PCR-menetelmä geneettisten sairauksien diagnosoimiseksi
Viimeksi tarkistettu: 23.04.2024
Kaikki iLive-sisältö tarkistetaan lääketieteellisesti tai se tarkistetaan tosiasiallisen tarkkuuden varmistamiseksi.
Meillä on tiukat hankintaohjeet ja vain linkki hyvämaineisiin mediasivustoihin, akateemisiin tutkimuslaitoksiin ja mahdollisuuksien mukaan lääketieteellisesti vertaisarvioituihin tutkimuksiin. Huomaa, että suluissa ([1], [2] jne.) Olevat numerot ovat napsautettavia linkkejä näihin tutkimuksiin.
Jos sinusta tuntuu, että jokin sisältö on virheellinen, vanhentunut tai muuten kyseenalainen, valitse se ja paina Ctrl + Enter.
PCR on uusi saavutus molekyyligenetiikassa, jota käytetään DNA-monistukseen ja sallii DNA: n spesifisen osan (eli mikä tahansa mielenkiinnon kohteena oleva geeni) replikoituu nopeasti in vitro yli 200 000 kertaa. Reaktion suorittamiseksi riittää yhden solun DNA-materiaalin saanti; PCR: llä monistetun DNA: n määrä on niin suuri, että tämä DNA voidaan yksinkertaisesti värjätä (käyttämällä radioaktiivisia koettimia elektroforeesin jälkeen ei tarvita). Edellytyksenä PCR: n johtamiselle on monistetun DNA-alueen nukleotidisekvenssin tuntemus keinotekoisesti syntetisoitujen alukkeiden oikeaan valintaan.
Tällä hetkellä, PCR on prosessi, joka tapahtuu yhdessä putkessa ja joka koostuu toistuvista monistussykliä (kopiointi, kopio) spesifisten DNA-sekvenssien saamiseksi riittävän suuren määrän kopioita, jotka voidaan tunnistaa elektroforeesilla. Yksi keskeinen osa reaktion - "alukkeet" - synteettisiä oligonukleotideja, joka koostuu 20-30 emästä täydentävä "Sites" (alueet) hehkutus (yhteys) on tunnistettavissa osan templaatti-DNA.
PCR etenee automaattisesti ohjelmoitavassa termostaatissa - termosyklissä (thermocycler). Kolmivaiheinen aikana, joka jäljennöksiä saadaan tunnistettavissa osan templaatti-DNA, toistettiin 30-50 kertaa mukaisesti ennalta määrätyn ohjelman lämpösyklilaitteella. Ensimmäisessä syklissä oligopramerit hybridisoituvat alkuperäisen templaatti-DNA: n kanssa ja sitten (myöhemmissä sykleissä) ja vasta syntetisoitujen DNA-molekyylien kanssa, kun ne kerääntyvät reaktioseokseen. Jälkimmäisessä tapauksessa DNA: n synteesi ei pääty johtuen lämpötilajärjestelyn muutoksesta, mutta kun se on saavuttanut monistetun alueen DNA-polymeraasirajan, joka määrittää uuden syntetisoidun DNA-alueen koon yhdelle nukleotidille.
Menetelmänä saaduille DNA-molekyyleille käytetään elektroforeesia, jonka avulla vahvistettu materiaali jaetaan amplikonien (monistustuotteet) koon mukaan.
PCR: n avulla on mahdollista suoraan tutkia putatiivisten mutaatioiden tai polymorfisten kohtien lokalisointipaikkoja ja myös tutkia DNA: n muita erityispiirteitä.
[