Hemoblastoosien immunofenotyypin määritys

Merkittävä edistys hematologisessa tutkimuksessa viime vuosina liittyy nykyaikaisten immunologisten menetelmien ja perifeerisen veren ja luuytimen solujen automatisoitujen analyysi- ja lajittelumenetelmien - virtaussytometrien - käyttöön. Perinteiset tautia aiheuttavien solujen (veri, punainen luuydin, imusolmukkeet, perna jne.) morfologiset ja sytokemialliset tutkimukset eivät monissa tapauksissa, erityisesti lymfoproliferatiivisissa sairauksissa, mahdollista morfologisesti samankaltaisten muotojen varianttien koko kirjon tunnistamista ja patologisen kloonin alkuperän selvittämistä. Nämä ongelmat voidaan ratkaista vain tutkimalla solujen immunologisia ominaisuuksia. Jokainen hematopoieettisten solujen erilaistumisvaihe vastaa omaa antigeenijoukkoaan, jota kansainvälisen luokituksen mukaan kutsutaan erilaistumiseksi ja joka jaetaan erilaistumisklustereihin, joita kutsutaan CD:ksi.

Neoplastisissa muutoksissa erilaistumislohko voi tapahtua missä tahansa normaalin solukehityksen vaiheessa, mikä johtaa patologisten solujen kloonin muodostumiseen, jotka määrittävät taudin substraatin ja joilla on samat immunologiset (tai fenotyyppiset) ominaisuudet. Näiden markkereiden tutkimuksilla soluissa on mahdollista määrittää, mihin taudin muotoon ja varianttiin ne vastaavat, eli solujen immunologisen fenotyypin perusteella suorittaa erotusdiagnostiikka, mikä on vaikeinta lymfoproliferatiivisissa sairauksissa, koska taudin patologisen substraatin pääsolut ovat morfologisesti lähes identtisiä soluja.

Fenotyypitys mahdollistaa monoklonaalisten vasta-aineiden käytön myelo-, mono- ja lymfosyyttisten sarjojen blastisolujen ja kypsien verisolujen tyypittämiseen soluseinässä olevien erilaistumisantigeenien (reseptorien) perusteella. Luvussa "Kehon immuunitilan arviointi" kuvataan osittain solumerkkiaineiden tutkimuksen ominaisuuksia ja diagnostista arvoa; alla on lyhyt kuvaus solujen antigeenimarkkereista hemoblastoosien diagnosoinnin yhteydessä. Seuraavia antigeenejä (markkereita) voidaan havaita verisolujen ja punaisen luuytimen kalvoilla.

