä mikroympäristölle riippuu kyvystä hematopoieettisten ja imusoluissa kiinnittyä uudelleen kehon lisääntymään ja kypsyvät sen mikrorakenteen markkinaraon.

Komponenttien joukossa soluväliaineen, joka tuottaa multipotentteja mesenkymaalisten esiastesolujen, on huomattava, fibronektiini, laminiini, kollageeni ja proteoglykaanien, sekä CD44 (hyaluronaani ja osteopontiinin reseptori), joka vastaanottaa suurimman osan organisaatiossa solujen välisistä vuorovaikutuksen ja muodostumista soluväliaineen luuytimessä ja luun . On osoitettu, että luuytimen mesenkymaaliset, multipotentteja solujen luoda redshestvenniki strooman mikroympäristön, joka tarjoaa induktiivinen ja säätelysignaalit ei vain MSC, mutta myös hematopoieettiset prekursorit ja nemezenhimalnye luuytimen kantasoluja. On tunnettua, että MSC: itä liittyä veren mitataan niiden kyky erilaistua stroomasoluihin, jotka tukevat hematopoieesia, jolloin aktiivinen ohjaus MSK-signaali saadaan suoraan hematopoieettisia kantasoluja. Siksi verkko- strooman progenitorisolujen on perusta ruokintaan kaikkien kloonien hematopoieettisten solujen.

Kypsillä organismi intensiteetti hemodialyysin ja lymfopoieesin tilassa dynaamisen tasapainon kanssa "menot" kypsien verisolujen ja immuunijärjestelmän solujen periferiassa. Koska luuydinperuskudossoluihin ja imukudoselimistä päivitetään harvoin, merkittäviä uudelleenjärjestelyjä strooman rakenteita ei esiinny niitä. Tuo järjestelmä dynaamisen tasapainon on mahdollista avulla mekaanisen vaurion mitään elimiä HEMO tai lymfopoieesin, joka johtaa samantyyppistä peräkkäisiä muutoksia, jotka vaikuttavat ei ainoastaan eikä niinkään hematopoieettisten tai lymfoidisolujen, kuten strooman rakenteita vaurioitunut elin. Tässä prosessissa korjaavan palautuminen pääasiassa muodostuu strooman kehys, joka sitten uudelleensijoittamis hematopoieettisten tai immuunijärjestelmän soluissa. Tämä pitkä tunnettu tosiasia tekee traumaperäisestä uudistaminen kätevä mallina tutkittaessa strooman mikroympäristön verta muodostavien elinten. Erityisesti, että tutkimus korjaava palautuminen luuytimen käytetään mekaanisen tyhjentämistä medullaariontelon pitkien luiden - kaavinta, jonka avulla on mahdollista nopeasti ja tehokkaasti tuoda hematopoieettisen kudoksen tila dynaamisen tasapainon. Kun tutkitaan prosessi korjaava palautuminen hematopoieettisten ja strooman luuytimen komponentit jälkeen mekaanisen tyhjentymisen selkäytimen ontelon sääriluun marsujen havaittu, että välillä indikaattorit palautuminen hematopoieettisten ja stroomasolujen (lukumäärä hematopoieettisten solujen pitoisuus ja määrä stroomasolujen esisolujen) ei ole suoraa korrelaatiota. Lisäksi havaittiin, että kasvu väestön strooman progenitorisolujen tapahtuu aikaisemmin jälkeen kaavinta, ja itse strooman fibroblastit ovat fosfatazopolozhitelnymi, joka on ominainen osteogeenisen kudosta. Todettiin myös, että kaavinta 3-5 pitkien luiden johtaa kasvun solupopulaation luuytimessä ja ei-toimiva luu myös pernassa, joka marsuissa on vain lymfopoieettisten elin.

Morfologinen kuva korjaava prosesseja luuytimessä kyuretirovannyh sääriluun marsut yleensä vastaa kirjallisuudesta saatuja tietoja kokeita muiden eläinlajien, dynamiikka tapahtuvien muutosten poistamisen jälkeen hematopoieettisen kudoksen on sama kaikille lajeille, ja ero koskee ainoastaan aika parametrit . Morfologisesti vaihe menettely palauttaa hematopoieesia in medullaariontelon tyhjennetään peräkkäisissä prosesseissa järjestää veritulpan muodostuminen karkea kuitu luun, sen resorptio, sinikäyrien ja aivoverkostossa strooman, joka edelleen uudelleensijoittamis hematopoieettisia tekijöitä. Määrä hematopoieettisten esisolujen luuydinkudokseen regeneroitava kasvaa rinnakkain pitoisuuden kasvun hematopoieettisten kantasolujen.

Gerasimov Yu et ai (2001) vertasivat määrän muutokset hematopoieettisten solujen ja määrää Stroomasolujen lähtöaineiden yksittäisten vaiheiden palautumista. Havaittiin, että kvantitatiivinen muutoksia luuytimen solujen luun kyuretirovannoy vastaa dynamiikka morfologiset palautuminen ominaisuudet. Vähentäminen ensimmäisten kolmen päivän solun sisällön uudistua kirjoittajat ominaisuus menetyksen hematopoieettisten solujen johtuen haittavaikutusten mikroympäristön, joka luo retikulaarisen kudos kasvaa jäljellä luuytimen epiphysis ja jälkimmäisessä muodostaen keskuksia osteoid ja verisuonten vahinkoja kaavinta. 7-12 päivänä nostamalla yaderosoderzhaschih soluja sama ulkonäkö yksittäisten pesäkkeiden myelooisen hematopoieettisen stroomasolujen lisääntymistä alueilla. 20. Päivä on merkittäviä määriä regeneroitua luuytimen ja hyvin kehittynyt poskionteloiden, johon liittyy lisääntynyt merkittävästi solujen kokonaismäärä. Kuitenkin, määrä hematopoieettisten solujen tänä aikana oli 68% kontrollista tasoilla. Tämä on sopusoinnussa aiemmin julkaistujen tietojen osoittavat, että määrä verta muodostavien solujen jälkeen kaavinta täyttää vaatimukset vain 35-40 päivää leikkauksen jälkeen.

