Lääketieteen asiantuntija
Uudet julkaisut
PCR geneettisten sairauksien diagnosointimenetelmänä
Viimeksi tarkistettu: 04.07.2025
Kaikki iLive-sisältö tarkistetaan lääketieteellisesti tai se tarkistetaan tosiasiallisen tarkkuuden varmistamiseksi.
Meillä on tiukat hankintaohjeet ja vain linkki hyvämaineisiin mediasivustoihin, akateemisiin tutkimuslaitoksiin ja mahdollisuuksien mukaan lääketieteellisesti vertaisarvioituihin tutkimuksiin. Huomaa, että suluissa ([1], [2] jne.) Olevat numerot ovat napsautettavia linkkejä näihin tutkimuksiin.
Jos sinusta tuntuu, että jokin sisältö on virheellinen, vanhentunut tai muuten kyseenalainen, valitse se ja paina Ctrl + Enter.
PCR on molekyyligenetiikan uusi saavutus, jota käytetään DNA:n monistamiseen ja joka mahdollistaa tietyn DNA-alueen (eli minkä tahansa kiinnostuksen kohteena olevan geenin) nopean lisääntymisen in vitro yli 200 000 kertaa. Reaktion suorittamiseen riittää yhden solun DNA-materiaali; PCR:llä monistetun DNA:n määrä on niin suuri, että tämä DNA voidaan yksinkertaisesti värjätä (radioaktiivisten koettimien käyttöä elektroforeesin jälkeen ei tarvita). PCR:n suorittamisen edellytyksenä on monistetun DNA-alueen nukleotidisekvenssin tuntemus keinotekoisesti syntetisoitujen alukkeiden oikean valinnan mahdollistamiseksi.
Tällä hetkellä PCR on yksiputkiprosessi, joka koostuu toistuvista tietyn DNA-molekyylisekvenssin monistussykleistä (lisääntyminen, kopiointi), jotta saadaan riittävän suuri määrä kopioita, jotka voidaan tunnistaa elektroforeesilla. Yksi reaktion keskeisistä komponenteista on "alukkeet" - synteettiset oligonukleotidit, jotka koostuvat 20-30 emäksestä ja jotka ovat komplementaarisia matriisi-DNA:n tunnistetun alueen hehkutus- (kiinnittymis-) "kohtien" (alueiden) kanssa.
PCR tapahtuu automaattisesti ohjelmoitavassa termostaatissa - lämpösyklerissä (vahvistimessa). Kolmivaiheinen sykli, joka johtaa matriisi-DNA:n tunnistetun osan tarkkoihin kopioihin, toistetaan 30-50 kertaa määritetyn lämpösykleriohjelman mukaisesti. Ensimmäisessä syklissä oligoprimeerit hybridisoituvat alkuperäisen matriisi-DNA:n kanssa ja sitten (seuraavissa sykleissä) vasta syntetisoitujen DNA-molekyylien kanssa niiden kertyessä reaktioseokseen. Jälkimmäisessä tapauksessa DNA-synteesi ei pääty lämpötilan muutoksen seurauksena, vaan monistetun osan DNA-polymeraasirajan saavuttamisen myötä, joka määrittää vasta syntetisoidun DNA-osan koon yhden nukleotidin tarkkuudella.
Elektroforeesia käytetään menetelmänä saatujen DNA-molekyylien havaitsemiseksi, jonka avulla monistettu materiaali erotellaan amplikonien (amplifikaatiotuotteiden) koon mukaan.
PCR:ää voidaan käyttää epäiltyjen mutaatioiden tai polymorfisten kohtien sijaintien suoraan tutkimiseen sekä muiden spesifisten DNA-ominaisuuksien esiintymisen tutkimiseen.
[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]