Kokeellinen työ allogeenisten keratinosyyttien siirtämiseksi keinotekoisesti luotuihin valkoisten rottien arpeihin

Halu käyttää solupotentiaalia ja tarve etsiä uusia tehokkaita menetelmiä arpien esteettisen ulkonäön parantamiseksi johti ajatukseen yrittää tutkia keratinosyyttien elinsiirron mahdollisuutta arpia pinnoille.

Jotta voidaan osoittaa mahdollisuutta käyttää keratinosyyttikasvualustan parantaa arpien kokeellista työtä on tehty valkoinen laboratorio rotilla, jotka ovat syntyneet arpi pinta. Rottien pötsin malli saatiin keinotekoisesti haavoittuneiden haavojen parantumisesta takana selkärankaa pitkin. Rotat leikattiin kappaletta samaa nahka, koko 2x3 cm. Kun 2,5 kuukausi leikkauksen jälkeen "simulointi arpeutuminen" rotilla suoritettiin dermabraasiota leikkaus (poisto ylempien kerrosten kautta ignioperation pötsin) ja siirrettyjen allogeenisia keratinosyyttejä, eristetty ihon nuorten rottien 2-4 päivää syntymän jälkeen.

Rotan epidermosyyttien eristäminen ja kasvu suoritettiin seuraavien tekniikoiden Cytology RAS -tekniikan solutekniikan laboratoriossa.

Iho pestiin Hankin suolaliuosta, joka sisälsi 200 U / ml gentamysiiniä, leikataan pieniksi paloiksi, alue 0,2-0,5 cm ². Ihakuoria inkuboitiin 0,5%: n disaspaasiliuoksessa tasapainotetussa suolaliuosfosfaattipuskuroidussa liuoksessa 37 ° C: ssa tunnin ajan. Kappaleet siirrettiin sitten Dulbecco'n fosfaattipuskuroituun suolaliuokseen ja epidermi erotettiin dermiksestä. Epidermiksen inkuboitiin 0,125% trypsiiniä, liuos 10-15 minuuttia samalla sekoittaen nopeudella 50 kierrosta / min, jonka jälkeen entsyymi oli pysäytettiin lisäämällä 5% naudan sikiön seerumia. Kolmasosa tuloksena saatua solususpensiota siirrettiin käyttää puhtaassa muodossa yhden vaihtoehdoista solusiirtoa arvet, toinen kolmannes kasvatettiin kotimaan bioyhteensopivan kalvon pinnoite "Polipor", kolmas - on petrimaljaan ilman substraattia. Toiminta Dermabrasion saatu arpeutumista rotissa sen jälkeen siirtää ne epidermotsitov rotan nukutuksessa suoritettiin käyttäen cautery.

Ensimmäisen ryhmän rottien jälkeen dermabraasiota kiillotettu, pestiin suolaliuoksella ja kuivattiin pinta steriili pötsissä päällekkäin kappaletta nurmikon, joka on talletettu salattu allogeenisen rotan epidermotsitov liete, jonka konsentraatio on 1500000 solua per 1 ml (mukaan Institute of sytologian). Batistovye-kappaleet sopivat kiillotettuun arpiin niin, että solut sijaitsevat arven pinnalla. Side päälle useita kerroksia juustokangasker-, joka on ommeltu reunat arpi.

Osa tuloksena olevasta solususpensiosta laitettiin Petri-astioihin steriileillä Polypore-kalvoilla, jotka oli leikattu kuppien muotoon ja toinen osaan Petri-astioilla ilman kalvoa. Viljely suoritettiin FAD-alustassa, joka koostui DMEM: n ja F12: n seoksesta suhteessa 3: 1. Lisäämällä 10% naudan sikiön seerumia, 5 ug / ml insuliinia (Sigma), 0,5 ug / ml hydrokortisoniheksisukkinaattia (Sigma). 10 ug / ml epidermaalinen kasvutekijä EGF (Institute of Cytology RAS, Pietari). Toisen ja kolmannen ryhmiä, joissa oli 7 yksilöä, käytettiin 6 päivän kuluttua ensimmäisestä. Tällä kertaa monikerroksiset kerrokset muodostettiin kylvettyjen keratinosyyttien suspensiosta petrimaljoissa, jotka oli siirretty rotille. Toinen ryhmä siirrettiin kalvon epidermosyytteihin, kolmas ryhmä - monikerroksisella kerroksella ilman substraattia. 7 päivän kuluttua monistetut kerrokset, jotka olivat kylvettyjä Polypore-kalvoille, siirrettiin viljelemällä suoraan haavan pinnalle. Yläpuolella, kalvo, jotta vältettäisiin sen repimisen, kiinnitettiin monikerroksisella sideharsoilla ja ommeltu ratsojen iholle.