Alussa posttraumaattinen aikana ensisijainen lähde hematopoieettisen rekonstituution palvella paikallisia säilynyt soluelementtien kaavinta. Myöhemmässä vaiheessa luuytimen hematopoieettisen kudoksen uudistamisen pääasiallinen lähde on kantasoluja, jotka vapauttavat vapaa stromaalivyöhykkeet uudelleen. Mitä tulee tiettyjen strooman solujen (endoteelisolujen, reticular ja osteogeeniset), lähteet koulunkäyntiään uudelleenjärjestely medullaariontelon, jää epäselväksi. Tulokset Yu.V. Gerasimova et ai (2001) osoittavat, että jäljellä ydinluun jälkeen kaavinta solupitoisuus pesäkkeitä muodostavien fibroblastien merkittävästi korkeampi kuin normaaleissa luuytimessä. Kirjoittajat uskovat, että kaavinta on voimakkaampi selektiivinen eluointi hematopoieettisten solujen verrattuna stroomasolujen pesäkkeitä muodostavia soluja, jotka osallistuvat muodostumista strooman ja liitetty kiinteästi sen emäksistä ainetta kuin hematopoieettisissa soluissa.

Dynamiikkaa muutoksia solujen lukumäärä pesäkkeitä muodostavat fibroblastit korreloi intensiteetti osteogeneesin prosessien myöhemmin trabekulaarisen luun resorption ja muodostumisen verkkomainen strooman joka asuttaa hematopoieettiset solut. Suurin osa stromal-progenitorisoluista muodostaa karkea-kuitumainen luukudoksen ja retikulaarisen stroman osoitettuihin regenerointiin. Murtumien reisiluun luun olosuhteissa pitkittynyt osteosynteesiä 5. Päivänä regenerointivyöhykkeessä lisää solujen pitoisuus ja pesäkkeitä muodostavien fibroblastien, ja luun muodostumista intensiivinen niiden määrä on kasvanut 6 kertaa. Tiedetään, että luuytimen solut, jotka muodostavat fibroblasti-pesäkkeitä, ovat osteogeenisiä ominaisuuksia. Stromal-progenitorisolujen määrä kasvaa ennen hepato-oieettisten solujen viljelemän luuytimen alueen kolonisaatiota. Tämä on hyvin sopusoinnussa todisteiden kanssa siitä, että stromasolut tuottavat hematopoieettisen mikroympäristön. On selvää, luominen hematopoieettisten mikroympäristön vastaa tietyn tason palautuminen peruskudoksen kudosta, ja määrä lisääntyy hematopoieettisten solujen laajenemisen jälkeen strooman sillanpääasema sopivat hematopoieesia.

Suurin mielenkiinto ovat laatijoiden tietojen heti kaavinta määrä nousee stroomasolun esiasteiden syrjäisillä luuston osissa. Alkaen kuudennen tunnin, ja kahdennenkymmenennen päivän sisältäen kontralateraalisen sääriluun havaitaan enemmän kuin kaksi-kertainen lisäys pitoisuuksina ja solujen lukumäärä pesäkkeitä muodostavat fibroblastien. Mekanismia tämän ilmiön liittyy todennäköisesti siihen, että massiivinen luuytimen vahinkoa jolloin muodostuu suuri määrä verihyytymiä samalla tuhota merkittävä verihiutaleiden määrä ja levittämisestä verihiutaleiden kasvutekijä (RBSK), jonka tiedetään aiheuttavan solujen lisääntymistä pesäkkeitä muodostavat fibroblastit sijaitsevat kehossa proliferatiivisen altaan ulkopuolella. Kokeissa kaneilla paikallista antamista MSC edistää palauttaminen kirurgisesti vahingoittunut rusto polven, joka voidaan liittää muodostumista kondrosyyttien peräisin MSC käyttöön. Kuitenkin korjaava palautuminen luuvaurioiden laboratoriossa rotilla on merkittävästi parannettu, kun käytetään mesenkymaalisia kantasoluja suljettu keraaminen runko. Näin ollen voidaan olettaa, että jos et RBOK, niin jokin muu tekijä, peräisin vaurioitunut stroomasolut, on kaukainen stimuloiva vaikutus proliferaatioon mesenkymaalisten kantasolujen ehjä alueilla luuytimen ja stimuloi niiden kulkeutuminen vaurioalueesta luuytimen kudosta. Tämä puolestaan vastoin saaduilla tiedoilla edellisten vuosien osoittaa, että stroomasolut ovat vastuussa mikroympäristön, toisin hematopoieettiset solut eivät pysty siirtämään ja tulevat paikallisista lähteistä.

Kuitenkin, että tutkimuksen tulokset Gerasimovin Yu et ai (2001), viittaavat siihen, että sovellus on mekaaninen vamma aiheuttaa paitsi terävä uudelleenjärjestelyn strooman kudoksen kyuretirovannoy luita, mutta myös merkittäviä muutoksia stroomassa kauko luut ehjä, että on, on systeemisen vasteen Stromal kudos paikallinen trauma. Ja kun niitä käytetään pmonitraumapotilaat - useita kaavinta - tämä reaktio vahvistetaan ja havaitaan ei vain toimi luun ja etäinen luuston osissa, mutta myös imukudoselimistä, erityisesti perna. Tällaisen systeemisen vasteen mekanismin luuytimen stromikudoksen ja pernan paikalliseen traumaan ja polytraumaan jää tuntemattomaksi. Oletetaan, että tämä prosessi liittyy toiminnan humoraalitekijä vapautetaan mesenkymaaliset strooman luuytimen luuytimen ontelon. Mahdollisuus tehdä luuytimen stroomasolujen ja perna organonespetsificheskogo humoraalitekijä vastuussa solun proliferaatiota, pesäkkeitä muodostavaa fibroblastit ilmoittaa tietoja niiden pesäkkeitä stimuloiva aktiivisuus yksikerroksisiin luuytimen.