• CD2 on monomeerinen transmembraaninen glykoproteiini. Sitä esiintyy kaikkien veressä kiertävien T-lymfosyyttien pinnalla ja joillakin NK-lymfosyyteillä. CD2 osallistuu T-lymfosyyttien vaihtoehtoiseen aktivaatioprosessiin. Kliinisessä käytännössä CD2:n havaitsemista monoklonaalisilla vasta-aineilla käytetään akuutin T-soluleukemian, lymfoomien, kroonisten tulehduksellisten ja immuunipuutostilojen fenotyypitykseen.
• CD3 on antigeenispesifiseen T-solureseptoriin liittyvä proteiinikompleksi, joka on T-lymfosyyttien tärkein toiminnallinen markkeri. Se helpottaa aktivaatiosignaalin siirtymistä solukalvolta solun sytoplasmaan. CD3:n määritys on tarkoitettu akuutin T-soluleukemian, lymfoomien (CD3:a ei ilmenny ei-T-soluisissa lymfoidikasvaimissa) ja immuunipuutossairauksien diagnosointiin.
• CD4 on transmembraaninen glykoproteiini, jota ilmentää osa T-auttajasoluista (indusoijista), jotka muodostavat 45 % perifeerisen veren lymfosyyteistä. Lymfosyyttien kehityksen alkuvaiheessa kateenkorvassa kaikki aivokuoren lymfosyytit ilmentävät CD4-antigeenejä sekä CD8:aa. Medullaariset tymosyytit, joiden fenotyyppi on samanlainen kuin perifeerisen veren kypsät CD4+ T-solut (T-auttajasolut), ilmentävät jo joko CD4- tai CD8-reseptoreita. Perifeerisessä veressä jopa 5 % soluista kantaa sekä CD4- että CD8-markkereita. CD4:n vähäinen ilmentyminen on mahdollista joissakin monosyyttisen sarjan soluissa. CD4:ää ilmentyy useimmissa T-solulymfoomissa, mukaan lukien mycosis fungoides, sekä HTLV:hen liittyvässä T-soluleukemiassa (HTLV - ihmisen T-lymfotrooppinen virus).
• CD5 on yksiketjuinen glykoproteiini, jota esiintyy kaikissa kypsissä T-lymfosyyteissä ja useimmissa tymosyyteissä, ja B-lymfosyytit ilmentävät sitä heikosti. CD5:tä havaitaan B-solujen kroonisen lymfosyyttisen leukemian ja sentrosyyttisen lymfooman neoplastisissa soluissa. Muissa pahanlaatuisissa lymfaattisissa sairauksissa – follikulaarisessa lymfoomassa, karvasoluleukemiassa, suurisoluisessa lymfoomassa – CD5:tä ei ilmenny.
• CD7 on yksiketjuinen proteiini, T-solujen erilaistumisen varhaisin markkeri. Pro-T-lymfosyytit ilmentävät sitä jo ennen niiden siirtymistä kateenkorvaan. CD7:ää havaitaan useimmissa NK-soluissa, heikko ilmentyminen havaitaan monosyyteissä. B-lymfosyytit ja granulosyytit eivät sisällä tätä antigeenia. CD7-määritystä käytetään lymfoomien ja lapsuusiän T-solulymfoblastileukemian diagnosointiin.
• CD8 on proteiini, joka koostuu kahdesta disulfidisiltojen yhdistämästä polypeptidiketjusta. Sitä ilmentää sytotoksisten ja suppressori-T-lymfosyyttien alaryhmä, jotka muodostavat 20–35 % perifeerisen veren lymfosyyteistä. Tätä antigeenia ilmentävät myös NK-lymfosyytit, aivokuoren tymosyytit, 30 % medullaarisista tymosyyteistä ja punaisten luuytimien alaryhmä. CD8:aa tutkitaan T-suppressorien pitoisuuden määrittämiseksi (katso yllä oleva kohta ”Suppressori-T-lymfosyytit veressä”).

