Lääketieteen asiantuntija
Uudet julkaisut
Polymeraasiketjureaktio (PCR) tartuntatautien diagnosoinnissa
Viimeksi tarkistettu: 05.07.2025
Kaikki iLive-sisältö tarkistetaan lääketieteellisesti tai se tarkistetaan tosiasiallisen tarkkuuden varmistamiseksi.
Meillä on tiukat hankintaohjeet ja vain linkki hyvämaineisiin mediasivustoihin, akateemisiin tutkimuslaitoksiin ja mahdollisuuksien mukaan lääketieteellisesti vertaisarvioituihin tutkimuksiin. Huomaa, että suluissa ([1], [2] jne.) Olevat numerot ovat napsautettavia linkkejä näihin tutkimuksiin.
Jos sinusta tuntuu, että jokin sisältö on virheellinen, vanhentunut tai muuten kyseenalainen, valitse se ja paina Ctrl + Enter.
PCR on yksi DNA-diagnostiikkamenetelmistä, jonka avulla voidaan lisätä bakteerien tai virusten genomin (DNA) havaitun osan kopioiden määrää miljoonia kertoja käyttämällä DNA-polymeraasientsyymiä. Testattu, tietylle genomille spesifinen nukleiinihappoosa moninkertaistetaan (amplifioidaan) useita kertoja, mikä mahdollistaa sen tunnistamisen. Ensin bakteerien tai virusten DNA-molekyyli jaetaan kahteen ketjuun kuumentamalla, sitten syntetisoitujen DNA-alukkeiden läsnä ollessa (nukleotidisekvenssi on spesifinen määritettävälle genomille) ne sitoutuvat komplementaarisiin DNA-osiin, ja toinen nukleiinihappoketju syntetisoidaan jokaisen alukkeen jälkeen termostabiilin DNA-polymeraasin läsnä ollessa. Saadaan kaksi DNA-molekyyliä. Prosessi toistetaan useita kertoja. Yksi DNA-molekyyli, eli yksi bakteeri- tai viruspartikkeli, riittää diagnostiikkaan. Lisävaiheen lisääminen reaktioon - DNA-synteesi RNA-molekyylillä käänteiskopioijaentsyymin avulla - mahdollisti RNA-virusten, kuten HCV-viruksen, testaamisen. PCR on kolmivaiheinen prosessi, joka toistuu syklisesti: denaturaatio, alukkeen hehkutus, DNA-synteesi (polymerointi). Syntetisoitu DNA-määrä tunnistetaan ELISA:lla tai elektroforeesilla.
PCR-menetelmässä voidaan käyttää erilaisia biologisia materiaaleja – veriseerumia tai -plasmaa, virtsaputken kaapimista, koepalaa, pleuranestettä, aivo-selkäydinnestettä jne. PCR-menetelmää käytetään ensisijaisesti tartuntatautien, kuten virushepatiitti B:n, virushepatiitti C:n, virushepatiitti D:n, CMV-infektion, sukupuolitautien (gonorrea, klamydia, mykoplasma, ureaplasmainfektiot), tuberkuloosin, HIV-infektion jne. diagnosointiin.
PCR:n etu tartuntatautien diagnosoinnissa muihin tutkimusmenetelmiin verrattuna on seuraava:
- tartuntataudinaiheuttaja voidaan havaita missä tahansa kehon biologisessa ympäristössä, mukaan lukien biopsian aikana saatu materiaali;
- tartuntataudit on mahdollista diagnosoida taudin varhaisimmissa vaiheissa;
- tutkimustuloksia on mahdollista arvioida kvantitatiivisesti (kuinka monta virusta tai bakteeria tutkittavassa materiaalissa on);
- menetelmän korkea herkkyys; esimerkiksi PCR:n herkkyys hepatiitti B -viruksen DNA:n havaitsemisessa verestä on 0,001 pg/ml (noin 4 × 102 kopiota /ml), kun taas haaroittuneita koettimia käyttävän DNA-hybridisaatiomenetelmän herkkyys on 2,1 pg/ml (noin 7 × 105 kopiota /ml).
[