Tässä suhteessa on syytä huomata, että kun annetaan systeemisesti multipotentteja mesenkymaalisten esiastesolujen uudelleensijoittamis niiden johdannaiset, jotka eivät ainoastaan luuytimestä, mutta myös muut kudokset, jota käytetään, erityisesti geeniterapiaan. On osoitettu, että laskimonsisäisen annon jälkeen suuria määriä MSC: eiden kanssa genomin villin tyypin hiirten mutantti kollageeni-geenin I luovuttajan soluja korvata jopa 30% soluista luun ja ruston kudoksen vastaanottaja, ja transfektoituja mesenkymaalisten kantasolujen hiiren solut erittävät IL-3 ihmisen, ja 9kuukausi tehokkaasti tukea hematopoieesia in tapauksessa niiden samanaikaista antoa ihmisen hematopoieettisten kantasolujen immuunijärjestelmän omaaviin hiiriin.

trusted-source[5], [6], [7], [8], [9], [10], [11], [12], [13], [14]

Mesenkymaalisten kantasolujen geneettinen muunnos

Kokeellinen menestys geneettisen muuntamisen huomattava, MSC transfektio tekijä IX-geenin ilmentymistä ihmisen MSC: eitä, jota seuraa siirto solutransfektantteja immuunipuutteisilla hiirillä, mikä johtaa ulkonäön veren antihemofiilisen tekijä B yli 8 viikko transplantaation jälkeen. Tässä kokeessa tehtiin tekijän IX posttranslaatiomuutos y-glutamyylikarboksylaasin kanssa suoritettiin transfektoiduissa soluissa. Transduktio MSC: eiden kanssa retrovirusvektorin, joka koodaa ihmisen tekijä IX, on ollut vähemmän onnistunut - myöhemmin käyttöön näiden solujen hemofilia koira terapeuttisen tekijä IX, joka tukee normaali voimakkuus hyytymisen hemostaasin, vain 12 päivä.

Mesenkymaalisten kantasolujen siirtäminen eläinten aivojen parenkyymiin on osoittanut, että luovuttajien kypsymättömät solut muunnetaan sekä neuronien että glia-populaatiossa. Engraftmentti hermosolujen johdannaiset terveen luovuttajan mesenkymaalisia kudosta teoriassa mahdollistaa korjaamisen geneettisen poikkeavuudet aivojen aineenvaihduntaa potilailla Gaucherin tauti ja muut rasva-aineenvaihdunnan häiriöiden, hiilihydraatti- tai gangliosidit.

Jatkuva koehausta olosuhteissa transdifferentiation kantasolujen luuytimen stroomasolujen esiastesolujen hermoston ja maksakudoksen. Huomiota Tutkijoiden keskittyi yhdistelmä eriyttäminen induktoreiden ja erityisiä conditioned ympäristöissä. Erityisesti, eristämiseksi primaariviljelmän 10% vasikan sikiön seerumia, luuytimen stroomasolujen pestiin ja suspendoitiin uudelleen DMEM / F12 viljelyväliaineessa (1/1) ympätään tiheydellä 200000 / cm2. 24 tunnin kuluttua, kiinnittymättömät solut poistetaan ja liitetään muovi fibroblastisoluja viljellään viikossa. Erilaistumiseen luuytimen stroomasolujen on neuroblastien käytetään väliaine, joka on saatu viljelemällä kolmen päivän viljelmää primäärisissä hiiren alkion fibroblasteissa, sekä sähköiseen DMEM / F12 (1/1) jossa oli 2% vasikan sikiön seerumia ja johon oli lisätty 20 ng / ml tai 10-6 M LiF retinoiinihappo (neyroinduktory joita sovelletaan hermostoputken erilaistumista hiiren alkion kantasoluja ja ihmisen). Erilaistumisen luuytimen stroomasolujen progenitorisoluiksi hepatosyyteiksi indusoitiin ilmastoidun ympäristö, joka on seurausta kolmen päivän viljelemisen primäärisestä viljelmästä hiiren alkion maksan soluja DMEM / F12 (1/1), jota on täydennetty 10% vasikan sikiön seerumia.