• CD10 on solukalvoon liittyvä endopeptidaasi. CD10:tä ilmentävät nuoret B-lymfosyyttien muodot ja aivokuoren lymfosyyttien alaryhmä. CD10:tä ilmentävät kaikki ALL-solut.
• CD11c:tä ilmentävät solukalvolla makrofagit, monosyytit, granulosyytit, NK-solut ja karvasoluleukemiasolut.
• CD13 on glykoproteiini, jota ilmentävät myelomonosyyttilinjan solut (progenitorisolut, neutrofiilit, basofiilit, eosinofiilit, monosyytit ja myelooiset leukemiasolut). Sitä ei esiinny T- ja B-lymfosyyteissä, punasoluissa ja verihiutaleissa.
• CD14 on pintakalvon glykoproteiini. Sitä ilmentävät pääasiassa monosyytit ja makrofagit. CD14:ää havaitaan yli 95 %:ssa monosyyteistä ääreisveressä ja luuytimessä. CD14:n voimakasta ilmentymistä havaitaan akuutissa myeloblastileukemiassa. Tätä antigeeniä ei ilmenny akuutissa ja kroonisessa lymfaattisessa leukemiassa.
• CD15 on oligosakkaridi. Se osallistuu fagosytoosiin ja kemotaksiaan. Tätä antigeenia esiintyy kypsien granulosyyttien ja Berezovsky-Sternberg-solujen pinnalla. CD15-antigeenin ilmentymistä havaitaan Hodgkinin taudissa. Non-Hodgkinin lymfoomissa CD15:tä ei useimmissa tapauksissa havaita.
• CD16-soluja ilmentyy granulosyyttien, monosyyttien, makrofagien ja NK-solujen pinnalla. Kaikilla tätä antigeeniä ilmentävillä lymfosyyteillä on kyky vasta-aineriippuvaiseen solun sytotoksisuuteen. CD16-soluja määritetään kroonisten myelosyyttileukemian tyypityksen aikana NK-solujen karakterisoimiseksi.
• CD19 on glykoproteiini, jota esiintyy kaikissa perifeerisissä B-lymfosyyteissä ja kaikissa B-solujen esiasteissa. Sitä ei esiinny plasmasoluissa. Se on B-solujen varhaisin merkki ja sillä on tärkeä rooli B-solujen aktivaation ja lisääntymisen säätelyssä. CD19:ää ilmentyy kaikissa B-soluperäisissä akuutin leukemian neoplastisissa soluissa ja sitä esiintyy myös joissakin akuutin monoblastisen leukemian muodoissa.
• CD20 on glykosyloimaton proteiini. B-lymfosyyttien ontogeneesissä CD20-antigeeni esiintyy CD19:n jälkeen lymfosyyttien esi-B-solu-erilaistumisvaiheessa. Sitä ei esiinny plasmasolujen solukalvolla. Sitä ilmentyy ALL:ssa, B-solujen kroonisessa lymfosyyttisessä leukemiassa, karvasoluleukemiassa, Burkittin lymfoomassa ja hyvin harvoin akuutissa monoblastileukemiassa.
• CD21 on glykoproteiini, jota esiintyy merkittäviä määriä imukudosten B-lymfosyyteissä ja pieniä määriä perifeerisen veren B-soluissa. CD21 on Epstein-Barr-viruksen reseptori.
• CD22 on kahdesta polypeptidiketjusta koostuva proteiini. Sitä ilmentyy useimpien B-lymfosyyttien, myös esiasteiden (prolymfosyyttien), kalvolla. Antigeeniä ei ilmenny B-lymfosyyteissä (plasmasoluissa) niiden aktivaation jälkeen. CD22:n ilmentyminen on voimakkainta karvasoluleukemian soluissa, heikkoa myelooisessa leukemiassa ja ei-T-solu-ALL:ssa.
• CD23 on glykoproteiini, jota ilmentävät paljon enemmän aktivoituneet perifeerisen veren B-lymfosyytit. CD23 välittää IgE-riippuvaista sytotoksisuutta ja makrofagien ja eosinofiilien fagosytoosia.
• CD25 on yksiketjuinen glykoproteiini, joka on tunnistettu IL-2:n matalan affiniteetin reseptoriksi. Tätä reseptoria ilmentyy aktivoituneissa T-lymfosyyteissä ja pienemmässä tiheydessä aktivoituneissa B-soluissa. Terveiden yksilöiden ääreisveressä antigeenia on yli 5 %:ssa lymfoidisoluista.
• CD29 on fibronektiinireseptori. Se on laajalti levinnyt kudoksiin ja leukosyytit ilmentävät sitä. CD29:n havaitsemista perifeerisen veren soluissa käytetään tyypin 2 auttajasoluiksi (Th2) kutsuttujen T-solujen alaryhmän tyypittämiseen. Nämä solut osallistuvat humoraaliseen immuunivasteeseen tuottamalla lymfokiineja.
• CD33 on transmembraaninen glykoproteiini. Sitä esiintyy myeloidi- ja monosyyttisolujen pinnalla. Sitä löytyy monosyyttien ja vähäisemmässä määrin granulosyyttien pinnasta perifeerisessä veressä. Noin 30 % punasoluista, mukaan lukien myeloblastit, promyelosyytit ja myelosyytit, ilmentää CD33:a. Antigeeni puuttuu pluripotenttien kantasolujen kalvoista. CD33-määritystä käytetään solujen karakterisointiin myeloidista alkuperää olevissa leukemioissa. Lymfoidi- ja erytroidiperäiset leukemiasolut eivät ilmennä CD33:a.
• CD34 on fosfoglykoproteiini, jota hematopoieettiset progenitorisolut, mukaan lukien monopotentit kantasolut, ilmentävät. Ag:n ilmentyminen on voimakkainta varhaisissa progenitorisoluissa; solujen kypsyessä markkereiden ilmentyminen vähenee. CD34:ää löytyy myös endoteelisoluista. CD34-määritystä käytetään solujen karakterisointiin akuuteissa myeloblastisissa ja lymfoblastisissa leukemioissa. Kroonisissa lymfosyyttisissä leukemioissa ja lymfoomissa CD34-antigeenin ilmentymistä ei havaita.