Ennen istuttamisen keratinosyyttien kolmannen ryhmän rottien, viljelty ilman substraattia, joka tuottaa erottamisen PAC pohjasta petrimaljan Dispaasikäsittely, jolla on kyky selektiivisesti rikkoa dermoepidermaalisen viestintä. Vaikutuksen alaisena monikerroksisen säiliön dispaasiliuosta tuhoaa yhteys tyvisolukerroksessa pohjaan petrimaljan ja paljon vähäisemmässä määrin, se vaikuttaa solujen viestinnän, joka tekee mahdolliseksi "poistaa" koko kerros. Monikerroksisen soluskerroksen erottaminen hajotuksella suoritettiin seuraavasti. Petri astiat sekoitettu kuljetusväliaineen, solulevyt pestiin kolme kertaa, joka sisälsi antibiootteja, erityisesti - gentamysiiniä (0,2 mg / ml). Monikerroksinen kerrokset kaadettiin 0125% dispaasi liuos ( «Sigma») ja sijoitettiin inkubaattoriin, jossa niitä inkuboitiin t = 37 ° C: ssa 20-30 minuutin ajan. Ulkonäkö valkoinen teriö, kuorinta kehän ympäri säiliön - indikaattori alussa prosessin erottamalla sen reunat ja pohja petrimaljaan. Muutaman minuutin kuluttua aloittamisesta erotusprosessi, dispaasi liuos tyhjennettiin 2-3 kertaa epiteelisolujen kerrokset pestiin väliaineessa. Pinnalla epidermaalisen kerroksen levitettiin, leikattu kuppi pala steriiliä haavaside "Leith-väri, joka pilkkoutuu erotetaan dispaasi muodostumista, lisäksi halkeilemista kupin pohjaa lastalla. Käyttäminen oftalmisten pinsetit kerros yhdessä päällysteen siteen" Leithin-väri "(venäjäksi ) rikkoi pois pohjasta petrimaljaan ja siirrettiin varovasti valmisteltuun pintaan arpi. Lautasliinat "lita-väri" sisältää sen koostumus ja gentamisiini eksolin (kollageeniuutteessa), joka silloin, kun märkä ympäristö pysyy versoa tulevaisuudessa Shem suolaliuosta turposi ja muuttui moderni haava pinnoite, joka antaa hyvän suojan ulkoisilta infektio ja nopea paraneminen johtuu alkavaan kosteuteen rakennetta.

Polyprop-kalvot ja Lita-värilliset lautasliinat kerättiin rypytetyillä sidoksilla, jotka oli ommeltu rottien iholle kestävämmäksi kiinnittämiseksi. Jokainen rotta istutettiin erilliseen häkkiin, jotta saatiin optimaaliset olosuhteet elinsiirtymän keratinosyyttien ylläpitämiselle ja sitoutumiselle. Siteet rotilla että transplantoitu suspensio ja monikerroksinen säiliö epidermotsitov laukaus dispaasi, joka päivä useita kertoja päivässä, kostutetaan steriilillä suolaliuoksella luoda suotuisat olosuhteet solujen juurtumista. Ottaen huomioon, että "Polipor" kalvo oli vettä läpäisemätön, rottien toisen ryhmän kostutus kääreet ei suoriteta, joka oli yksi eduista kalvojen ilman elinsiirtoja. 10 päivän kuluttua sidokset poistettiin. Psittakoosin arpeutumista solujen siirtämistä ei juuri poikkea elinsiirtoa ilman arpia, paitsi vaaleanpunainen väritys heitä (kautta dermabrasion) ja kuorinta. Tämä tosiasia viittaa siihen. Että välittömästi haavojen päällystysten katoamisen jälkeen IPC: llä pötsissä ei tapahtunut muutoksia.

Otetaan biopsia-aine rotilla.

1, 2, 5 ja 9 kuukauden kuluttua rotan alogeenisten keratinosyyttien siirtämisestä valkoisten rottien maaleihin, materiaali otettiin histologiseen, sytomorfologiseen ja elektronimikroskooppiseen tutkimukseen. Koska kontrollinäytteet normaalista rotan ihosta ja arpeesta otettiin ilman solujen elinsiirtoa. Rotilla tehty anestesia suoritettiin eetterianestesialla.

Anestesian jälkeen merkityistä alueista, joihin keratinosyyttejä siirrettiin, biopsia läpäisevä läpimitta oli 2 mm. Osat arven kudosta otettiin ja sijoitettiin 2,5-prosenttiseen glutaraldehydiliuokseen materiaalin valmistamiseksi elektronimikroskopiaan. Kudospalaa ottanut histologista tutkimusta varten asetettiin 10% neutraaliin formaliiniliuokseen, minkä jälkeen läpi johdotus alkoholeja ja täytettiin parafiini, minkä jälkeen leikkaamisen ohuita leikkeitä ja katsella niitä valoa optisella mikroskoopilla.

Kontrolli I. Normaali rotan iho.

Jotta voidaan nähdä eroa mikroskooppisen kuvan välillä rottien ja arpia normaalin heikentyneen ihon suhteen tiettyinä aikoina IPC-transplantaation jälkeen, valokuvat ja kuvaukset niille kaikissa tämän tutkimuksen vaiheissa osoitetaan.

Normaalin ihon epidermi koostuu 7-9 solukerrosta. Horny kerros kohtalaista paksuutta. Paikoissa se koostuu 6-8 kerroksesta horny scales. Pohjakerrosta edustavat sylinterimäisen muodostavan solut, joissa on suuri valo, säännölliset ytimet ja useat nukleolit. Solujen ja pohjamembraanin väliset desmosomaliitokset ilmaistaan selkeästi. Alle hyvin määritelty tyvikalvon, joka on hieno ulkonemia subepidermaalisiin kerros sijaitsevat rinnakkain lempeä nippua kollageenin ja elastiinin kuidut, mukaan lukien pitkänomainen fibroblastit, pieniä aluksia. Syvemmissä kerroksissa kollageenin ja elastiinikuitujen niput ovat eri suuntiin. Niistä on monia astioita, joissa on samanlaisia karkeita seiniä, soluelementtejä (fibroblastit, syöttösolut, leukosyytit). Suuri määrä karvatuppien, talirauhasten.