Tässä on jälleen huomattava, että pesäkkeitä muodostavien luuydinperuskudossoluihin heteromorfiseen ja voidaan jakaa kahteen tyyppiin. Ensimmäinen tyyppi sisältää fibroblastin kaltaiset solut, jotka muodostavat filopodia-soluja suurilla ytimillä ja yhdellä tai kahdella nukleolilla. Toista tyyppiä edustavat pienikokoiset solut, joilla on karanmuotoinen muoto. Molemmissa soluviljelmän elatusaine saadaan syöttölaite kerros primäärisissä hiiren alkion fibroblasteissa, ja Z-4-päivänä viljelyn solut näyttävät Samanlainen neuroblastien. Tässä vaiheessa niillä on usein kara muotoinen muoto, jossa on yksi tai kaksi pitkää prosessia, jotka päättyy filopodiaan. Lyhyiden dendriittien pyramidi- tai stellaattisolut ovat harvinaisempia. Dendriittien yksi neuroblastien on tyypillinen laajennus (munuainen kasvu) ja haaroitus sen distaalinen osa, toinen - ja selvä kasvukartioilla filopodien, jonka kautta dendriittien kasvua tapahtuu. Variantit morfologisia ominaisuuksia (munuainen kasvukartioilla ja filopodien a) luontainen neuroblastooma, erilaistua neuronien, on kuvattu yksityiskohtaisesti paperit neurogenesis. Tämän perusteella jotkut tekijät päättelevät, että solut, joita he havaitsevat kulttuurissa, ovat neuroblastit. Erityisesti, Schegelskaya E. Et ai (2002), sen jälkeen kun primäärisestä viljelmästä stroomasolujen viljelty kaksi viikkoa vaihdettava jokaisen Z-ja-4. Päivänä väliaine havaittu, että osa lisääntyvien solujen, säilyttäen erilaistumattoman tilan. Ulospäin tällaiset solut näyttivät fibroblasteiksi ja tunnistettiin viljelmässä yhdessä neuroblastien erilaistumisen kanssa. Suurin osa soluista (noin 80%) oli eri vaiheissa erilaistumiseen hermokudoksen soluihin, pääasiassa neuroneiksi. Dendriittisen prosessit näiden solujen läheisessä kosketuksessa toistensa kanssa niin, että vähitellen solut muodostetaan substraatille osien neuroverkon muodossa pitkä säikeiden monisoluisten. Tuojahaarakkeet neuroblastien tullut paljon kauemmin, joista osa 8-10 kertaa suurempi kuin pituus ruumiin hermosolu. Vähitellen pyramidin ja tähtisolujen osuus kasvoi. Stellaattisolujen dendritit haarautuneina. Kirjoittajien mukaan, myöhemmin erilaistuminen pyramidin ja liposyyttien verrattuna spindly vastaa sekvenssiä normaalin vaiheissa neurogeneesiä eläimillä. Seurauksena, kirjoittajat toteavat, että kantasoluja luuytimen stroomasolujen on alttiina indusoi neurogeneesiä jossa menetelmässä in vitro syntyy neuroblastien kaikki kolme päätyyppiä neuronien. Esiasteita hermosolujen havaittiin myös viljelmän luuytimen stroomasolujen varten 3-4 päivää elatusaineessa, jossa oli 2% naudan sikiön seerumia ja 20 ng / ml LIF. Mutta tässä tapauksessa, kantasolut jaettiin hyvin hitaasti, erilaistumisen neuroblastien tapahtuu vain 30%: ssa tapauksista, ja ne eivät muodosta neuroverkot. Käyttäen hermosolu erilaistumisen indusoijia retinoiinihappo, kirjoittajat saatu viljelmän 25-30% hermosolujen vallitsevana gliasolujen - astrosyytit ja oligodendrosyytit. Neuronit olivat vain kolmannes kaikista hermosolujen, vaikka ne esitettiin kaikkia kolmea tyyppiä: fusiform, pyramidin ja tähtisoluissa. 6. Päivänä viljelyn stroomasoluista retinoiinihapon väliaineessa hermosolujen tuli eriytetty, kun taas yksittäiset axons pyramidin neuronien havaittiin, että normaalissa neuroontogenesis näkyviin myöhemmin muodostumista dendriittisen prosesseja. Tekijöiden mukaan, huolimatta alhainen saanto hermosolujen, menetelmä indusoimiseksi retinoiinihapon on etuja: astrosyytit ja oligodendrosyytit ja myelinoiviin käyttää rehun toimintoja kasvun aikana aksonien ja dendriittien ja jotka ovat välttämättömiä normaalille hermo kudoksen muodostumista. Siksi vahingoittuneiden kohteiden korjaamiseksi in vivo on parempi käyttää suspensiota, jossa on gliaalisia soluja.

Toisessa koesarjassa, kirjoittajat yrittivät erilaistumisen indusoimiseksi luuydinperuskudossoluihin maksasoluissa. Kolmen päivän ikäisestä viljelmästä luuytimen stroomasolujen kantasolujen vakioitu väliaine, joka on saatu inkuboimalla hiiren alkion hepatosyytit, iso, pallomaisia muotoisten solujen on havaittu, usein kaksi-ydin, sytoplasman sulkeumia eri kokoja. Nämä solut olivat eri erilaistumisen vaiheissa, ja erosivat koon, ytimien lukumäärän ja sytoplasmassa inkluusion. Useimmissa näistä solujen havaittiin glykogeenin, jolloin olemme tunnistaneet ne maksasolujen esiastesolujen. Koska viljelmän soluja ei havaittu Samanlaisia neuroblastien, jonka jälkeen päätellä, että vakioitu väliaine, joka on saatu viljelemällä alkion hepatosyytit, ei ole olemassa tekijöitä hermosolujen erilaistumisen ja päinvastoin, on olemassa tekijöitä, jotka indusoivat erilaistumisen luuytimen stroomasolujen progenitorisoluiksi hepatosyyttien . Kirjoittajat ehdottavat, että läsnä pluripotenttien solujen luuydinstroomalla, koska ne erilaistuvat in vitro soluihin maksan tai hermokudoksen riippuen spesifisestä elatusaine, ja induktorit.

Joissakin teoksissa luuytimen stromasolujen erilaistuminen kardiomyosyytteihin, rustoon, luuhun ja hermokudossoluihin on oikeasti esitetty. On tietoa, että luuytimen soluissa on kantasolujen populaatioita, jotka voivat erotella hepatosyytteihin. Valossa nämä tulokset edellä kokeilua hiirissä voidaan edelleen pitää toisena esiintyminen vahvistetaan luuytimessä pluripotentteja mesenkymaalisia kantasoluja, joilla on kyky erilaistua soluihin eri kudoksissa aikuisen organismin.