• CD41a:ta ilmentävät verihiutaleet ja megakaryosyytit. CD41a:n havaitsemiseen tarkoitettuja monoklonaalisia vasta-aineita käytetään megakaryoblastileukemian diagnosointiin. Glanzmannin trombastheniassa tämän antigeenin ilmentyminen puuttuu tai on merkittävästi heikentynyt.
• CD42b on kalvoglykoproteiini, joka koostuu kahdesta polypeptidiketjusta. Markkeri havaitaan verihiutaleiden ja megakaryosyyttien pinnalla. Kliinisessä käytännössä CD42b:n havaitsemista käytetään trombosytopenian - Bernard-Soulierin oireyhtymän - diagnosointiin.
• CD45RA kuuluu transmembraanisten glykoproteiinien luokkaan. Se on yleinen leukosyyttien antigeeni. Sitä ilmentyy B-lymfosyyttien solukalvolla, vähäisemmässä määrin T-lymfosyyttien ja kypsien medullaaristen tymosyyttien kalvolla. Granulosyytit eivät ilmennä markkeria.
• CD45RO on CD45RA:n pienimolekyylinen isoformi, yleinen leukosyytti-antigeeni. Sitä havaitaan T-soluissa (muisti-T-lymfosyytit), B-lymfosyyttien, monosyyttien ja makrofagien alaryhmässä. CD45RO:n monoklonaaliset vasta-aineet ovat vuorovaikutuksessa useimpien tymosyyttien, lepotilassa olevien CD4+- ja CD8+-T-lymfosyyttien alaryhmän sekä kypsien, aktivoituneiden T-solujen kanssa. Myös myelomonosyyttistä alkuperää olevat solut, granulosyytit ja monosyytit kantavat tätä antigeenia. Sitä havaitaan sentroblastisissa ja immunoblastisissa lymfoomissa.
• CD46 on O-glykosyloitu dimeeri. Se on laajalti levinnyt kudoksiin ja sitä ilmentävät T- ja B-lymfosyytit, monosyytit, granulosyytit, NK-solut, verihiutaleet, endoteelisolut ja fibroblastit, mutta sitä ei esiinny punasolujen pinnalla. CD46 suojaa kudoksia komplementilta.
• CD61 on verihiutaleiden antigeeni. Sitä ilmentyy perifeerisen veren ja punaisen luuytimen verihiutaleissa sekä megakaryosyyteissä ja megakaryoblasteissa. Sen määritystä käytetään markkerina akuutissa megakaryoblastileukemiassa. Antigeenin ilmentyminen puuttuu tai on suppressoitu Glanzmannin trombastheniaa sairastavilla potilailla.
• CD95, jota kutsutaan myös Fasiksi tai APO-1:ksi, on transmembraaninen glykoproteiini, joka kuuluu tuumorinekroositekijäreseptoriperheeseen. Sitä ilmentyy merkittäviä määriä perifeerisen veren T-lymfosyyteissä (CD4+ ja CD8+) ja vähäisemmässä määrin B-lymfosyyteissä ja NK-soluissa. Tätä antigeenia ilmentyy myös granulosyyteissä, monosyyteissä, kudossoluissa ja neoplastisissa soluissa. CD95:n sitoutuminen Fas-ligandiin (CD95L) indusoi apoptoosia soluissa.
• CD95L eli Fas-ligandi on tuumorinekroositekijäreseptoriperheeseen kuuluva kalvoproteiini. Tätä antigeenia ilmentävät sytotoksiset T-lymfosyytit, NK-solut ja hyvin usein kasvainsolut; se on solujen apoptoosin tärkein indusoija.
• HLA-DR on ihmisen pääkudosyhteensopivuuskompleksin (HLA) luokan II molekyylien monomorfinen determinantti. Markkeria ilmentyy Langerhansin soluissa, lymfoidisten elinten dendriittisoluissa, tietyntyyppisissä makrofageissa, B-lymfosyyteissä, aktivoituneissa T-soluissa ja kateenkorvan epiteelisoluissa. Tämän markkerin tutkimusta käytetään aktivoituneiden T-lymfosyyttien, joilla on CD3+ HLA-DR+ -fenotyyppi, kvantitatiiviseen määritykseen.

Käyttämällä erilaista valikoimaa monoklonaalisia vasta-aineita markkereihin, on mahdollista luoda fenotyyppinen muotokuva soluista, jotka ovat ominaisia tietylle leukemian muodolle.

Hemoblastoosien diagnostiikassa ja erotusdiagnostiikassa käytettävien immunofenotyypitysmenetelmien lisäksi niiden käyttö hoitoprosessissa remission tilan ja leukemiasolujen jäännöspopulaation arvioimiseksi on osoittautunut erityisen tärkeäksi. Tietämällä blastisolujen fenotyyppisen "muotokuvan" diagnoosin tekoaikana nämä markkerit mahdollistavat leukemiakloonin solujen havaitsemisen remission aikana ja niiden määrän kasvun perusteella uusiutumisen kehittymisen ennustamisen kauan ennen (1-4 kuukautta) sen kliinisten ja morfologisten oireiden ilmaantumista.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]