Control 2. Karva 2 kuukauden ikäinen rotta.

Kliininen kuva. Harjat vaaleanpunaiset, kuorinta, paikoissa kuoret jäävät. Niiden pinta-ala on pienentynyt, koska supistuminen kollageenisäikeiden ja tulla noin 3,0-3,5 cm ^:. Ihon kiinnikkeet ovat poissa.

Mikroskooppinen kuva. Epidermiksen koostuu 3-5 kerroksesta solujen, laskostettu, jota edustaa pyöristetty tyvisoluissa, yksi rivi subulate, 1-2 rivit keratohyaliinijyväsiä rae jyvät ylemmässä kerroksessa, on osia, solunsisäisten turvotus. Sarveiskalvokerros muuttuu heterogeenisesti hyvin ohuesta paksunnettuun. Puhun taittuminen johtuu arpikudoksen (supistumisesta). Taitokset tunkeutuvat papillarykerrokseen ja antavat vaikutelman papillaeesta. Kehon ja ihon välinen raja on suora viiva. Perusmembraania ei voida jäljittää kaikkialla. Subepidermaalisten ja syvempien kerrosten alaosassa - paksulla, irronnut seinämalla varustetut alukset, monet autioituneet, stasisien ilmiöillä. Alukset - makrofagien, fibroblasteiden klusteri. Makrofagit ympäröivät kapillaareista peräisin olevia erytrosyyttejä ja fagocytaze niitä. Pinnallisemmissa kerroksissa - pienissä kapillaareissa. Kuoren alla kollageenikuidut ovat löysät. Puhun syvemmässä kerroksessa - kollageenikuitujen karkeita nippuja, joiden joukossa on monia fibroblasteja.

Rotan heikentyminen kuukaudessa MPAL-rotan rotan keratinosyyttien transplantaation jälkeen.

Kliininen kuva. Harjat ovat vaaleat, niiden pinta-ala laski erityisesti halkaisijaltaan ja keskimäärin 2,5-3 cm ². Hiukset ja talirauhaset puuttuvat.

Mikroskooppisen tarkastelun saadun materiaalin rottien siirto MPAlK MPAlK kalvon ja alustan ilman olennaisesti identtisiä. Kuitenkin teknisesti, työtä MPAlK tueta paljon vaikeampaa ja työlästä kuin kasvatettuna MPAlK alustalle, joten lisätutkimuksia asiasta on elinsiirron kertainotsitov arvet käytimme pohjana viljelyyn ( "alustan") kerroksellinen nurmikkoa.

Mikroskooppinen kuva. Kuoren sakeus on 15-20 kerrosta, melkein keskelle, jossa keratinosyytteillä on kapea, pitkänomainen, pystysuora muoto ja kompakti järjestely. Basalisolut on järjestetty epätasaiseen viivaan. Niiden ytimet ovat kevyitä, suuria, muodoltaan pyöreitä yhdellä tai kahdella nukleolilla, mikä osoittaa niiden korkean synteettisen ja proliferatiivisen aktiivisuuden. Kehon ja ihon välinen raja on suora viiva. Tuskallinen kerros on hyvin kehittynyt, koostuu 3-5 kerroksesta solujen pyöreä muoto, on 2 nucleolus soluja.

Välittömästi pohjamembraanin alapuolella - tiheästi sijoitetut kollageenikuitujen ohuet niput, rinnakkain niiden kanssa suuri määrä tyhjiä astioita, syvemmät kollageenikuidut ovat karkeampia, jotka on kerätty tiheisiin nippuihin. Monet suuret fibroblastit, mastoissolut (2-3 näkökentässä), makrofagit, leukosyytit ja tyhjät astiat, joiden seinät ovat löystyneet, ympäröivät ne löysästi kollageenikuituja. Joissakin aluksissa - stasis, tasaisten elementtien diapedesis. Alukset - fibroblastit, yksittäiset lymfosyytit. Ihon kiinnikkeet ovat poissa.

Kun keratinosyyttisuspensio on siirretty kiillotettuun arpiin, mikroskooppinen kuvio eroaa edellisestä. Useimmissa eläimissä - epidermis on ohut, koostuu 5-6 kerrosta soluja. Alempi kerros koostuu epäsäännöllisen, monikulmion muotoisista soluista, joiden pyöreät epäsäännölliset muotoiset ytimet ovat. Subepidermaalisen kerroksen tila on samanlainen kuin eläinten ryhmässä, jossa ei ole transplantaatiota.

Tässä tapauksessa voidaan sanoa joko viivästyminen solunsiirron mukana seuraavissa prosesseissa tai suuri suspensioon siirrettyjen solujen menetyksen. Siksi päätettiin, että keratinosyyttien transplantaation aiheuttaman arpeutumisen korjaaminen suspension muodossa ei ole sopivaa.