Mesenkymaalisten kantasolujen transplantaatio

Kliinisissä transplantaation ihmisen mesenkymaalisten kantasolujen voidaan käyttää laajentamista hematopoieettisten kantasolujen ja niiden varhaisessa jälkeläisiä prekommitirovannyh. Erityisesti käyttöönotto autologisten Veren kantasolut ja MSC syöpäpotilaiden kemoterapian jälkeen korkean nopeuttaa palautumista neutrofiileissä ja verihiutaleiden ääreisverenkierron. Autologisten ja allogeenisten transplantaation mesenkymaalisten kantasolujen käyttää hoitamaan multippelia myeloomaa, aplastinen anemia, spontaani trombosytopenia - sairaudet, jotka liittyvät ensisijaisen vika hematopoieettisten strooman kudosta. Tehokkuutta soluterapian hematologinen sairauksien monissa tapauksissa edellä, kun taas käyttöön strooman ja hematopoieettisten kantasolujen, joka ilmenee vähentäminen leikkauksen toipumisaika, veren, määrän väheneminen johtuvien kuolemantapausten ei-selektiivisiä tuhoaminen alue- ja verenkierrossa syövän solut, joissa muotin ja sen oma esiastesolujen hematopoieettisten potilaan soluja. MSC lupaavia sovelluksia ja muita multipotentteja mesenkymaalisten esiastesolujen kliinisessä käytännössä johtuen niiden suhteellisen helppo saada luuydinaspiraattien, viljelmän laajentaminen ja transfektio terapeuttisen geenin. Siten kompensoimaan paikallisen kudoksen viat voivat käyttää paikallista istuttaminen multipotenttien mesenkymaalisten esiastesolujen ja systeemisen toimintahäiriöstä kudosten mesenkymaaliset ei voida sulkea pois niiden tuomista yleiseen verenkiertoon.

Varovaisempi väitteitään laatijat teoksista, joissa näkökulmat MSC paikallista, systeemistä elinsiirrot ja geeniterapian analysoidaan näkökulmasta biologian stroomasoluissa. Synnytyksen jälkeinen luuytimen on perinteisesti pidetty elin, joka koostuu kahdesta järjestelmien eri solulinjojen - itse asiassa hematopoieettisten kudosten ja siihen liittyvän tukevat strooman. Siksi luuytimen mesenkymaalisia kantasoluja alun perin katsottiin yksinomaan stromalai- sen lähteeksi hemopoetiivisen mikroympäristön säätelytekijöiden tuotannolle. Sitten tutkijoiden huomio kiinnitettiin tutkimaan MSC: n roolia luustolihaksen varren lähteenä. Viimeisimmät tiedot osoittavat odottamatonta potentiaalia luuytimen stromasolujen erilaistumisesta hermos- ta tai lihaskudoksen muodostumisella. Toisin sanoen, mesenkymaaliset kantasolut ilmentävät transgermalnuyu plastisuutta - kyky erilaistua solutyyppeihin, että fenotyyppisesti kuin alkuperäinen kudos soluja. Kuitenkin joitakin biologian luuydinperuskudossoluihin edelleen epäselviä ja ratkaisematta biologisena suunnitelma, ja melko yksityiskohtaisesti, kuten tunnistaminen, luonteesta, alkuperästä ja kehitystä ja toimintaa in vivo luuydinperuskudossoluihin sekä sallitut potentiaali erilaistumista ex vivo ja mahdollisuus terapeuttista käyttöä in vivo. Tiedot potentiaaliset mahdollisuudet MSC sekä tutkimustulokset muiden uusiutumispotentiaali kantasolujen, jyrkässä ristiriidassa vakiintuneiden dogmi biologiassa.

Kun viljelty alhaisen tiheyden luuytimen stroomasolujen kantasolut muodostavat erillisiä pesäkkeitä, joista kukin on johdannainen yksi prekursorisolujen. Prosenttiosuus Stroomasolujen lähtöaineiden luuytimen tumallisten solujen määritellään niiden kyky muodostaa pesäkkeitä on suuresti riippuvainen viljelyolosuhteet ja lajien MSC omistaja. Esimerkiksi jyrsijän saada enimmäismäärä stroomasolujen progenitorisolujen on ehdottoman välttämätöntä, että läsnä oli säteilytettyjä syöttölaite viljelmän luuydinsolujen ja seerumi, kun pesäkkeitä muodostavien tehokkuutta ihmisen mesenkymaalisten kantasolujen on riippumaton syöttölaite, tai viljelyalustasta. Niiden tunnettujen mitogeenisten tekijöiden määrä, jotka stimuloivat stromaalisten progenitorisolujen proliferaatiota, on rajallinen. Näihin kuuluvat PDGF, EGF, FGF, TGF-b ja IGF1. Optimaalisissa olosuhteissa, viljelemällä MSC polyklonaaliset linjat ylläpitää in vitro yli 50 solunjakautuminen, mikä tekee mahdolliseksi saada miljardeja luuydinperuskudossoluihin 1 ml aspiraatista se.

Kuitenkin, väestö luuytimen stroomasolujen on heterogeeninen, että ilmenee vaihtelua koot pesäkkeiden, eri nopeus niiden muodostumisen ja erilaisia solun morfologia, joka käsittää erilaisia fibroblastin kaltaisen karan suuri tasainen soluja. Tällaisten viljelykasvien kehittymisen jälkeen 20 päivän jälkeen havaitaan myös fenotyyppinen heterogeenisuus. Osa pesäkkeitä on ominaista suuri alkalisen fosfataasin ekspressoimista, toiset eivät ilmaise sitä, ja kolmannen tyypin pesäkkeet ovat fosfatazopozitivnymi keskialueella ja fosfatazonegativnymi kehälle. Erilliset pesäkkeet muodostavat luukudoksen kyhmyjä (matriisin mineraalisaation alku on merkitty värjäämällä alizariinin punaisella tai kalsiumilla Van-Kossin kanssa). Muissa pesäkkeissä tapahtuu rasvan kertymistä, joka tunnistetaan G-värjäyksellä öljypunaisella. Vähemmän usein mesenkymaalisten kantasolujen pesäkkeet muodostavat alcyaanin värin rustoja).

