Karyotyyppauksella

Kromosomeja tutkittaessa käytetään usein lyhytaikaisia veriviljelmiä samoin kuin luuytimen soluja ja fibroblastiviljelmät. Laboratorioon antikoagulantilla toimitettava veri sentrifugoidaan punasolujen saostamiseksi ja leukosyyttejä inkuboidaan viljelyalustassa 2-3 päivän ajan. Fytohemagglutiniinia lisätään verinäytteeseen, koska se nopeuttaa erytrosyyttien agglutinaatiota ja stimuloi lymfosyyttien jakautumista. Kromosomien tutkimukseen sopivin vaihe on mitoosin metafaasi, joten kolkisiinia käytetään lopettamaan lymfosyyttien jakautuminen tässä vaiheessa. Tämän lääkkeen lisääminen viljelmään johtaa siihen, että solujen osuus, jotka ovat metafaasissa, eli solusyklin tässä vaiheessa, kun kromosomeja nähdään parhaiten. Jokainen kromosomi replikoi (tuottaa oman kopionsa) ja sopivan värin jälkeen on näkyvissä kahden kromatidin muodossa, jotka on kiinnitetty sentromereihin tai keskushermostoon. Soluja käsitellään sitten hypotonisella natriumkloridiliuoksella, joka on kiinteä ja värjätty.

Kromomeja värjäävät useimmin Romanovsky-Giemsa-väriaine, 2% asetamino- niini tai 2% acetatsariinia. Ne tahraavat kromosomeja kokonaan, tasaisesti (rutiinimenetelmä) ja niitä voidaan käyttää tunnistamaan ihmisen kromosomien numeeriset poikkeavuudet.

Jotta saataisiin yksityiskohtainen kuva kromosomien rakenteesta, yksittäisten kromosomien tunnistetiedoista (identifioinnista) tai niiden segmentteistä, käytetään erilaisia differentiaalivärjäysmenetelmiä. Yleisimmin käytetyt menetelmät ovat Giemsa sekä G- ja Q-taivutus. Mikroskopinen tutkimus lääkkeestä pitkin kromosomi on paljastettu joukko värjättyjä (heterochromatiini) ja maalaamattomia (eukromatiini) kaistoja. Tässä tapauksessa saadun poikittaisen striataation luonne mahdollistaa kunkin kromosomin tunnistamisen joukossa, koska raidat vuorottelevat ja niiden koot ovat ehdottomasti yksilöllisiä ja jatkuvia jokaiselle parille.

Yksittäisten solujen metafaasilevyt valokuvataan. Yksittäiset kromosomit leikataan valokuvista ja liimataan paperilevyyn järjestyksessä; tällaista kuvaa kromosomeista kutsutaan karyotyypiksi.

Lisävärjäyksen käyttö sekä uudet menetelmät kromosomivalmisteiden saamiseksi, jotka mahdollistavat kromosomien venyttämisen pitkiä, lisäävät merkittävästi sytogeneettisen diagnostiikan tarkkuutta.

Erityinen nimikkeistö on kehitetty kuvaamaan ihmisen kariotyyppiä. Miehen ja naisen normaali karyotyyppi on nimetty 46, XY ja 46, vastaavasti XX. Downin oireyhtymässä, jolle on ominaista lisäkromosomin 21 (trisomia 21) läsnäolo, naisten karyotyyppi kuvataan 47, XX 21+ ja miehet - 47, XY, 21+. Kromosomin rakenteellisen poikkeaman vuoksi on tarpeen ilmaista muuttunut pitkä tai lyhyt varsi: kirjain p merkitsee lyhyttä käsivartta, q pitkä käsi ja t translokaatio. Siten, kun kromosomin 5 lyhyt varsi ("kissa-huuto" -oireyhtymä) poistetaan, naaras kariotyyppi kuvataan 46, XX, 5p-. Lapsen äiti, jolla on translokaatio Down-oireyhtymä - 14/21: n tasapainotetun translokaation kantajalla on karyotyyppi 45, XX, t (14q, 21q). Translocation-kromosomi muodostuu, kun kromosomin 14 ja 21 pitkät kädet yhdistyvät, kun taas lyhyet haravat menetetään.

Jokainen olkapää on jaettu piireihin, ja ne puolestaan - osaksi segmenttejä, ja ne ja muut on merkitty arabialaisin numeroin. Kromosomin centromere on lähtökohde alueiden ja segmenttien laskemiselle.

Niinpä kromosomipopografiaan käytetään neljää markkeria: kromosomiluku, olkapään symboli, piirin numero ja segmentin numero tietyllä alueella. Esimerkiksi 6p21.3 ennätys tarkoittaa, että puhumme 6. Kromosomin pari, sen lyhyt varsi, alue 21, segmentti 3. On enemmän valinnaisia merkkejä, erityisesti pter - loppuun lyhyen varren, qter - lopussa pitkän varren.

Sytogeneettisellä tutkimusmenetelmällä voidaan havaita deleetioita ja muita muutoksia kromosomeissa vain noin miljoonalla emäksellä (nukleotidit).

[1], [2], [3], [4]