Rotan epämuodostus 2 kuukauden kuluttua MPAl-rotan rotan keratinosyyttien transplantaatiosta.

Kliininen kuva. Arpi näyttää ohut, tarjous. Paikoissa on ekdysi, vaa'at.

Mikroskooppiset kuvat. Sarveiskerros on paksuuntunut, paikoissa - hyperkeratoosi. Epidermis on paksuuntunut, se koostuu 12-20 rivistä soluja. Kehon ja ihon välinen raja on suora viiva. Herkät kollageenikuidut epidermiksen alla ovat melko tiukasti. Pummen syvemmissä kerroksissa ne kerätään karkeiksi suuriksi nippuiksi. Alepidermaalisessa kerroksessa esiintyy uusi alusmuoto. Alempi kerrokset arpikudoksessa - monia tyhjiä astioita, jotka sijaitsevat rinnakkain epidermiksen pinnalla. Suuret fibroblastit jakautuvat tasaisesti pötsin paksuuteen, on olemassa jättiläisiä, monitahoisia, monia makrofageja.

Rotan arpeutuminen 5 kuukautta rotan spermosyyttien MP: n transplantaation jälkeen.

Kliininen kuva. Arpi näyttää sujuvan, sileä, ilman kuorinta, on yksittäinen karva niiden suuremmasta tiheydestä kehälle arpi, joka osoittaa reuna ingrown karvatupet pötsissä ja kasvain karvatupet. Harjojen pinta-ala laskee edelleen.

Mikroskooppinen kuva. Epidermis on edelleen paksu (15-20 kerrosta, joskus jopa 30) ylemmissä kerroksissa on täynnä keratogialin jyviä. Pohjamembraani on selvästi näkyvissä. Hänen kollageenikuitujensa alla on löysä. Alemmissa kerroksissa - kollageeni on tehokkaampi ja tiiviimmin pakattu. Kollageenipalkkien joukossa on monia kapillaareja. Yläkerroksissa tyhjien alusten määrä väheni. Eteerinen ja dermis ovat hieman aaltomaisia. Arpikudoksessa on syviä epidermaalisia kehityshäiriöitä. Kollageenikuitujen joukossa on näkyviä äskettäin muodostuneita aluksia. Näyttävät yksittäisiä karvatupseja ja talirauhasten.

Rotan epämuodostuma 9 kuukautta IPA-rotan rotan epidermosyyttien transplantaation jälkeen.

Kliininen kuva. Arvet ovat paljon pienempiä kuin aikaisemmin aikoja, ja niiden pinta-ala keskimäärin noin 1,5-2,0 cm ². Harjat ovat epätasaisesti peitetty ohut hiukset, erityisesti kehällä. Pienempi pienikokoinen skaalaus säilyy.

Mikroskooppinen kuva.

Epidermi tuli ohuemmaksi, joka oli 6-8 riviä soluja, joka muistuttaa normaalien rottien ihon epidermaalista rakennetta, vain solujen tiheys 1 mm: llä. Korkeammat ja ne ovat pienempiä. Basal kerros koostuu pyöreän sylinterin muotoisista pienistä soluista. Perusmembraani on hyvin määritelty, hemidesmosomeja on selvästi nähtävissä. Tunnetaan epidermaalisten ulosteiden esiintyminen subepidermaalisessa kerroksessa. Papilläärikerros ilmaistaan koko arven pituudelta. Nämä tosiasiat osoittavat, että tämän ajanjakson aikana transplantoitujen keratinosyyttien adheesio on tullut voimakkaasti voimakkaammaksi pötsin taustalla olevilla kudoksilla. Niinpä MALC-transplantaation ihmisten arvet 9 kuukauden kuluttua IPC-transplantaatiosta voi olla perinteistä. Silmän alle ovat herkempiä kollageenikuituja kuin syvistä kerroksista. Useita aluksia oli, erityisesti pinta-alaltaan. Suuremmissa aluksissa seinät ovat paksuuntuneet. Karvatupat ja talirauhaskasvit suuria määriä. Mikroskooppinen kuvio muistuttaa ihokudosta.

Koetuotannon tulokset ja niiden keskustelu.

Tämän työn aikana on keinotekoinen iho arvet rottien käytön jälkeen dermabraasiota, siirrettyjen keratinosyyttien eri formah- Haavapinnoille, suspensiona batisti ja kerroksellinen muodostuminen ilman substraattia. Työssä tehtiin morfologisten tietojen saanti siirtotettujen allogeenisten keratinosyyttien vaikutuksesta arpoihin sekä optimaalisten transplantaattien varianttien määrittämiseen.

Todettiin, että kaikki kolme transplantaatiomenetelmää ovat todellisia, mutta IPAA: n transplantaatio ilman substraattia on erittäin työläs menettely, jonka aikana IPAC: n loukkaantuminen voi vaikuttaa elinsiirron tuloksiin. Lisäksi tämä elinsiirtomenetelmä sulkee pois työn suurilla pinnoilla.