Jälkeen ektooppinen transplantaation koe-eläimillä polyklonaalisia MGK linjat muodostavat ektooppisen luun strooman kanssa setchatoobraznoy liittyy myelopoieesin ja adiposyyttejä, samoin, mutta harvoin, jossa rustokudoksen. Monoklonaali- linjat transplantaation luuydinperuskudossoluihin joissakin tapauksissa kimerismin, jolloin de novo muodostettu luukudoksen koostuu luusolujen, adiposyytit käsittää strooman ja luovuttajan alkuperää, kun taas solulinjat hematopoieettisten ja verisuoniston ovat peräisin vastaanottavasta.

Näiden tutkimusten tulokset vahvistavat stromaalisen luuytimen edeltäjä, josta klonaalinen linja saatiin. He myös osoittavat samanaikaisesti, että kaikki viljelmäsoluihin kohdistuvat kloonaukset eivät todellakaan ole monikäyttöisiä kantasoluja. Jotkut tutkijat uskovat, ja jaamme heidän mielestään että tarkimmat tiedot todelliset mahdollisuudet erilaistumisen Yksittäisten kloonien saa vain in vivo siirron jälkeen sen sijaan, että fenotyypin määrityksessä niiden johdannaisten in vitro. Ilmaisu osteo- kulttuuri fenotyyppisten markkerien hondro- tai adipogeneesin (määritettynä mRNA: n kautta tai histokemiallisilla tekniikoilla), ja jopa tuotannon mineralisoituneeseen väliaineeseen ei heijasta astetta pluripotenttisuuden yhden kloonin in vivo. Näin ollen, tunnistaminen kantasolujen stroomasoluissa ryhmä on käytettävissä vain jälkikäteen, sopivissa olosuhteissa siirteen biologisessa näytteessä. Erityisesti, kondrogeneesin hyvin harvoin havaittiin transplantaation avoimissa järjestelmissä, mutta muodostuu ruston ei ole harvinaista suljetuissa järjestelmissä, kuten diffuusiokammiot tai mikromassnyh viljelmissä strooman soluissa in vitro, jossa saavutetaan paikallisesti alhainen hapen paineen, edistää muodostumista ruston. Näin ollen, vaikka transplantaation tekniikka, samoin kuin ei-spesifinen in vitro viljelyolosuhteissa vaikuttavat merkittävästi erilaisia erilaistumisen MSC.

Kokeellinen elinsiirto tiettyjen kokeellisten olosuhteiden mukaisesti on kultainen standardi luuytimen stromasolujen erilaistumismahdollisuuden määrittämiseksi ja niiden oikean tunnistamisen keskeiselle osalle. Historiallisesti luuytimen stromalai- sen luuydinsiirron tutkimukset liittyvät yhteiseen luuytimensiirto-ongelmaan. Todettiin, että hematopoieettiset mikroympäristön on luotu siirtämällä linjat luuytimen stroomasolujen ja tarjoaa ektooppinen kehittäminen hematopoieettisten kudosten alalla transplantaation. Alkuperä mikroympäristön luovuttajan ja hematopoieettisten kudosten - vastaanottajana voidaan pitää todellisena ektooppinen luu "ylösalaisin" luuydinsiirron. Luuytimen stromasolujen paikallinen elinsiirto edistää luun virheiden tehokasta korjaamista, joka on selkeämpi kuin spontaani korjaava regenerointi. Useissa prekliinisissä tutkimuksissa eläinmalleissa vakuuttavasti osoittanut mahdollisuus siirteiden luuydinperuskudossoluihin ortopediassa, vaikka optimoida nämä menetelmät, jopa yksinkertaisin tapauksissa vaativat eniten huolellista työtä ja analysointia. Erityisesti, optimaaliset olosuhteet laajentamista ex vivo osteogeeninen stroomasolut eivät vielä ole asetettu, ei pakokaasun rakenne ja koostumus ovat ihanteellisia kantajaa ja solujen lukumäärä tarvitaan regenerointia luun tilavuuteen.

Soveltamisen lisäksi lisättyjä ex vivo luuytimen stroomasolujen kudoksen uudistumista mesenkymaaliset epätavallinen sitkeys MSC avaa mahdollisen käytön regeneroimiseksi hermosoluja, tai toimitus geenituotteiden keskushermostossa. Periaatteessa tämä helpottaa soluterapia Hermostoon leesion, koska ei ole tarvetta autologisten ihmisen hermosoluja kantasoluja. On raportoitu mahdollisuuksista käyttää luuydinsoluja kardiomyosyyttien ja myogeenisten prekursorisolujen muodostumiseen todella stromisena ja ulkoisena alkuperänä.

Kokeita on käynnissä luuytimen stromasolujen systeemiseen elinsiirtoon yhteisten luuston sairauksien hoidossa. Selvää, että luuytimen stroomasolut ovat populaatio vastaa geneettisten häiriöiden sairauksien luuranko, joka on hyvin kuvattu vektorin siirto käyttäen geneettistä informaatiota solujen, joka johtaa muodostumista patologisten luukudoksen koe-eläimillä. Stromalisolujen kyky implantoida, kasvaa, moninkertaistaa ja erilaistua luuran luissa sen jälkeen, kun ne on lisätty yleiseen verivirtaan, ei ole vielä osoitettu.

Tämä johtuu osittain siitä, että standardi menettely luuydinstroomalla ei transplantoitu kanssa hematopoieettisten kudosten, niin tiukat arviointiperusteet onnistunut siirteen annetaan systeemisesti stroomasolujen on vielä kehitettävä. On syytä muistaa, että markkerigeenin geenien kudosuutteissa tai vapautumista viljelmän luovuttajalta peräisin olevien solujen osoitus ei luuytimen soluja, mutta vain noin niiden selviytymistä. Jopa valtimoon injektiona luuydinperuskudossoluihin hiiren raajan voi johtaa käytännössä nolla tulos siirteen toimiminen, huolimatta siitä, että luovuttajalta peräisin olevien solujen on havaittu suuri määrä sisällä mikrovaskulaarisen luuytimessä verkkoon. Valitettavasti tällaisia soluja kutsutaan yleensä "leikattuna" vain markkeri-luovuttajageenien määrityksen tulosten perusteella ex vivo viljelyolosuhteissa. Lisäksi on välttämätöntä antaa vakuuttavia todisteita pitkäaikaisesta integroitumisesta erilaistuneiden ja toiminnallisesti aktiivisten luovuttaja-alkioiden soluihin. Monissa julkistetuissa teoksissa, joissa ilmoitetaan luuytimen luuytimen stromasolujen liittämisestä luurankoon, tällaisten selkeiden tietojen puuttuminen on silmiinpistävää. On kuitenkin syytä huomata, että joissakin oikeassa eläinkokeissa todella asettaa kuitenkin rajallinen, mutta todellinen paraneminen strooman progenitorisolujen systeemisen antamisen jälkeen.