Transplantation keratinosyyttien suspensio - on huomattavasti edullisempi menetelmä ei vaadi pitkää soluja viljellään ja yksinkertainen esillä olevassa suoritusmuodossa, kontakti käyttäen steriiliä batisti aihioita, jonka mitat vastaavat arvoa arpia. Suma terapeuttinen vaikutus, kun siirron solususpensiota noin kuukausi, verrattuna IPC haavasidokselle - ei merkittävää hetkeä, jolloin hoidon kesto määriä useita kuukausia. Tiedetään, että IPC: n elinsiirron aikana potilaiden polttamisessa ihon rakennetilan muutos tapahtui asteittain ja useita vuosia. Keratinosyyttikulttuurin transplantaatio haavan pinnoille on kätevin ja lupaava menetelmä, mutta se on myös paljon kalliimpaa. Lisäksi vaaditaan haku päivän parantaa varianttien pinnoitteita, jonka pitäisi olla taipuisa, hygroskooppinen, on bakteriostaattisia tai bakterisidinen ominaisuuksia ja olla biologisesti neutraalia soluja. Elokuva "Polipor" - väli version kotimaisen elokuvan haavapeitemateriaali huolimatta joitakin puutteita, on antanut meille mahdollisuuden tutkia kokeellisesti keratinosyyttien elinsiirtoja rottiin arvet ja tehdä päätelmiä siitä, miten tehokkaasti tähän suuntaan vetovoima arpia.

Tekijät suorittaneen elinsiirron IPC haavat palanut, totesi, että ensimmäisen viikon aikana elinsiirron jälkeen monikerroksisen säiliön keratinosyytit haavan desinfioidaan, orvaskeden paksunee ja kerrostunut. Kaikki epidermiksen kerrokset olivat hyvin määriteltyjä. On mielenkiintoista, että solujen kerrosten määrä siirroissa on 10-30% suurempi kuin ihon biopsia-näytteissä. Kirjoittajat huomasivat, että keratogialiinin rakeet ilmestyivät viidentenä päivänä MPA: n, basalumin ja hemidesmosomeiden transplantaatiosta - jo kolmantena päivänä.

J.Rives et ai. (L994), Paramonov BA (1996); NM Kuznetsov et ai. (1998) havaitsivat, että alkuvaiheessa, jaksojen transplantaation jälkeen BMD potilailla, joilla on polnosloynymi pintavikoja jälkeen palovammoja, välistä viestintää verinahan ja orvaskeden on hyvin heikko, ja se on suora viiva, papillaarinen kerros on poissa. Loppuun mennessä 2. Kuukauden alkaa muodostumista matala pötsinystyt ja ihon lisäkkeet, viestintä ihon ja orvaskeden voimistuu. Saaduilla tiedoilla govoryato elinsiirtoa allogeenista keratinosyyttejä haavasta poltetaan potilaille lupaava menetelmä. Huolimatta siitä, että allogeenisten keratinosyyttien tapahtuu esittämät eri kirjoittajien vuosina 10 päivää 3 kuukautta, mutta niillä on rooli haavan paranemista pinnan vapauttaen kasvutekijöitä ja mekaanisesti sulkemalla vika. Uskotaan, että MPAlK on vähentynyt antigeeninen aktiivisuus, kuin silloin, kun on viljelty in vitro menettää Langerhansin solut, jonka avulla ne on olemassa pitkään elimistössä vastaanottajan. Lisäksi allogeeninen kulttuuri johdettu ihon terveiden nuorten on paljon suurempi biologinen potentiaali kuin autologisen kulttuurin potilaiden jälkeen trauman.

Tutkimuksemme päätavoitteena oli selvittää, ovatko allogeeniset keratinosyytit selviävät arpeilla ja mitkä ovat muutokset heikokudoksessa tällaisen biologisesti aktiivisen "haavan pinnoitteen" vaikutuksesta. Jos saavutat positiivisen tuloksen, kehitä tehokkain ja vähiten työvoimavaltainen tekniikka tällä kuntoutuslääketieteen alalla.

Saadut tiedot monessa suhteessa osoittautuivat samanlaisiksi kuin ihmisperäisessä ihossa esiintyvien morfologisten muutosten kirjallisuustiedot, kun allogeeniset keratinosyytit siirrettiin palovammoihin. Merkittäviä eroja on kuitenkin sekä transplantoidun morfologisen substraatin että teknologian kannalta. So. Muodostumista tyvikalvon ja ihon ja orvaskeden sidoksia (poludesmosom, papillit) tapahtuu myöhemmin verrattuna siirtoon keratinosyyttien haavan pinnat ilman arpia. Tämä näyttää johtuvan pötsin kudosten heikosta ravinnosta verrattuna dermisiin tai lihaskudokseen. Huulet, varsinkin vanha, ovat tiheä sidekudos, jossa on hyvin pieni määrä aluksia, poltettavan haavan pohja on verisuonissa runsaasti rakeinen kudos. Näin ollen on ilmeistä, että olosuhteet, joissa keratinosyyttien transplantaatio ja liittäminen tapahtuu, ovat täysin erilaisia. Mitä enemmän verisuonten solujen siirron alue on, sitä helpompi on käsitellä niitä. Tästä johtopäätöksestä päädytään mieluummin työskennellä nuorten arpien kanssa, joissa sidekudos on vielä tarpeeksi löysä ja runsaasti verisuonia.

Tämän kokeellisen työn tuloksena todistetaan, että:

1. MALK: n transplantaatio arpoille on mahdollista. 
2. Optimaalinen siirtotapa on keratinosyyttien transplantaatio haavan päällä.
3. Huuhtelun pinta on jauhettava käyttäen operatiivista dermabraasia Schumannin laserilla tai leikkurilla.
4. MPALK: n vaikutuksen alaisena pötsin maanpinnan nopea epitelointi tapahtuu.
5. Parempi verisuonisairaus, esimerkiksi nuorempi arpi, sitä paremmin keratinosyyttien transplantaatiotulokset.
6. Iskeytyneiden keratinosyyttien vaikutuksen alaisena oleva arpikudos muuttuu vähitellen ja muuttuu ihon kaltaiseksi (enemmän hauras arpeuskudos, jossa on ihon appendageja).
7. Aivokudoksen asteittainen irtoaminen alkaa epäsäännöllisellä kerroksella. Parantaa sen vaskularisaatiota, kollageenikuitujen niput pötsin ylä- ja alaosissa saavat epämukavampi sijainti kuin arpikudoksessa ilman solujen siirtoa. On karvatupet ja talirauhasten. Epidermis sen rakenteessa, kulkiessaan hypertrofia-vaihe, lähestyy normaalin ihon epidermiä.
8. Havaitut muutokset liittyvät keratinosyyttien erittyy kasvutekijöitä, sytokiineja, jotka parantaminen trofismin arpikudoksen edistää siirtymistä runsaasti jäykkä sidekudos löysempi, joka johtaa parantumiseen arpi.

Siten tämän tutkimuksen perusteella voidaan päätellä, että siirrettyjen keratinosyyttien hyötykehitys heikkokudokseen, jolla saattaa olla käytännön merkitystä erilaisten arpia olevien potilaiden kuntoutuksessa.

Tämä rotilla tehtävä työ myös mahdollistaa vaatimusten muodostamisen. Haavan päällysteisiin, joihin keratinosyyttejä kasvatetaan.

Haavojen pinnoitteiden tulee olla:

• bioyhteensopiva solujen kanssa,
• hengittävä,
• on joustava, muodoltaan rakentava pohja,
• olla hydrofiilisiä,
• koska lääkevalmisteet sisältävät antibakteerisia lääkkeitä ja antioksidantit eivät ole myrkyllisiä viljellyille soluille.

Arven biotekniikan hoidon kliiniset tulokset.

Aiemmin N. Carver et ai. (1993) havaitsivat, että okklusiiviset sidokset sopivat parhaiten keratinosyyttien haavaan ja selviytymiseen, mutta eivät salli kerrostuneen (kypsän) epidermiksen muodostumista. Oksatun epidermiksen muodostamiseksi on ilmastoympäristö tarpeen. Siksi monikerroksisen kerroksen kiinnittämisen jälkeen 7-10 jälkeen käytettiin okklusiivista haavapäällystystä, jotta voitaisiin poistaa ja suorittaa haavat kuivalla siteellä tai vesiliukoisilla voiteilla. Voimme sanoa, että "substraatin" laatu ja ominaisuudet, joihin solut kasvatetaan, ovat erittäin tärkeitä solumateriaalin transplantaation tehokkuudelle ja siten lääkäreiden työn tulokselle. Nykyään ei kuitenkaan ole ihanteellista haavapäällystystä huolimatta ehdotettujen vaihtoehtojen runsaudesta (keinotekoinen nahka, karboksimetyyliselluloosan kuitukangas, fibrinipäällysteet, puoliläpäisevät polyuretaanikalvot). Ei ole merkityksetön hetki tässä asiassa "substraattien" (erityiset haavapäällysteet) kustannukset, koska niiden korkeat kustannukset lisäävät bioteknologisen käsittelyn kokonaiskustannuksia.

Solutekniikan tehokkuus on osoittautunut ajankohtaiseksi, mutta valitettavasti nämä tekniikat ovat erittäin kalliita, etenkin maissa, joissa solukokoonpanojen teollista tuotantoa ei ole luotu. Kuitenkin Yhdysvaltojen kaltaiset maat ovat jo pitkään vakiinnuttaneet teollisuutta poltettavaksi tarkoitettujen solumuovien valmistukseen. Erityisesti yhtiö BioSurface Technology Inc, vuodesta 1989, nosti 37000 laminoitu keratinosyyttikerros, joita on käytetty hoitoon 240 potilasta 79 maassa ympäri maailmaa (R.Odessey, 1992), jossa on 1 cm ² soluviljelmässä maksaa noin 7-8 $ US.

Eri tautien ja iho-ongelmien hoidossa on useita eroja, mutta solujen käsittelyn ytimessä on laadukas solumateriaalin tuotanto ja sen siirto.

Tämä prosessi koostuu seuraavista vaiheista:

• (tai luovuttajilta) ihon valinta,
• ihon läppien kuljetus biotekniikkakeskukseen,
• basaalikerroksen solujen eristäminen ja niiden lisääntyminen,
• keratinosyyttien monikerroksisten kerrosten kerääntyminen (IPC).
• soluviljelmien siirto.