Nämä tiedot ovat johdonmukaisia tutkimustulosten kanssa, joiden mukaan myogeenisten luuytimen esiasteiden solut voidaan antaa lihaksille verisuonijärjestelmän kautta. Kuitenkin, ei pidä unohtaa, että sekä luuston ja lihasten kudos muodostuu aikana kehitys ja kasvu perustuu ekstravaskulaaristen soluihin siirtymät muuttoliike prosesseja, jotka eivät liity verenkiertoa. Jos itse on riippumaton kiertorataa toimituksen-predshestvonnrshov solujen kiinteä kudos faasin, on mahdollista estää tilanne, fysiologisesti verenkierrossa mesenkyymiesiastesolujen? Mikä on näiden solujen alkuperä sekä kehittymässä että synnytyksen jälkeisessä organismissa ja miten ne tunkeutuvat verisuonten seinään? Näiden ongelmien ratkaiseminen on ehdottoman välttämätöntä ja edellyttää perusteellisinta prekliinistä analyysiä. Jopa sen jälkeen, kun löydettiin vastauksia näihin kysymyksiin, ongelmalliset kineettiset näkökohdat, jotka liittyvät nivelrakenteeseen ja sidekudoksen remontointiin, ovat edelleen ratkaisematta. Samaan aikaan, häiriöiden hoidossa luun muodostumista korvaamalla koko mutatoidun luuston progenitorisolujen terve peruskudoselementeistä edustavat todellista kliinistä näkökulmasta. Tässä tapauksessa paikallisen muodonmuutoksen tai murtuma johtuu patologisten alue luukudoksen muodostumista ja luun tuhoisa muutokset voidaan korjata käyttäen in vitro viljeltyjä strooman kantasoluja. Näin ollen suunta tulevien tutkimusten on suositeltavaa keskittyä ongelmiin tai geneettinen muunnos korjausta mutatoitunut autologinen ex vivo osteogeenisessa esiastesolujen.

Geenitekniikka solujen, väliaikaisesti tai pysyvästi, tuli perusta solu- ja molekyylibiologian, lähde monien tieteellisten tutkimustulosten roolia koskevia yksittäisten proteiinien solujen aineenvaihduntaan in vitro aineiden ja in vivo. Käyttö molekyylitekniikoiden korjata perinnöllisiä sairauksia ja ihmisen sairauksien on erittäin lupaava käytännön lääketieteessä, koska ominaisuudet strooman luuytimen kantasoluja annetaan kehittyä ainutlaatuinen piirejä transplantaation korjaamiseksi geneettisten sairauksien luuranko. Tässä tapauksessa mesenkyymiesiastesolujen voidaan saada melko helposti tulevaisuudesta vastaanottaja, he ovat geneettisesti manipuloitavissa ja pystyvät lisääntymään suuria määriä lyhyessä ajassa. Käyttö mesenkymaalisten kantasolujen vältetään rajoitukset ja riskit toimittamiseen liittyviä geneettisen tiedon materiaalin suoraan potilaaseen vrtrusnye vektorikonstruktioita. Tämä strategia on sovellettavissa pi alkion kantasoluista, mutta synnytyksen jälkeinen autologisen luuytimen stroomasolujen - edullinen materiaali, koska niiden antaminen sulkee pois mahdolliset immunologiset transplantaation jälkeinen komplikaatioita. Saavuttamiseksi lyhytaikainen vaikutus, esimerkiksi nopeuttamiseksi luun uusiutumista, optimaalinen menetelmä on geneettisen muuntamisen mesenkymaalisten kantasolujen käyttäen elektroporatsrsh, kemiallisia fuusio, lipofektio, plasmidit ja adenovirusrakenteiden. Erityisesti, viruksen transfektiota luuydinperuskudossoluihin BMP-2 oli tehokas nopeuttaa regeneraatiota luun kokeellisessa pmonitraumapotilaat. Adenovirusvektorirakenteiden muodostuminen on edullista myrkyllisyyden puuttumisen vuoksi. Luuytimen stromasolujen geneettisellä muunnoksella tässä tapauksessa kuitenkin on erittäin vähäinen stabiilius. Lisäksi, normaali transformoitu luuydinperuskudossoluihin vaativat vektori kantajia geneettisen informaation 10 kertaa enemmän tartunnan kuin muissa solutyypeissä, mikä lisää merkittävästi prosenttiosuus kuoleman transfektoiduissa soluissa.