Tärkein ongelma monikerroksisen keratinosyytti-kerroksen transplantaation hoidossa on elinkykyisten solujen tarve kaikissa solujen siirron vaiheissa. Autologisten tai allogeenisten solujen eristämiseen käytettävien ihokappaleiden tulisi olla mahdollisimman ohuita, koska tässä tapauksessa ne on helpompi erottaa mekaanisilla ja entsymaattisilla menetelmillä ja saada elävän solujen suspensiota kasvua varten. Ne voidaan saada katkaisemalla iho tai käyttämällä silmäluomien ihoa, esinahkaa, olkapään sisäpinta. Koska solut ovat herkkiä halogeeneille (kloori, jodi), vetyperoksidia, niitä ei voida käyttää ihon käsittelyyn materiaalin ottamisen aikana.

Kuvien kvantitatiivinen ja kvalitatiivinen saanto ihosiirroista ja niiden viljelyn tehokkuus riippuvat myös luovuttajan terveydentilasta ja iästä. Lisäksi ihon biopsia-näytteet on toimitettava laboratorioon mahdollisimman pian ja asianmukaisissa olosuhteissa (ympäristö, lämpötila) toimitettava sertifioidulle ja akkreditoituun laboratorioon.

Eaglein keskipitkällä tai keskisuurella 199: lla, jossa on 10% naudan seerumia, voidaan käyttää DMEM-alustaa, jossa on 5% naudan sikiön seerumia ja antibiootteja, säilyttämiseksi ja kuljettamiseksi ihon läpäille.

Sytologisessa laboratoriossa ihon biopsia ensin jaetaan mekaanisesti pieniksi paloiksi, minkä jälkeen iho-fragmenttien käsittely suoritetaan entsyymien avulla: trypsiini, kollagenaasi, dyspaasi jne.

Entsyymien vaikutuksesta tapahtuu desmosomeja tuhoamalla ja keratinosyyttejä vapautuu elatusaineeseen erillisinä soluina tai aggregaatteina, jotka koostuvat erilaisista solumääristä. Viljelmää varten käytetään vain basaarisia keratinosyyttejä, joita kasvatetaan erityisillä väliaineilla inkuboijissa, jotka sisältävät 5% CO: ta. Petrimaljoissa tai injektiopulloissa t = 37 ° C: ssa. 48 tunnin kuluessa havaitaan keratinosyyttien pesäkkeiden muodostumista, jotka vähitellen lähestyvät yksikerrosta. Saadun riittävän määrän soluja saatuaan suspensio levitetään tähän tarkoitukseen valmistetuilla haavasuojilla ja sijoitetaan Petri-astioihin. Suspensiosta muodostetaan ensin yksikerroksinen ja sitten monikerroksinen keratinosyytikerros. Kaaviomaisesti keratinosyyttien viljelyprosessin vaiheet on esitetty kuviossa 3. 12 (33.43.54.65).

Monikerroksisen keratinosyyttimuodostuman muodostuminen kestää yleensä 7-10 päivää. Joskus tämä aika on pidempi, mikä riippuu lähdemateriaalin laadusta (ikä, luovuttajan terveydentila, materiaalin oikeellisuus, käytetyn median laatu jne.). Jos monikerroksinen kerros ylittyy, sen pinnalla voi olla soluja, joiden apoptoosi-ilmiöt eivät sovi transplantaatioon. Petrimaljat, jotka on kasvatettu ne keratinosyyttien (IPC) monikerroksisten kerrosten kerrosten päälle, toimitetaan klinikalle erikoisastioissa lämpötilassa, joka ei ole alle + 15 ° C.

Modifioitu Greenin menetelmä IPC: n kasvattamiseksi

Haavapäällystystyössä käytimme monikerroksista nokkapyörää, joka hylkäsi polypore-kalvot, joiden kanssa aloimme kokeilla rotilla. Täten monikerroksiset keratinosyyttikerrokset kasvatettiin meille prefatilla ja steriilillä batisteillä, vaikka se ei myöskään ole optimaalinen haavan peittäminen.

Vapaaehtoisille suoritettiin kliiniset tutkimukset noudattaen välttämättömiä eettisiä normeja: sopimuksen allekirjoittaminen ja tietoinen suostumus.

1. Sovellettiin omien (autologisten) ja pankkien solujen (allogeenisten) keratinosyyttien viljelmää.
2. Omat keratinosyytit saatiin potilaan olkapäästä leikattua ihon palas- ta.
3. Terävyyden dermabrasion käyttö suoritettiin termoelementtien, pyörivien levyjen ja erbium-laserin avulla.
4. Normotrofisten, hypotrofisten ja hypertrofisten arpia saaneiden potilaiden ryhmät otettiin.

Teknologiaprosessi solutekniikan soveltamiseksi ihon arpien tyypin parantamiseksi koostui seuraavista vaiheista:

1. Potilaiden valinta.
2. Selitä hoidon ydin, odotettujen tulosten saavuttamisaika, sopimuksen allekirjoittaminen ja tietoinen suostumus.
3. Potilaiden nimittäminen 2-3 viikkoa ennen leikkausta selmevit 1 t. 3 kertaa päivässä, zinkteral on 1t. 3 kertaa päivässä.
4. Ottaen 2,0 cm pitkä ja 0,7-1,0 cm leveä ihon lantion sisäpinnasta korkea, melkein pohjalla kainaloalueella autologisten keratinosyyttien saamiseksi.
5. Jos potilaat kieltäytyvät eristämästä omaa keratinosyyttiään mahdollisuuden saada lineaarinen arpi lantion sisäpinnalla, solumateriaali otettiin solupankilta (allogeeniset keratinosyytit).
6. Keratinosyytit eristettiin ja kasvatettiin laboratorion olosuhteissa, jotka on sertifioitu tämän tyyppiselle työlle.
7. Saatuaan riittävän siirrettävän IPC: n, kirurgian päiväkirjaa hoidettiin klinikalla, jossa materiaali vietiin erikoispakkauksiin petrimaljoissa.
8. Dermabrasion toiminta suoritetaan pötsin hemostaasin maanpinnan pestiin steriilillä suolaliuoksella, kuivattiin, minkä jälkeen se istutetaan steriiliin IPC batisti "solut alas." Eli solut, jotka olivat ylempänä MIC: ssä, olivat pienemmät, kiillotetun pinnan vieressä.
9. Yläosaan asetettiin steriili kalvo, joka kiinnitettiin iholle joustavalla sidoksella tai Omnifix-elastisella nauhahihnalla. Kalvon sijaan voidaan käyttää myös silikonia, kuten Mepitel, Mepiform, silikoni-geelilevyjä, väljättömiä haavapinnoitteita.

5-7 päivän kuluttua kalvo tai silikonipäällyste poistetaan. Tänä aikana kaikkien keratinosyyttien on ryövättävä kiillotettuun arpiin ja kiinnitettävä sen pinnalle.

10. Kalvon ja silikonipinnoitteen yhteydessä syntynyt märkä ympäristö vaikuttaa aktiivisesti tähän. Tätä kohtaa jäljelle jäävä baptisti voidaan kyllästää kuriosilla tai kitosaanimelillä. Tämän seurauksena toinen päivä muodostuu tiheä kuori, joka on potilaan mukavuuden vuoksi parempi korjata elastisella, ilmanläpäisevällä kipsi, esimerkiksi Omnifix. Hengittävä kuori sallii hiljattain muodostuneen ihon erottavan ja muuttuvan kypsiksi.

Riippuen arven tyypistä ja hionnasta, kastike hylätään 8-10 päivän kuluttua. Tällä iholla on 30-40% enemmän solukerroksia kuin normaalissa ihossa. Pohjamembraania ei muodostu. Sakeutetun epidermiksen keratinosyytit vapauttavat biologisesti aktiivisten molekyylien massan arpeuskudokseen.

Terävyyden bioteknologian hoidon onnistuminen riippuu pitkälti siitä, miten ne hoidetaan postoperatiivisessa vaiheessa. Soluviljelmät ovat "hellävaraisia" haavan kantta ja varhaisvaiheissa siirron jälkeen BMD voidaan helposti irrottaa taustalla olevista kudoksista. Siksi potilaita kehotetaan hoitamaan arpi leikkauksen jälkeen. 8-9 kuukautta, älä hiero ja käytä helposti kylmää keitettyä vettä, jotta vältät repimästä ohuen, äskettäin syntyneen ihon, jolla ei ole tiukkaa otetta taustalla olevilla kudoksilla.

Huom.

Ennen leikkausta ja sen aikana dermabraasiota halogenoitujen hapettimien ja säilöntäaineita (yodopiron, sulyodopiron, iodinol, yodinat, klooriheksidiini, vetyperoksidi) on sallittu ennen siirron kletok- täysin vasta johtuen niiden sytotoksisia vaikutuksia. Myrkylliset soluihin ovat myös metyleenisinisiä. Loistava vihreä.

Infektioiden välttämiseksi erityisesti hypertrofisten arpia käytettäessä on mahdollista käsitellä toimintakenttää neomysiinisulfaatin, polymyksiinin tai gentamysiinin kanssa. Ne eivät aiheuta sytotoksisia vaikutuksia keratinosyytteihin.

Tämän hoidon seurauksena saavutetaan kolmoisvaikutus.

1. Puhun pinnan tasaus.
2. Luo yläpuolinen kerros uudesta epidermiksestä, tavallinen paksuus.
3. Muuntaminen arpikudoksen dermopodobnuyu vaikutuksesta sytokiinien, kasvutekijöiden ja muiden bioaktiivisten molekyylien erittävät siirretyille soluille ja stimuloitujen keratinosyyttien ne, fibroblastit ja makrofagit.

Hirvi tuntuu vähäisemmäksi, elastisemmaksi, huokoset näkyvät siinä, pehmeät hiukset, pigmentaatio voidaan palauttaa johtuen melanosyyttien läsnäolosta MPC: ssä.

Kuitenkin kaikki nämä positiiviset hetket keuhkopussissa eivät tule välittömästi. Tältä osin potilaita on varoitettava. Että heikkokudoksen transformointi ihoon on hidas ja tällaisen hoidon optimaalinen tulos voidaan odottaa aikaisintaan 10-14 kuukautta. Välittömästi kun kastike hylätään, kiillotetuilla pinnoilla on voimakas polykromi, sitä kirkkaampi jauhaminen on. Vähiten iho-oireita ilmenee, kun normaali-arpien hionta erbium-laserilla tapahtuu. Hoitojen ja ympäröivän ihon väri palautettiin 3-8 viikon aikana. Huolimatta tällaisista varotoimista, joskus on postoperatiivinen hyperpigmentaatio, joka voi jatkua itsenäisesti useita kuukausia.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7], [8], [9], [10], [11]