Hoitamiseksi resessiivinen aiheuttamien tautien alhainen tai nolla biologista aktiivisuutta tiettyjen geenien tarvittaessa pidentää tai pysyvä muutos mesenkymaalisten kantasolujen, joka edellyttää adeno-associated-virukset, retrovirukset, lentivirukset ja adeno-retroviruksen kimeeri. Kuljetus osia näistä viruksista kykenevät siirtämään suuria DNA transfektoomista (8 kb). Tieteellisessä kirjallisuudessa on jo esiintynyt tietoja biologista aktiivisuutta eksogeenisen luuydinperuskudossoluihin transfektoitu retroviruskonstrukteja synteesiä koodaava säätelymolekyylejä, ja markkereita - IL-3, CD2, tekijä VIII, ja entsyymit, jotka osallistuvat synteesin L-DOPA. Mutta näissäkin papereita, kirjoittajat viittaavat useita rajoituksia, jotka on voitettava ennen käytännön soveltamista tätä tekniikkaa. Ensimmäinen ongelma on optimoida muokkausprosessi MCK ex vivo. On tunnettua, että pitkän aikavälin (3-4 viikkoa) in vitro proliferaatio stroomasolujen luuytimen vähenee niiden transfektoitu. Samaan aikaan, jotta saavutetaan korkea geneettisen muuntelun MSC on tarpeen suorittaa useita transfitsirovadiya sykliä. Toinen ongelma liittyy kestoon ilmaisun terapeuttisen geenin, joka yhä on enintään neljä kuukautta. Säännöllinen lasku tehokas geenien ilmentymisen johdosta inaktivoinnin promoottorit, ja modifioitu solukuolemaa. Yleensä näkymiä sesta geneettisen informaation siirrosta käyttäen mesenkymaalisia kantasoluja tulokset alustavat tutkimukset osoittavat tarvetta transfektion optimointia menetelmiä ex vivo, valitaan asianmukainen promoottori säätelemiseksi biologinen aktiivisuus oikeaan suuntaan, ja parantaa kykyä modifioidun luuydinperuskudossoluihin itseuudistua in vivo siirron jälkeen. On huomattava, että käyttö retroviruskonstrukteja modifiointiin luuytimen stroomasolujen haluttuun suuntaan ei aina edellytä niiden pakollista juurtumista. Transfektoitu mesenkymaalinen kantasolu voi suorittaa korjaava taustalla vakaa ja oleskelun ilman aktiivista fyysistä sisällyttämistä, ja toimivat sidekudoksen. Tässä tapauksessa ne on pidettävä biologinen mini-pumppu, jotka tuottavat in vivo tekijä, puute, joka määrittää ilmentymä geneettinen sairaus.

Käyttö transformoitujen luuydinperuskudossoluihin hoitoon määräävän geneettinen sairaus, joka on tunnettu siitä, että geenin ilmentyminen tai epänormaali patologinen biologinen aktiivisuus, on paljon enemmän ongelmallista, koska tässä tapauksessa on tarpeen estää siirtoa tai myyntiä geneettisen informaation vääristynyt. Yksi menetelmistä geenitekniikan - homologinen rekombinaatio alkion kantasoluja transgeenisten eläinten tuottamiseen. Kuitenkin erittäin alhainen homologisten yhdistettynä ongelmia tunnistamista, erottaminen ja laajentaminen sellaisten rekombinanttien ei todennäköisesti edistää laajaa käyttöä tätä tekniikkaa lähitulevaisuudessa, vaikka uusien teknisten menetelmien. Toinen lähestymistapa geeniterapiaan perustuu hallitseva patologian automaattisen korjauksen vaurioituneen DNA: n geneettisen mutaatiot voidaan korjata viemällä eksogeenisen DNA: n kanssa halutun sekvenssin (lyhyt DNA-oligonukleotidit, tai kimeerinen RNA / DNA-oligonukleotidit), jotka sitoutuvat homologeja vahingoittuneen genomissa. Kolmas suoritusmuoto tarjoaa patologinen tiedonsiirto lukko, joka on saavutettu käyttämällä erityisesti suunniteltu oligonukleotidien, jotka sitoutuvat tietyn geenin muodostamiseksi, kolmen komponentin kierteisen rakenteen, joka sulkee pois mahdollisuuden transkription.

Vaikka korjaus geneettisten sairauksien genomista taso on optimaalinen ja edullinen terapeuttinen menetelmä, mRNA: ta on myös lupaava vektori (ehkä jopa helpommin) sulkemiseksi hallitseva negatiivinen geeni. Jotta translaation inhiboimiseksi ja / tai lisäämällä mRNA: n hajoamisen on jo pitkään käytetty proteiinimolekyylien kanssa Antisense-oligonukleotidi-sekvenssejä tai täydellinen esto sitova mRNA biosynteettisen laitteen solun. Lisäksi kaksijuosteinen RNA indusoi mRNA: n nopeaa hajoamista, jonka mekanismi on edelleen epäselvä. On kuitenkin epätodennäköistä, että pelkkä poistaminen mRNA transkriptoitu mutantti alleeli lyhyitä tai yksittäisiä mutaatioita edistää mRNA: n ilmentymisen normaalin alleelin. Vaihtoehtona on käyttää ribozinov vasarahaiden ja hiusneula, on kyky sitoutua erittäin spesifiset mRNA perehdytys- niiden pilkkominen ja inaktivaation aikana kääntämisen. Tällä hetkellä tutkitaan mahdollisuutta käyttää tätä menetelmää patologisen osteogeneesin hoidossa. Riippumatta siitä, mitä tarkalleen ottaen on kohde - genomista tai sytoplasminen elementtejä menestys uuden Geenihoitomenetelmien päätetään tehokkuutta sisällyttämällä reagenssien luuydinperuskudossoluihin ex vivo, optimaalinen valinta tietyn vektorin ja vakaa kyky mesenkymaalisten kantasolujen ilmentämään haluttua tekijöiden in vivo.

Niinpä mesenkymaalisten kantasolujen löytäminen niiden odottamattomilla ominaisuuksilla luo uuden käsitteellisen järjestelmän solulinjoille. Mutta ymmärtää biologista merkitystä strooman kantasoluja, niiden luonteesta, kyky transdifferentiation tai dedifferentiaatio, fysiologiset merkitys prosessissa alkion kehityksen, syntymän jälkeiseen kasvuun, kypsymiseen ja ikääntyminen, sekä ihmisten sairauksien vaativat vielä tieteidenvälistä tutkimusta.

You are reporting a typo in the following text:
Simply click the "Send typo report" button to complete the report. You can also include a comment.